Определение антиокислительной активности (АОА) плазмы крови.  

Реактивы; 0,25 моль/л фосфатный буфер, pH 7,4.

4. г К2НРО4 • ЗН2О — в 100 мл дистиллированной воды. К 81 мл второго раствора приливают 19 мл первого раствора и устанавливают нужное значение pH с помощью рН-метра. Затем раствор доводят до 200 мл дистиллированной водой;

0,8 ммоль/л водный раствор 2,6-дихлорфенолиндофенола в окисленной форме. Для этого 11,6 мл 2,6-ДХФИФ растворяют в 50 мл дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед анализами.

2. ммоль/л раствор закисного сернокислого железа. 44,5 г Ре504 • 7Н20 растворяют в 50 мл дистиллированной воды. Раствор готовят непосредственно перед анализами.

Оборудование: спектрофотометр с термостатируемой кюветой или спектрофотометр «Спекол» с термостатируемой кюветой; ультратермостат; баня водяная; весы аналитические; колбы мерные; пипетки измерительные; микропипетки или микрошприц на 10 и 20 мкл.

Ход определения. В термостатируемую кювету последовательно добавляют 0,5 мл фосфатного буфера (pH 7,4), 0,15 мл раствора 2,6-ДХФИФ, 0,15 мл раствора закисного сернокислого железа и быстро перемешивают. Все растворы должны иметь температуру 37 °С. Сразу после перемешивания быстро добавляют 10 или 20 мкл плазмы крови, перемешивают и через каждые 30 с (по секундомеру) после добавления плазмы на протяжении 5 мин измеряют оптическую ПЛОТНОСТЬ при 600 НМ против ВОДЫ (^5оп)-

Определяют оптическую плотность при 600 нм инкубационной среды, в которой 2,6-ДХФИФ окислен полностью. Для этого в кювету добавляют те же компоненты, но вместо раствора Ре504 и пробы добавляют равные им объемы дистиллированной воды (А«акс)'

Расчет результатов начинают с определения констант скоростей окисления 2,6-ДХФИФ в контроле (А^от-р) и опыте (Коп) по формулам

V _ 1пАпах - 1п(^шах- ^5к) у _ 1пАпах- ^П(^шах- -®5оп)

АКОНТр              д              И ЛОП              д              gt;

где 1п — логарифм натуральный (положительный).

Рассчитывают константу ингибирования (Ки) плазмой крови окисления 2,6-ДХФИФ, являющуюся показателем ее антиокисли- тельной активности по формуле

Г _ *к-*оп Аи              С~’

где Кк — антиокислительная активность плазмы крови, мл • мин-1; Кк — константа скорости окисления 2,6-ДХФИФ в контроле; Коп — константа скорости окисления 2,6-ДХФИФ в опыте; С — концентрация плазмы в инкубационной смеси, мг/л.

Примечания.

Клиническое значение. АОА крови свидетельствует

о              суммарной защите организма от токсичных для структур клеточных мембран и функциональной активности белков — ферментов продуктов ПОЛ. Повышение АОА крови свидетельствует о высокой способности организма противостоять воздействию факторов, активизирующих свободнорадикальное окисление липидов; снижение, наоборот, указывает на уменьшение его антиокислитель- ной защиты.

Антиокислительная активность плазмы крови у животных колеблется от 0,8 до 2,5, в том числе у кур от 0,2 до 0,5 л х мин-1 • 10 .

Источник: 11.