МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ВИТАМИНОВ  

Определение витамина А и каротина в сыворотке крови по Бес- сею в модификации В. И. Левченко и сотр. Принцип. Метод основан на щелочном гидролизе и экстракции витамина А и каротина из сыворотки крови, молозива (молока) малолетучими растворителями и последующем спектрофотометрическом измерении поглощения света раствором (при длине волны 328 нм для витамина А и 460 нм для каротина) до и после разрушения витамина А ультрафиолетовыми лучами.

Реактивы: раствор калия гидроксида 1 моль/л в 96%-ном этиловом спирте. К 5,6 г КОН добавляют 6 мл дистиллированной воды, растворяют и доводят объем до 100 мл этанолом, тщательно перемешивают (или берут 1 объем 1 н. КОН и 10 объемов 96%-ного этанола). Реактив готовят перед работой;

ксилол-октановая смесь (1 : 1, х. ч.). В необходимых случаях ксилол перегоняют. Реактив готовят за несколько часов до начала анализа.

Оборудование: спектрофотометр СФ-46, СФ-16 или фотоэлектроколориметр КФК-2, КФК-3; ртутно-кварцевая лампа ДРТ-400; вентилятор настольный; водяная баня; пробирки из стекла «пирекс», пропускающие ультрафиолетовые лучи с притертыми пробками (55 • 8 мм); пипетки с резиновыми баллончиками или со шприцем для отсасывания жидкости.

Ход определения.

Фотометрию проводят в кювете с толщиной слоя 10 мм, а для контроля используют ксилол-октановую смесь. На СФ-46 каротин определяют при длине волны 460 нм, ретинол — при 328 нм; на КФК-2 или КФК-3 при длине волн соответственно 440 и 315 нм.

Оптическую плотность смеси для определения витамина А проводят до и после обработки пробирок ультрафиолетовыми лучами в течение 50 мин. Для этого пробирки из стекла «пирекс» плотно закрывают притертыми стеклянными пробками и ставят на расстояние 15—20 см от лампы ДРТ-400 или ПРК-5. Для охлаждения пробирок тотчас включают два настенных вентилятора. По разнице оптической плотности смеси, полученной при фотометрии до и после облучения ультрафиолетовыми лучами, находят концентрацию витамина А в сыворотке крови (молозиве).

Расчет ведут при определении витамина А на СФ-16 или СФ-46 по формуле

А = (Е, - Е$ ¦ 1274, а при определении на КФК-2 или КФК-3 по формуле

А = (Е1- Е2) • 1500,

где А — концентрация витамина А, мкг/100 мл; Е\ — экстинкция раствора до воздействия волной 315 нм; Е2 — экстинкция раствора после воздействия волной 315 нм; 1274 и 1500 — коэффициенты для определения витамина А.

Концентрация каротина при определении на СФ-16 или СФ-46 равна Е• 762, а при определении на КФК-2 или КФК-3 — Е' 850,

где Е — экстинкция раствора при воздействии длины волны 440 нм; 762 и 850 — коэффициенты для определения каротина.

Клиническое значение.

В условиях полноценного белкового питания, хорошей обеспеченности витамином В12, а также использования антиоксидантов повышается активность каротиндиоксигеназы, увеличивается количество молекул каротина, расщепляющихся по центру, в 1,5—2 раза возрастает эффективность синтеза витамина А.

Действие витамина А проявляется в обеспечении нормального роста и развития животных, дифференцировании эпителиальной и костной тканей, регуляции обмена веществ.

Содержание витамина А в сыворотке крови у клинически здоровых телят 5—10-дневного возраста составляет 9—15 мкг/100 мл, у телят месячного возраста 12,5—25; у 3-месячных — 15—35; у молодняка старше 3-месячного возраста 30—80; у коров в стойловый период 25—80, в пастбищный период 40—150; у свиней 20—50; у овец и лошадей 15—25 мкг/100 мл. В молозиве коров первого удоя в стойловый период содержится 140—500 мкг/100 мл витамина А, в пастбищный период 150—580 мкг/100 мл, в молоке соответственно 30—80 и 80—210 мкг/100 мл. В желтке куриных яиц — 6—75 мкг/г.

Снижение количества витамина А в крови, печени, молозиве и молоке отмечают при недостатке каротина и витамина А в кормах, плохом усвоении их вследствие хронических заболеваний органов пищеварения и печени. При снижении в крови витамина А ниже 10 мкг%, а в печени ниже 50 мкг% у взрослых животных появляются симптомы гиповитаминоза, задерживается спермогенез, сперматозоиды становятся малоподвижными, теряют оплодотворяющую способность, нарушается строение и функция эпителия органов дыхания, пищеварения, репродуктивная способность самок, появляются респираторные болезни и др.