Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.  

Реактивы: 0,4 моль/л ацетатный буфер, pH 5,5.

1,5%-ный раствор калия роданида;

буферно-субстратная смесь: 10 мг парафенилендиамина гидрохлорида растворяют в 20 мл ацетатного буфера, pH 5,5. Готовят в день проведения анализов;

10 ммоль/л раствор бензохинона. 10,8 мг бензохинона, высушенного в эксикаторе до постоянной массы, растворяют в 10 мл дистиллированной воды.

Оборудование: спектрофотометр или ФЭК; баня водяная; секундомер; весы аналитические; пробирки химические; пипетки с делениями разные.

Ход определения. В две пробирки вносят по 0,1 мл сыворотки крови, приливают по 1 мл буферно-субстратной смеси и инкубируют в водяной бане при 37 °С в течение 5 мин. Не вынимая пробирок из водяной бани, в одну из них (контрольную) приливают 2 мл охлажденного до 0—4 °С раствора калия роданида. Ровно через 10 мин (по секундомеру) приливают во вторую (опытную) пробирку 2 мл охлажденного раствора калия роданида и обе пробирки вынимают из бани.

Измеряют оптическую плотность опытной пробы против контрольной на спектрофотометре при 530 нм в кюветах с ходом луча 10 мм или на ФЭКе с зеленым фильтром.

Для построения калибровочного графика из свежеприготовленного раствора бензохинона концентрацией 10 ммоль/л готовят разведения стандартных растворов в интервале концентраций от 0,5 до 5,0 ммоль/л. Затем к 0,1 мл каждого стандартного раствора добавляют по 1 мл буферно-субстратной смеси и оставляют при комнатной температуре на 10 мин.

Ферроксидазную активность церулоплазмина рассчитывают по формуле

А = X/t,

где А — активность церулоплазмина, мкмоль/л бензохинона/л ¦ мин; X — количество бензохинона, найденное по калибровочной кривой, ммоль/л; t — разница времени инкубации контрольной и опытной проб, мин (10 мин).

Примечания. 1. Сыворотка крови должна быть без гемолиза.

2. Сыворотку можно хранить в течение 1 нед при температуре 0—4 °С.

Клиническое значение. Церулоплазмин (феррок- сидаза КФ 1.16.3.1) — медьсодержащий белок, который в крови, подобно супероксиддисмутазе (СОД), катализирует реакцию дис- мутации (превращения) свободнорадикальных форм кислорода

(02 ), предохраняя таким образом от их повреждающего действия

липосодержащие биоструктуры. И хотя эффективность церулоплазмина в отношении связывания супероксиданиона оценивают примерно в 100 раз ниже, чем у СОД, в настоящее время он рассматривается в качестве основного антиоксиданта плазмы крови. Как белок церулоплазмин обладает высокой стабильностью к токсическому действию супероксидов даже в условиях интенсивной генерации активных форм кислорода. Церулоплазмин обладает как специфической, так и неспецифической антиоксидантной активностью.

Клинические наблюдения показывают, что содержание церулоплазмина возрастает при хроническом холестатическом гепатите (в

8. раза) и при первичном билиарном циррозе (в 2 раза), тогда как активность СОД в этих случаях снижается на 23—25 %.

У здоровых животных содержание в крови церулоплазмина колеблется от 150 до 550, в том числе у кур от 50 до 120 мкмоль бензохинона/л • мин.

Источники: 3, 11, 70.