Определение содержания Р-липопротеидов в сыворотке (плазме) крови (по Бурштейну в модификации Виноградовой).  

Важнейшей физиологической функцией отдельных ЛП (а-ЛП) является удаление избытка свободного холестерина из клеток периферических тканей и обратный транспорт их в печень, где он окисляется в желчные кислоты и с желчью через кишечник выводится из организма. Наконец, ЛП осуществляет транспорт жирорастворимых витаминов, в том числе обладающих антиоксидант- ной активностью (а- и у-токоферол, а- и Р-каротин, убихинон и др.), а также стероидные гормоны и другие БАВ.

ЛП представляют собой водорастворимые комплексы, состоящие из липидной — холестерина (ХС), триацилглицерина (ТГ), фосфоли- пидной (ФЛ) и белковой части — аполипопротеида (АПО). Соотношение белок : липид может колебаться в широких пределах. И чем больше размер ЛП, тем больше в ней липидная часть, значит, меньше относительная плотность и меньше подвижность при электрофорезе.

Структура ЛП-комплекса, его липидный состав и обмен во многом определяются природой АПО, который активирует или тормозит соответствующие ферменты.

На основе неодинаковой относительной плотности при центрифугировании в растворах разной плотности или подвижности при электрофорезе в сыворотке крови млекопитающих различают четыре класса ЛП (табл. 23): хил омикроны (ХМ) — самый крупный по величине и самый легкий по относительной плотности класс. При центрифугировании флотирует по поверхности (^ lt; 1,006), второй класс — ЛП очень низкой плотности (ЛПОНП, й = = 1,006—1,019) или пре-В-ЛП.

При электрофорезе ХМ остаются на старте, подобно у-глобули- нам, ЛПОНП, ЛПНП и ЛПВП занимают положение р, оц- и

23. Состав и свойства липопротеїщов

а2-глобулинов соответственно. У птиц в сыворотке крови содержится только три класса ЛП, ХМ у них не обнаружены.

С изменением физиологического состояния организма животных меняется и роль отдельных классов ЛП в обмене липидов. Так, отмечено повышение концентрации ЛПОНП в сыворотке крови высокопродуктивных и жирномолочных коров, а у кур — в период пика яйцекладки.

В лабораторной практике из-за отсутствия доступных методов исследований роль ЛП в обмене веществ оценивают главным образом по сумме р-липопротеидов (ЛПОНП + ЛПНП).

Принцип. В основе метода лежит реакция избирательного осаждения р-липопротеидов декстрина сульфатом или гепарином в присутствии двухвалентных катионов.

Реактивы: 1,025 моль/л раствор МпС12; 1 %-ный раствор гепарина (1 мл должен содержать 1000 МЕ; продажный гепарин, содержащий 25 ООО МЕ в 5 мл, разводят дистиллированной водой 1 : 4).

Оборудование: ФЭК или спектрофотометр; пробирки; штатив для пробирок; стеклянные палочки; пипетки.

Ход определения. 2 мл 0,025 моль/л раствора МпС12 вносят в пробирку и прибавляют 0,2 мл сыворотки крови, перемешивают и определяют оптическую плотность пробы (?’)) на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 0,5 см при длине волны 700—720 нм (красный светофильтр) против воды. Затем в кювету добавляют 0,04 мл 1%-ного раствора гепарина. Пробы тщательно перемешивают стеклянной палочкой и строго через 10 мин повторяют фото- метрирование ()- Разница ?2 — Е\ приходится на оптическую плотность, обусловленную осадком р-липопротеидами. Умножая ее на коэффициент 1164 (определен расчетным способом), получают количество р-липопротеидов в сыворотке крови в мг%.

Примечание. Кровь берут натощак. Сыворотка сохраняется 2 сут.

Клиническое значение. Основная часть липидов сыворотки крови представлена в виде гидрофильных комплексов а- и р-липопротеидов. На долю р-липопротеидов приходится 60—70 % всех липидов сыворотки крови. Печень является не только местом синтеза, но и активного катаболизма ЛП, а следовательно, и выведения из организма продуктов обмена липидов (холестерина). Поэтому определение их концентрации имеет важное клинико-физиологическое значение.

Повышение концентрации р-липопротеидов в сыворотке крови отмечается при скармливании высокожировых кормов, при острых гепатитах, диабете, ожирении, гипотериозе, желтухах; снижение — чаще всего при длительном дефиците в рационе белка (протеина) или незаменимых липотропных аминокислот, когда нарушается синтез апопротеида.