ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Морфология и химический состав. Возбудитель болезни - РНК-содержащий вирус размером 45-65 нм. Он имеет наружную оболочку и чувствителен к липидным растворителям. По физико-химическим свойствам напоминает представителей семейства тогавирусов, рода аргеривирусов (вирус артериита лошадей) (15).

Вирусы РРСС, выделенные в Европе (агент Лелистад) и в США (VR-2332), несколько отличаются по биологическим свойствам, хотя и имеют перекрестные серологические связи. Так, единственной системой культивирования вируса Лелистад являются альвеолярные макрофаги свиней. Вирус РРСС в США культивируют в клеточной системе перевиваемой линии клеток Borhrin gerlh 2621, хотя и с лучшим успехом культивируются в легочных макрофагах. Возбудитель РРСС морфологически схож с вирусом лактатдегидрогеназы мышей, но не имеет перекрестных серологических связей.

В культурах легочных макрофагов вирус РРСС вызывает ЦПИ в виде округления клеток с последующим пикнозом и отделением от монослоя в течение 2-4 сут (34,36). Вирус содержит РНК и оболочку, способен реплицироваться в макрофагах и Проходить через плаценту, заражая плод, может длительно персистировать в организме животного и вызывать повторно иммуносупрессию. Передается при прямом контакте и респираторно. Быстро распространялся на фермах Франции (12, 43).

Вирус РРСС проникает трансплацентарно, на что указывает обнаружение возбудителя и специфических АТ у мертворожденных плодов и живых ослабленных поросят до первого приема молозива (45). Plagemann (40) предполагает, что вирус РРСС относится к новой группе вирусов, напоминающих тоговирусы, но имеющую положительно закрученную РНК и по структуре сходных с корона- н торовирусами.

Устойчивость. Вирус чувствителен к изменению pH среды. Оптимум pH от 5 до 7. Benfield et Welson (15) сообщали, что вирус SIRS, выделенный в США, сохраняет инфекционность в гомогенатах пораженных легких при -70°С в течение 1,5 лет, при +4°С - 1 мес, при 37°С - 2-х сут. При температуре 55°С он инактивируется в течение 45 мин. Friey et.al. (22) выделили вирус из патматериала, хранившегося в течение 3-х лет в замороженном состоянии. АГ свойства. Обследовано 4 свиноводческие фермы на наличие АТ к вирусу РРСС с помощью ИФА в течение 12 нед после опороса. Титр АТ у свиноматок сопоставляли с титром материнских АТ у поросят в возрасте 2 нед. Материнские АТ, выявляли у поросят в течение 4-10 ВНА обнаружили через 12 дн после заражения или 18 дн после контакта с бальными животными. Максимальных титров (индекс нейтрализации >3,5 они достигали на 40- 50-е суг после заражения и сохранялись до 120 дн (срок наблюдений) (1). Изучен характер инфекции, вызванной вирусом репродуктивного и респираторного синдрома на свиноводческих фермах в Бельгии (26).

Экспериментальная инфекция. Тегрвіга и др.. (1991) проводили опыты по заражению культуральным вирусом РРСС 8-ми свиноматок на 84-й дн супоросности (45). Только у 2-х свиноматок наблюдали 1-дн повышение температуры тела до 39,6°С. У 2-х - покраснение кожи ушей и учащенное дыхание. Одна свиноматка абортировала на 10-й дн супоросности и принесла 7 мертвых и 4 живых слаборазвитых поросят. Две другие опоросились на 116-й и 117-й дн супоросности и в пометах обнаружили 10 живых и 19 мертворожденных поросят, из которых 5 были мумифицированными. Оставшиеся 5 свиноматок опоросились на 113-115-й дн супоросности без репродуктивных нарушений. В пометах было 58 поросят, многие из которых были слаборазвитыми и 26 из них (40%) пали в течение 1-й нед жизни. Вирус РРСС был выделен от 31 поросенка (30% инфицированностн).

При интратрахеальном и внутримышечном заражениях на 2-5-е сут у инфицированных подсвинков отмечалось незначительное (на 0,5-1,5°С) повышение температуры тела.

При интраназальном заражении вируссодержащей суспензией поросят 4-нед возраста температура тела их повышалась до 40,5°С, удерживаясь на этом уровне 3 дн; отмечалось учащенное дыхание, отказ от корма и общее угнетение. Подкожное и внутримышечное введение вируссодержащего материала не вызывало у взрослых белых мышей никакой видимой реакции. Однако та же суспензия после внутримозгового введения белым мышам вызывала появление нервнопаралитических признаков и их гибель. С 3-го пассажа гибель мышей наступала через 24 ч. Вирус № 9-181-93, адаптированный к белым мышам, вызывал специфическое ЦПД. В 1995 г. в Курской области был выделен вирус РРСС (шт. № 9-181-93), который не вызывал Г А эритроцитов и Г Ад. У животных, зараженных европейским стандартным шт. “Лелистад” вируса РРСС клинических признаков не отмечалось (1).

Культивирование. Вирус РРСС успешно репродуцируется в легочных альвеолярных макрофагах (АМФ) поросят. Для получения АМФ используют 4-6-нед поросят, свободных от патогенной микрофлоры ферм. АМФ выделяли 2-кратным промыванием отпрепарированных и изолированных легких забуференным физраствором, содержащим антибиотики (пенициллин, стрептомицин, неомицин и амфотерицин), который нагнетали через трахею с помощью автоматического шприца с иглой (около 500 мл).

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

С эпизоотической точки зрения важен путь распространения инфекции. В частности, в декабре 1990 г. болезнь зарегистрирована в Нидерландах. Свиноводство в этой стране - одно из наиболее концентрированных в мире, и естественно, болезнь очень быстро распространилась респираторным путём, весьма возможно, в потоках воздуха. Предположительно, факторами передачи возбудителя могли быть и птицы, а также люди и автомобили (если эти объекты были в контакте с инфекционным агентом) (23).

Большинство сельскохозяйственных выставок и ярмарок по продаже свинопоголовья в 1991

г.

Отмеченное прямо связанно с производственными показателями поражённых РРСС племенных ферм свиней. На небольших фермах на 50-200 свиноматок в период острого течения болезни недополучают более 50% поросят. При этом потери на одну свиноматку составляли около 250 долларов, а в Англии - 102 фунта стерлингов (42). В последующем потери на репродукции могут снижаться, но у животных на откорме отмечается замедление роста и снижение продуктивности. Хозяйства несут экономические потери в течение нескольких лет.

В нашей стране в 1991-1993 гг. в ряде хозяйств обнаружены массовые случаи абортов, рождение мёртвых и слабых поросят, респираторные расстройства. В 1993 г. в Голландию были направлены 40 проб сывороток крови от свиноматок с нарушениями репродуктивной функции из 10 хозяйств для исследования на наличие АТ к вирусу репродуктивного и респираторного синдрома. Во всех 10 обследованных хозяйствах обнаружены положительно реагирующие свиноматки. Из 40 исследованных проб сывороток крови 38 оказались положительными, причём большая часть сывороток (72,5%) содержала специфические АТ в высоких титрах ( 1:640 и выше). Высокий процент положительных сывороток свидетельствует о широкой циркуляции вируса в исследуемых свиноводческих хозяйствах.

Вирус РРСС, вероятно, обладает иммунодепрессивными свойствами. Американскими исследователями установлено уменьшение числа альвеолярных макрофагов и нарушение их функции у инфицированных поросят.

ДИАГНОСТИКА

Диагноз на РРСС ставят на основании клинико-эпизоотологических данных и результатов лабораторных исследований. Для выделения вируса используют сыворотку или плазму крови больных и павших поросят, пробы лёгких, селезёнки, плевральной и перикардиальной жидкости. Выделение вируса проводят в культурах альвеолярных макрофагов, полученных от молодых (6-8 нед) СПФ-поросят. Успех голландских учёных и объясняется прежде всего тем, что онн использовали эту культуру, в то время как культуры клеток РК-2, РК-15 н К-6 оказались не чувствительными для выделения возбудителя. Идентификацию возбудителя проводят по физико-химическим и серологическим свойствам. Из серологических методов используют вначале непрямой метод ИФ и прямой метод ИФА. В США для идентификации возбудителя использовали PH, разработанную с этим вирусом в университете штата Миннесота, а также ИФ и ИФА, разработанные в национальной лаборатории Ames в шт. Айова. Во Франции разработан непрямой метод ИФА для обнаружения специфических АТ. Сероконверсия в диагностических титрах (1:20 и выше) развивается к 14-му дн после экспериментального инфицирования, а к 28-му дн титры антител накапливаются до 1:1280 (11). Разработана методика очистки и концентрирования культурального вируса РРСС, репродуцированного в культуре клеток МАРС-145 и FL. Предварительно вируссодержащая суспензия очищается от балластных белков низкоскоростным центрифугированием, затем концентрируется 2-кратным осаждением ПЭГ мол.м. 6000 и очищается высокоскоростным центрифугированием (7000 мин'1 в течение 6 ч). В градиенте плотности CsCl-сахарозы материал концентрировали в 100 раз. Очистка составляла 96,5%. Все этапы подготовки препаратов контролировали по активности в ИФА. Высокоспецифичные активные препараты АГ вируса РРСС используют для изготовления АТ диагностикумов для ИФА (6а). Метод непрямой ИФА более простой и его можно использовать в полевых условиях. Достаточно исследовать из стада 10 проб сывороток, (лучше парных), чтобы с уверенностью поставить лабораторный диагноз (25).

В Англии практикуется сбор из 12-15 пар сывороток от подозреваемого стада (34, 40). Служба диагностики на РРСС в этой стране действует с апреля 1992 г. Исследовано уже 118 стад н было выявлено 31 стадо, положительно реагирующее на РРСС (40). При серологическом исследовании ложноположительные реакции, как правило, отсутствуют, хотя ложноотрицательные являются обычными и достигают 25% (34). Benfield et. al. (15) сообщали об использовании монАТ в ИФ при идентификации европейских, американских и канадских штаммов возбудителя РРСС. В РФ разработан твердофазный ИФА, для проведения диагностики РРСС (7, 8), составлены наборы диагностикумов для выявления РРСС и специфических АТ (6а). МонАТ к вирусу РРСС могут быть использованы как для выявления АГ вируса РРСС в патологическом материале, так и для определения АТ в сыворотках крови свиней, так как они дают более специфическую реакцию по сравнению с полиАТ (4).

При дифференциальной диагностике необходимо исключить вирусные и бактериальные болезни, протекающие с нарушениями в репродуктивных системах, а также отравления. Исключают прежде всего АЧС, КЧС, Б А, грипп свиней, ЭМК, парвовирусную болезнь, ТГЭ, лептоспироз и хламидиоз. Характерной особенностью этой болезни является обострение вторичных и хронически протекающих инфекций, возбудители которых могут скрытно циркулировать в пораженных стадах свиней. Эго ещё более усложняет проведение лабораторной дифференциальной диагностики.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

После переболевания большая часть свиноматок оказываются иммунными к повторному инфицированию. АТ к вирусу РРСС, выявляемые в ИФА, могут персистировать в течение года. При достаточно пессимистичном отношении к созданию средств специфической профи лактики РРСС появляются предпосылки решения данного вопроса. Так выдан патент ЕРА 95200877.9 Akzo Nobel (Нидерланды) на европейские штаммы вируса репродуктивного респираторного синдрома свиней, используемые для создания вакцин (10). О механизме развития иммунитета известно крайне мало. В Англии также ведется разработка вакцин.

Меры борьбы. Специфических средств лечения при РРСС нет. Отсутствуют также средства специфической профилактики (21). Лабораторная диагностика болезни затруднена прежде всего из-за необходимости проведения большого спектра дифференциальных диагностических исследований. Поэтому при возникновении болезни в ранее благополучной стране необходимо принятие решений проблемы в национальном масштабе: полностью запретить вывоз свиней, туш и навоза из подозрительных ферм и свинохозяйств; наложить ограничения по передвижению свинопоголовья в течение 8 нед после последнего случая выздоровления.

Свинопоголовье, предназначенное на экспорт, надо перевозить в специально оборудованных транспортных средствах. Подозрительный инфицированный материал (плаценту, плоды и мертворождённых поросят) необходимо уничтожать. Убирать, дезинфицировать помещения и места опороса свиноматок. Обязательно должны быть дезинфицированы коврики на входе свиноводческих помещений.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1.БайбиковТ.З и др. Тез. Всерос. н-пр. конф, ВНИИЗЖ, Владимир,1995 :185. 2.Балашова Е.А. и др. Тез. докл. Всерос. н-пр. конф, Владимир, 1995 :96. З.Глобенко Л.А. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф, Владимир, 1995 :52. 4.Глобенко Л.А. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. Владимир, 1995 :133. 5.Гусев A.A. и др. Тез. докл. н.-пр. конф, Владимир, 1995 :95. б.Касюк В.И. и др. Ветеринария, 1991, 7 :7. ба.КомаловаН.Е. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. Владимир, 1995. 7.Мищенко В.А. и др. Тез. докл. н.-пр. конф, Владимир, 1995 :53. 8.Мнщенко В.А. и др. Сб. н. труд, ВНИИЗЖ, Владимир, 1995. 9.Сухарев О.И. и др. Вет. газета, 1992. 10.Патент Eur Biotech Newslett, 1995, 210 :5. 11.Albina E. et.al. Ann Rech 199, 33, 2 :67. 12.Albina E. et.al. Bull Acad vet Fr, 1993, 66, 2 :193. 13.Baron T. et.al. Ann.Rech.1991, 23, 2 :161. 14.Beilage E. et.al. Prakt Tierarzt, 1992, 73 :62. 15.Benfield D.A. et.al. J Vet Diagn Invest, 1992, 4 .127. 16.Bautista E.M. et.al. J Vet Diagn Invest, 1993. 17.Cannon R.M. et al. Canberra, Australia, 1982, .14. 18.Collins J.E. et.al. J Vet Diagn Invest, 1992, 4 :117. 19.Cronwijk W.A.J. EEC Seminar Rep New Pig Dis, Brussel, 1991 :20. 20.DeJong M.F. et.al. :9. 21.Egbering O. Prakt Tierarztl, 1991, 72, 10 :851. 22.Frey M. et.al. Am Ass Swine Pract News, 1992, 4:31. 23.Hellwig E. Schweinzucht u Schweinemast, 1991, 39, 12 :396. 24.Hellwig E. - “ - 1991, 38, 9 :206. 25.НШ T.L. et.al. Proc Ann Meeth Am Assoc Swine Pract, 1993 :717. 26.Houben S. et.al. J Vet Med B,1995, 42, 4 :209. 27.

Jensen J. Bull OIE, 1991,103, 10 :733. 28.KefFaber K.K. Am Ass.Swine Pract Newsl, 1989, 1, 2 :1. 29.Lindhaus W. et.al. Pract Tierarztl, 1991, 72, 5 :423. 30.Leyk W. Sem of new Pig Dis, Brussels, 1991. 31.Loula T. et.al. Practice, 1991, 12, 1 :23. 32.Loula T. Am Ass Swine Pract Newsl, 1992, 4 :45. 33.Mengeling W.L. et.al. Proc.George A. Young Swine Conf., Lincoln, NE, 1992

:66. 34.Meulenberg J.J.M. et.al. Virol, 1993, 192 :62. 35.Morrison R.B. et.al. J Vet Diagn Invest, 1992, 4 :186. 36,Opedal A. Hog Farm Managment, 1991, 28, 10 :16. 37.Owen Wj. et.al. Proc Annu Mtd Livestock Concervation Inst, Peoria, IL, 1992. 38.Patjn D.J. et.al. Vet Rec, 1991, 29. 39.Paton D.J. et.al. Rev Med Microbiol, 1995, 6, 2 ; 119. 40,Plagemann P.J.W. et.al. Ad Vir Res, 1992, 41 :99. 41.Plana Duran J. et.al. Abstr 2th Congr Eur Soc Vet Virol.,Uppsala Sweden, 92. 42.Pol J.M. A. et.al. Vet Q, 12991, 13 ; 137. 43.Stevenson G.W. et.al. Proc Ann Mtd Livestock Cons Ins Peoria IL, 1992. 44.Stevenson G.W. et.al. Am Ass Swine Pract Newsl, 1992, 4 :31. 45.

Terpstra C. et.al. Vet. Q. 1991, 13 :131. 46.Thornton K. et.al. Hog Farm Management, 1991, 28,

8 :24. 47.Tubbs R.S. et.al. Swine Helth and Prod, 1993, 1 .21. 48.Wensvoort G. et.al. Vet Q, 1991, 13 .121. 49,Wensvoort G. et.al. J Vet Diagn Invest, 1992, 4 :134. 50.Yoon I.Y. et.al. J Vet Diagn Invest,1992, 4 :144. 51.Zimmerman J. Proc Ann Mtg Livest Cons Inst, 1991 :121. 52.Zimmerman J. Proc Anim Meat, Livestock Convers Inst, Bloominton, MN, USA, 1991 :9