Определение витамина С в плазме крови.  

Реактивы: 5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты (ТХУ).

40%-ный раствор ТХУ. 40 г ТХУ растворяют в 60 мл дистиллированной воды;

3%-ный раствор железа хлорного (РеС1з). 1,5 г РеС1з растворяют в 50 мл дистиллированной воды. Хранят не более 3 сут; 4

1%-ный раствор а,а'-дипиридила. В воде а,а'-дипиридил растворяется плохо, поэтому навеску его необходимо смочить 96%-ным этиловым спиртом. К 0,5 г а,а'-дипиридила приливают 4 мл спирта, а затем в мерной колбе на 50 мл доливают дистиллированной водой до метки;

85%-ная фосфорная кислота (орто);

аскорбиновая кислота.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; центрифуга; центрифужные пробирки; мерные колбы на 50 и 100 мл.

Ход определения. К 2 мл плазмы крови добавляют 0,3 мл охлажденного 40%-ного раствора ТХУ, перемешивают стеклянной палочкой и оставляют на 10 мин на холоде (в воде со льдом) с целью более полной денатурации белков. Центрифугируют 20 мин при 2000 мин-1. К 1 мл надосадочной жидкости прибавляют 0,5 мл бидистиллированной воды, 0,1 мл 85%-ного раствора фосфорной кислоты (орто), 0,8 мл 1%-ного раствора а,а'-дипири- дила и 0,1 мл 3%-ного раствора БеСИз. Содержимое пробирки после добавления каждого реактива тщательно перемешивают и оставляют на 30 мин для развития окраски. Окраска стабильна в течение 1 сут.

По истечении 30 мин пробы центрифугируют при 2000 мин-1 и колориметрируют на ФЭКе при длине волны 525 нм (зеленый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 5 мм против контрольной пробы (вместо надосадочной жидкости берут дистиллированную воду, а затем поступают так же, как с опытной пробой).

Расчет содержания витамина С ведут с помощью калибровочного графика. 33,3 г аскорбиновой кислоты растворяют в 100 мл 5%-ного раствора ТХУ.

Перед колориметрированием пробы центрифугируют 5 мин при 2000 мин . Полученные результаты изображают графически на миллиметровой бумаге.

Примечания. 1. Стандартные растворы аскорбиновой кислоты нестойки. Их готовят непосредственно перед определением. 2. Содержание витамина С в плазме крови при ее хранении снижается. 3. Определять количество витамина С необходимо в свежей плазме, отделенной от форменных элементов в течение 4 ч после отбора проб крови.

Источники: 44, 60.

Клиническое значение. Аскорбиновая кислота участвует в различных обменных реакциях: гидроксилирование проли- на при синтезе коллагена: превращение 3,4-диоксифенилэтилами- на в норадреналин; превращение кортикостероидов и трансферина и т. д. Всасывается она в желудочно-кишечном тракте, главным образом в тонком кишечнике. Уровень аскорбиновой кислоты в сыворотке крови животных колеблется в пределах 0,2—1,5 мг%. В плазме крови он несколько выше, чем в сыворотке. Снижение содержания в сыворотке крови до 0,3—0,4 мг% и ниже сопровождается клиническими симптомами гиповитаминоза.