ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Морфология и химический состав. Морфологические характеристики представлены на рис. 92. Геном вируса ИЛТ имеет длину 155 тыс. п.н. и состоит из длинной уникальной последовательности 1Л (120 тыс.

Устойчивость. Вирус чувствителен к липолитическим агентам, теплу н различным дезинфектантам. Он длительно сохраняет свою активность в лиофилнзированном состоянии или при - 20-60°С. Температура 55°С разрушает вирус в течение 10-15 мин, а 38°С - за 48 ч. В вируссодержащей трахеальной слизи больного цыпленка вирус разрушается в течение 44

ч при температуре 37°С, а в ХАО при 25°С в течение 5 ч. В патологическом материале (трахее от больных кур) при температуре - 8-10°С он сохранялся более 370 дн. В замороженных тушках больных и вынуждено убитых кур, хранившихся при температуре - 10, 18, 28°С , вирус оставался активным более 19 мес, на поверхности скорлупы в условиях термостата инактивируется через 12 ч, а в зараженных птичниках сохраняется не более 9 дн. Полностью инактивируется в 1 %-ном растворе креола в течение 30 с.

Предложена система получения рекомбинантного вируса ИЛТ (22).

Препараты очищенного в градиенте плотности глицерин-тартрата вируса ИЛТ оказались более пригодными для выделения вирионной ДНК, тогда как препараты, очищенные в перколле лучше использовать в качестве специфического АГ для ИФА и получения специфических сывороток. По данным электрон ной микроскопии препараты вируса ИГГГ, очищенные в перколле, практически не содержат примесей клеточных компонентов (8).

АГ вариабельность и родство. Все птичьи герпесвирусы на основании перекрестной PH сгруппированы в 11 разных групп (26). Штаммы вируса ИЛТ различаются по вирулентности для птиц и КЭ, тропизму, скорости выделения из клеток в тканевой культуре, устойчивости при хранении, авидности, молекулярно-структурными особенностями. Иммунологических различий среди штаммов вируса ларинготрахеита не обнаружено, хотя некоторые отклонения в способности нейтрализоваться гипериммунными сыворотками описаны у штаммов различной вирулентности (20, 21, 22).

Локализация вируса. Вирус обнаруживают главным образом в дыхательных путях, в меньшем количестве в печени и селезенке. При интратрахеальном заражении 30 дн цыплят его выделяли из трахеи и носовых ходов 7 дн., при ректальном заражении находили в фабрициевой сумке и трахее в течение 3 дн. У птиц-реконвалесцентов установлено длительное вирусоносительство. Из трахеи переболевших птиц вирус выделяли 2 г. После острой фазы ИЛТ может наступить латентный период с сохранением генетического материала вируса в ДНК клеток ганглия тройничного нерва. При различных воздействиях может произойти реактивация инфекции с выделением вируса во внешнюю среду (15,16,17,18).

АГ активность. ВНА у зараженных кур появляются со 2-3 нед после заражения, титр их достигает максимума к 5-му дн и сохраняется до 8-21 мес.

Экспериментальная инфекция. Заразить восприимчивую птицу легко путем аппликации вируссодержащего материала на слизистую оболочку гортани, трахеи, глаз, носа, подглазничного синуса и клоаки. На 6-12 дн у зараженных цыплят развиваются типичные симптомы болезни. На 3-10 дн после внутритрахеальной инокуляции вируса у кур-несушек отмечаются признаки умеренного респираторного заболевания. На 4-й дн в ткани трахеи и носовой полости обнаруживается вирус. В период между 19 и 59 дн после заражения с помощью ЦПР периодически выявляется вирус. Ганглии тройничного иерва являются основным местом локализации вируса (35). У экспериментально зараженных СПФ-цыплят вакцинным шт.

Вирусовыделение. В экспериментальных условиях инфицированные птицы начинают экскрегировать вирус через 8 дн после заражения. Прединфекционный период может длиться 2 дн, а выделение вируса наблюдалось в течение 6 дн. Клинические признаки у зараженной птицы обычно появляются на 6 дн (18). В организме переболевших птиц вирус ИЛТ ,как и многие другие герпесвирусы, может находиться в латентной форме. Полевые штаммы ,как и вакцинные обладают свойством персистировать в нервной системе. Вакцинный вирус легко передается горизонтально. Поэтому при применении вакцины лучше иммунизировать всех цыплят птицефермы (20).

Культивирование. Вирус культивируется на ХАО эмбрионов кур, уток, индеек, некоторых первичных и перевиваемых культурах клеток, не развивается в эмбрионах голубей и морских птиц. На ХАО образуются фокусные поражения 2 типов: крупноузелковые с непрозрачной белой периферией и некротическим центром и мелкоузелковые - без некроза. Узелковые поражения появляются на всей поверхности ХАО, а очаговые только на месте инокуляции вируса (Рис. 94). В зараженных клетках ХАО образуются внутриядерные включения, а иногда гигантские клетки. В культурах линий СПЭВ, FJ, клеток фибробластов куриных эмбрионов, почки цыплят, утят, эмбрионов свиньи, новорожденных крольчат вирус вызывает к 3-4 дн ЦПИ, характеризующиеся округлением и зернистостью клеток, лизисом их с последующим отторжением. В клетках СПЭВ формируются цитоплазматические включения и образуются многоядерные клетки.

ГА свойства. Вирус, репродуцированный в КЭ, не обладает ГА активностью. Она проявляется иногда в случае культивирования вируса в первичной культуре почки цыплят.

ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Источники и пути передачи инфекции. Источник инфекции - больная и переболевшая ИЛТ птица, которая длительное время (свыше 2 лет) остается вирусоносителем. Вирус от больных птиц можно выделить в течение 7 дн после появления симптомов болезни, после чего отдельные переболевшие птицы остаются вирусоносителями и периодически выделяют вирус, не обязательно при этом с переходом болезни в клиническую форму. Инфицирование может происходить и половым путем. Возможна передача вируса через зараженную скорлупу яйца. В условиях инкубатора вирус сохраняет инфекционность до 96 ч. После обработки яиц парами формальдегида он погибает через 40 мин. После острой фазы инфекции может наступить латентный период с сохранением генетического материала вируса в ДНК клеток ганглия тройничного нерва. При различных воздействиях может произойти реактивация инфекции с выделением вируса во внешнюю среду. Благоприятным фактором в плане искоренения инфекции в птицеводческих хозяйствах являются высокая степень видоспецифич- ности вируса, необходимость тесного контакта кур для распространения инфекции, быстрая инактивация вируса вне организма птиц, генетическая стабильность вируса, отсутствие размножения вируса в трахее при наличии местного специфического клеточно-опосредованного иммунитета (15а, 23 а).

Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях вирус поражает кур всех возрастов. Фазаны и индейки также чувствительны к вирусу ИЛТ.

ДИАГНОСТИКА

Диагноз ставят на основании эпизоотологических данных, клинических признаков болезни, и результатов лабораторных исследований. Часто болезнь протекает атипично, характерные признаки ее слабо выражены или их нет.

Выделение вируса

Взятие и подготовка материала. Для вирусологического исследования от больных птиц берут экссудат из трахеи, от павших или вынужденно убитых в начальной фазе болезни между 2-7 дн) - слизистые оболочки гортани, трахеи, конъюнктивы, носовых ходов и кусочки легких. Материал замораживают и сохраняют при - 20°С и ниже. Для гистологических исследований материал помещают в 10%-ный раствор нейтрального формалина. Из патологического материала готовят суспензию 1:5 на растворе Хенкса или изотоническом растворе NaCl, центрифугируют при 1500-2000 мин'1 в течение 15 мин, к надосадочной жидкости добавляют по 1000 ЕД пенициллина и 500 мкг стрептомицина в расчете на 1 мл, выдерживают в течение 3-8 ч при 2-4°С. Затем используют для инокуляции КЭ, культуры клеток или молодых не иммунных к ИЛТ цыплят.

Заражение КЭ. Для каждой пробы используют по 10 эмбрионов в 9-12 дн возраста. Заражают на ХАО. Погибших в первые 24 ч после инокуляции эмбрионов не учитывают. Оставшихся живых эмбрионов на 6-8-й дн убивают. Макроскопические изменения ХАО появляются через 2,5-3 сут и достигают максимума к 5-6 дн. Штаммы вируса ИЛТ вызывают мелкоузелковые и очаговые поражения ХАО. Узелковые поражения обнаруживаются по всей поверхности ХАО, очаговые -только на месте инокуляции вируса. Необходимо учитывать, что не все штаммы вызывают гибель куриных эмбрионов на 4-6- дн. Для выявления специфических поражений необходимо провести не менее 3 пассажей, используя ХАО, суспендированную в аллантоисной жидкости предыдущего пассажа.

Выделение вируса надо подтвердить обнаружением телец-включений Зейфрида, PH, РДП, биопробой, а также ИФ и ЭМ.

Заражение культур клетск. Наиболее пригодны в данном случае культуры клеток почек эмбриона и цыплят, в которых первые изменения наблюдаются иногда уже через 24 ч после заражения, а через 48-72 ч в клеточной культуре обнаруживаются многоядерные гигантские клетки, в которых можно обнаружить внутриядерные включения.

Индикация и идентификация вируса

Обнаружение специфических телец-включений. Вирус ИЛТ размножается в эпителиальных клетках слизистой оболочки гортани, трахеи, клоаки, вызывая острое воспаление этих оболочек с образованием внутриядерных включений. Включения обнаруживаются до наступления некроза эпителия между 1-м и 5-м дн после интратрахеального заражения цыплят. В мазках из конъюнктивы включения находят через 48 ч после заражения. Ядро, содержащее включение, обьино увеличено, отмечается гиперхроматия ядерной оболочки. Включения имеют округлую форму, иногда форму диплококков и занимают 1/2 -1/3 клеточного ядра. Вокруг включения видна неокрашенная зона, что считается характерным. Болезнь можно диагностировать на основании обнаружения внутри ядерных включений. Для этого на предметных стеклах готовят мазки из соскобов эпителия слизистой оболочки, фиксируют в абсолютном метиловом спирте в течение 3-5 мин окрашивают раствором краски Гимза (1 капля краски на 1 мл дистиллированной воды) в течение 2 ч при 37°С, затем мазки промывают, обрабатывают абсолютным метиловым спиртом, снова промывают, высушивают и просматривают. В положительных случаях цитоплазма эпителиальных клеток окрашивается в бледно-голубой цвет, ядерные оболочки таких клеток более темные, внутриядерные включения четко видны, светло- красного цвета, по форме варьируют (шарообразные или колбасовидные), окружены ясно видимыми светлыми ободками. Количество их в ядре от 1 до 4. Указанный метод позволяет иногда в течение 3-4 ч диагностировать ИЛТ даже при атипичном проявлении. Вероятность обнаружения телец-включений в патологическом материале существует только в начальной фазе болезни - между 2-7 дн(11).

ИФ. Позволяет обнаружить вирусный АГ при помощи специфической флюоресцирующей сыворотки в мазках из слизистой оболочки трахеи, конъюнктивы от больных цыплят (в период острого течения болезии), из пораженной ХАО и инфицированных культур клеток. Реакцию ставят по общепринятой методике. Чаще используют прямой метод. Положительную ИФ в мазках от больной птицы наблюдают в период острого течения болезни, когда обнаруживаются внутриядерные включения и можно выделить вирус на КЭ.

Биопроба. Ставят ее на цыплятах 30-90- дн возраста путем аппликации вируссодержащего материала на слизистую оболочку гортани, трахеи, глаз, носа, подглазничного синуса, клоаки. При наличии вируса в исследуемом материале у зараженных цыплят на 6-12 дн развиваются типичные клинические признаки экспериментальной инфекции. При инокуляции материала в подглазничный синус в положительных случаях развивается синусит с отеком, выделениями из носовых ходов и слезотечением. Положительная реакция на клоачную пробу проявляется с 3-го по 8-й дн, но чаще на 4-5 дн в виде отечности слизистой оболочки фабрициевой сумки и катарального, геморрагического или фибринозного воспаления.

Наблюдение за зараженными цыплятами ведут до 14 дн. Чаще всего заражение проводят иа слизистую оболочку трахеи и клоаки, так как этот метод позволяет определить вирулентность штамма, а также провести дифференциацию от вирусов, вызывающих сходное поражение ХАО у инфицированных КЭ. При интратрахеальном заражении 4-нед цыплят вирулентным штаммом CS-1 вируса ИЛТ. Наибольший титр вируса в тканях трахеи (106 БОЕ/г) установлен на 2-4-е сут. Позднее количество вируса резко снижалось и на 7 дн его не обнаруживали, хотя антиген вируса в эпителии трахеи и в большом количестве выявляли еще на 7-8 сут с помощью ИФ.

Последнее время естественные инфекции все чаще протекают нетипично, абортивно, хронически или даже бессимптомно. Выделяемые штаммы также менее патогенны для КЭ, не всегда приводят к их гибели и даже не всегда вызывают патологические изменения на слизистых оболочках при непосредственном введении исследуемого материала.

PH. Реакцию ставят по общепринятой методике. Чаще всего в диагностической практике используют метод: - разведение вируса и постоянная доза сыворотки. Результаты PH выражают в индексах нейтрализации. Принято индексы нейтрализации от 1 до 9 считать отрицательными, от 10 до 49 - сомнительными, от 50 и выше - положительными. PH можно проводить и в культуре клеток ПЭК и 3-8 дн цыплятах.

РДП. Для идентификации возбудителя в РДП используют набор куриных антисывороток, полученных к различным вирусам птиц. РДП ставят по общепринятой методике. Для РДП при диагностике ИЛТ птиц 1,5%-ный агаровый гель готовят на верональном буферном растворе с pH 7,2 следующим образом: в 100 мл горячей дистиллированной воды растворяют 1,84 г веронала, после охлаждения доливают дистиллированной водой до 1000 мл и растворяют в полученном растворе 10,3 г мединала. Раствор хранят при 4°С. Реакция проста по технике выполнения и позволяет выявлять примерно 75% положительных случаев, установленных при помощи заражения эмбрионов. РДП специфична, но недостаточно чувствительна, ее используют главным образом для ретроспективной диагностики среди взрослых кур.

Приготовление гипериммунных сывороток и антигенов. Гипериммунные вирус- нейтрализующие сыворотки получают на кроликах по следующей схеме. Вирус (суспензии ХАО 1:10 после центрифугирования при 2500 мин'1 в течение 30 мин) вводят кроликам внутривенно в течение 3 нед по 3 раза в неделю (через 1 дн): в первую нед - по 2 мл, во вторую - по 3, в третью - по 4 мл. Через 7 нед после первичной иммунизации кролику внутри- брюшинно инъецируют 10 мл вируса, а на следующий день - 15 мл внутривенно. Через 7 дн после последнего введения АГ кроликов обескровливают. Гипериммунные кроличьи сыворотки используют в PH для типирования вируса ИЛТ.

Получение гипериммунных преципитирующих сывороток на птице. Центрифугированную суспензию вируссодержащей ХАО в разведении 1:10 вводят взрослым петухам в подкрыльцовую вену в объеме 1-2 мл по схеме: 4 инъекции с промежутками в 1 день, 7 да отдыха; 4 инъекции с промежутками в 1 день. На 6-й дн после последней инъекции пробно берут кровь из сердца, в случае не активности сыворотки проводят трехкратное введение вируса с суточными интервалами, на 6-ой деиь вторично берут пробу крови. Установлено, что препараты очищенного вируса ИЛТ, полученные в градиенте плотности глицерин- тартрата, более пригодны для выделения вирионной ДНК, тогда как препараты, очищенные в перколе, лучше использовать в качестве специфического АГ для ИФА и получения специфических сывороток. По данным ЭМ препараты вируса ИЛТ, очищенные в перколе, практически не содержат примесей клеточных компонентов (везикул) (8).

Идентификация вируса с помощью монАТ. По чувствительности ИФА с монАТ сопоставим с методом выделения вируса, но более быстрым и более чувствительным по сравнению с ИФ. В ИФА используют кроличьи поликлональные АТ и мышиные монАТ (28).

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. В нетипичных случаях, особенно при хроническом течении инфекции, провести диагностику позволяет установление роста титра антител при исследовании парных сывороток. Однако такого рода исследования проводятся главным образом с целью получения данных, свидетельствующих о перенесении заболевания данной популяцией и указывающих на степень распространенности возбудителя на определенной территории. Пробы сыворотки от птицы исследуют дважды - через 14- 28 дн интервал. Повышение титра антител к вирусу и числа положительно реагирующих птиц в стаде свидетельствует о наличии и распространении инфекции в хозяйстве, а сохранение или снижение уровня АТ - о прошедшей инфекции. Для серологического исследования кровь берут иа 14-28-й дн от начала болезни не менее чем от 5-10 птиц по 5 мл от каждой. До начала исследования сыворотку сохраняют в замороженном состоянии при минус 20-70°С. Сыворотки больных и переболевших птиц, а также контрольные инактивируют при 56°С 30 мин.

Приготовление антигенов для PH и РДП. ХАО КЭ с характерными для данного вируса поражениями гомогенизируют с равным количеством буферного изотонического раствора с pH 7,2-7,4, к которому добавлены антибиотики из расчета по 100 ЕД пенициллина и стрептомицина на 1 мл раствора. Суспензию центрифугируют при 3000 мин'1 20 мин. Надосадочную жидкость сливают и используют в качестве антигена, если она содержит вируса ие менее 105 ЭИД50/МЛ. АГ сохраняют в замороженном состоянии. Предложена следующая методика концентрации и очистки вируса: вируссодержащий материал концентрируют поли- этиленгликолем с мол.м. 6000; конечная концентрация его в вируссодержащей суспензии должна быть равна 7%. Концентрирование ведут при 4°С в течение 3 ч, центрифугируют концентрированный вирус при 3000 мин1 30 мин. Инфекционная активность полученного вируса - 106-107ЭИД 50/мл.

PH. Наиболее чувствительна по сравнению с РДП и РРИД. Она выявляет специфические АТ у 96-98% инфицированных птиц независимо от формы течения заболевания. Однако эта реакция трудоемка и требует значительного количества КЭ (1). На КЭ или культурах клеток реакцию ставят по общепринятой методике, чаще используют модификацию: постоянная доза сыворотки и различные разведения вируса. Число рядов соответствует числу испытуемых сывороток плюс 2 ряда контроля (с нормальной и иммунной сыворотками), а число пробирок в ряду - числу разведений вируса. После контакта (1ч при комнатной температуре) смесь сыворотки с каждым разведением вируса инокулируют не менее чем 4 КЭ на ХАО по 0,2 мл. Эмбрионы инкубируют при 37°С в течение 6 дн. При вскрытии выявляют специфические изменения на ХАО. В PH рекомендуется использовать неразведенные сыворотки. Оценку результатов проводят по индексу нейтрализации. Сыворотку с ИН 10 или меньше считают отрицательной, а с индексом больше 10 - положительной.

РДП. Проводят по общепринятой методике, используя стандартный АГ. Эта реакция может выявить 25-50% переболевших птиц. Однако простая техника постановки ее и быстрое получение результатов дают возможность с минимальными затратами средств и времени обследовать большое количество птицы. Специфический антиген готовят из вакцинного вируса ИЛТ клона НТ. Вируссодержашую суспензию - ценгрифугат гомогенизированных ХАО - концентрируют, используя 1%-ный раствор полиэтиленгликоля на дистиллированной воде, либо полиэтиленгликоль (ПЭГ-6000) при добавлении в суспензию из расчета 7%.

Антисыворотку к вирусу ИЛТ получают гипериммунизацией морских свинок и птиц. В первом случае используют концентрированный вирус ИЛТ с титром не ниже 108,0ЭИД50/мл’ которым иммунизируют морских свинок по следующей схеме: первая иммунизация в объеме 0,1 мл внутрикожно в плантарную поверхность обеих лапок, вторая иммунизация - через 7-9 дн в объеме 1 мл подкожно в область верхней губы; последующие 2 инъекции - через 14-16 и 21-23 дн после второй проводят аналогично. Через 10 дн после последнего введения АГ морских свинок тотально обескровливают. Уровень АТ в РДП составлял, как правило, 1:16 и выше, в лиофилизированном состоянии сыворотки сохраняли свою активность 2 г.

Птиц (молодок и петухов в возрасте 90-120 дн) гипериммунизируют по схеме: первый и второй раз (через 2 дн) иммунизируют специфическим АГ внутривенно в объеме 1 мл, третий раз через 16 дн и четвертый раз через 30 дн -проводят ингратрахеально в таком же объеме. Через 15 дн после последней иммунизации берут пробу крови и исследуют на активность и специфичность. Если активность сыворотки в РДП со специфическим АГ 1:32 и выше, то у такой птицы тотально (из сердца) берут кровь, сыворотку от которой лиофилизи- руют и используют для выявления АТ в органах и тканях больных и погибших птиц.

Если титр специфических ПА в пробе сыворотки окажется ниже чем 1:32, то птицу иммунизируют еще раз вирулентным вирусом ИЛТ в разведении 1:100 ингратрахеально в объеме 0,5 мл. Через 10-12 дн птиц тотально обескровливают и сыворотку лиофилизируют.

В качестве растворителя для приготовления геля используют 0,1М забуференный физраствор NaCl pH 7,2-7,4; забуференный фосфатный раствор состоит из 9 частей 0,15М раствора NaCl и 1 ной части 0,15М фосфатного буфера с pH 7,2 по Серенсу, веронал-ацетатный буфер с pH 8,6 с ионной силой 0,1 и боратный буфер pH 8,4-8,6. Гель на этих буферных растворах готовят из расчета: 1,5 г агара на 100 мл растворителя. Растворяют агар в течение 1,5-2 ч в кипящей водяной бане, добавляя в расплавленный агар консервант (риванол, азид натрия и др.). Горячий агар разливают по 3 мл на предметные стенки или по 35 мл в чашки Петри, расположенные строго горизонтально. Как только агар затвердеет, пластинки можно использовать в РДП (2). Таким образом, для диагностики ИЛТ рекомендуется РДП на агаровом геле, приготовленном на боратном, либо фосфатном буферных растворах. РДП пригодно для выявления специфических АТ в крови больных и переболевших птиц, а также вирусного АГ ИЛТ в органах погибших птиц. Разработаны условия получения специфического вируса ИЛТ, активность его РДП 1:4-1:32, а в твердофазном ИФА 1:265-1:4000 ( 8,13).

ELISA. Оказался более чувствительным, чем PH, по чувствительности приближается к ИФ. У отдельных экспериментально зараженных цыплят с помощью ELISA и РИФ удавалось выявить АТ в более ранние сроки, чем в PH. Разработан твердофазный ИФА для выявления специфических АТ к вирусу ИЛТ в сыворотках крови вакцинированных птиц. Методом шахматного титрования была выработана сенсибилизирующая доза антигенов и разведения иммунопероксидаз ного конъюгата. В ИФА можно выявлять специфические антитела в титрах 1:100-1:200 в сыворотках крови вакцинированных птиц. Аналогичные титры в PH и РДП соответственно составляли 1:8-1:32 и 1:2-1:16 (12). ELISA и PH (микрометод) успешно применяли для обнаружения АТ в стадах с субклиническим течением ИЛТ. Обнаружить поствакцинальные АТ к вирусу болезни в сыворотках цыплят с помощью ELISA удается через неделю после вакцинации. Также предложен усовершенствованный метод ELISA путем введения в реакцию авидин-биотин-ферментного комплекса. Он пригоден и для оценки поствакцинального иммунитета (29).

Дифференциальная диагностика. При постановке диагноза на ИЛТ необходимо ис ключить НБ, оспу, ИБК, заразный насморк, хронический пастереллез, респираторный мико- плазмоз и др. (табл.ХУ1.2.).

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА Заболевание сопровождается длительным или пожизненным вирусоносительством. Из трахеи переболевших птиц вирус выделяли в течение 2 лет. Смывы с трахеи обладали ви- руснейтрализующей активностью на 7-8-й дн после заражения (14). При ИЛТ установлено важное значение клеточного иммунитета Иммуногенность вакцины зависит от ее реакто-, генности, отмечена тесная корреляция между напряженностью иммунитета и титром ВНА (в культуре клеток почки КЭ). В ряде случаев иммунитет наступал раньше, чем появлялись гуморальные АТ (19, 23, 34). Формирование ВНА и гиперчувствительность замедленного типа не коррелирует с напряженностью иммунитета у вакцинированной птнцы (9).

В Российской Федерации и странах СНГ применяют сухую вирусвакцину из шт. ЦНИ- ИПП, разработанную С.П.Щенниковым и Е.А.Петровской. Ими предложен метод иммунизации - втирание вакцины в слизистую оболочку верхнего свода клоаки. Иммунитет наступает через 7-10 дн и сохраняется у большинства птиц в течение всего срока их использования. Разработан и аэрозольный метод вакцинации данным препаратом.

Предложена также живая вирус вакцина из природно-ослабленного шт. ВНИИБП, которую можио применять путем втирания в слизистую оболочку клоаки и аэрозольно. При использовании этого штамма с Г А активностью 1:128-1:512 нанесением его на конъюнктиву в дозе 1000 ЭИД50 достигался высокий эффект, который оценивался по уровню антиГА в

Таблица XVI.2. Дифференциальная диагностика респираторных болезней птиц (по А.А. Ибрагимову, 1981) Болезнь Эпшоотологичес кие особенности Патологоанатомич еские изменения Гистологические

изменения Основания

диагноза Инфек-

ТТТТОн н ьТТТ

бронхит Острая высоко- контагиозиая инфекция, клиниче- си проявляющаяся у ЦЫПЛЯТ ДО 60 дней. Продолжительность болезни 8-10 дн. Гиперемия и отек легких, скопление слизи и точечные 1фОВОГОЛ. в слизист. трахеи, сер. - слиз эксудат в просвете бронхов и полости возд. мешков Гиперемия, диффузный серозный отек и диапе- дезные кровоизлияния, сопровождающиеся лим- фоидно-гисшоцитарной инфильтрацией, гиперплазией и метаплазией респират. эпителия Диффузный серозный отек , гиперплазия и метаплазия респираторного эпителия слизистой оболочки трахеи и бронхов Респира

торный

микоплаз

моз Хроническая, чаще латентная инфекция, клинически проявляющаяся при неблагоприятных условиях. Болеют птицы пр еимуществ енно в возрасте 30-180 дн Серозно-катаральн. Ринит, синусит, скопление слизи и зернистость слизистой трахеи, помутнение воздухоносных мешков Гиперсекреция и гипертрофия слизист. желез, лимфофоликулярная реакция и диффузная лимфоцитарная инфильтрация, удлинение желез, аэросаккулит, эндо- и перибронхит, утолщение и разрастание слизситой трахеи Лимфоцитарная инфильтрация и лимфоретикулярная реакция, обусловливающие аэросаккулит, эндо- и периброи- хит, неравномерное угол щение, полипообразное разрастание слизистой трахеи Аденови

русная

инфек

ция Острая контагиозная инфекция, проявляющаяся у птиц до 15-и дневного возраста. Продолжит. Болезни 8-10 дн. Серозно - катаральный ринит, синусит, трахеит, катаральная пневмония, некротический панкрео- тит, гепатит Гиперемия, псевдоэози- нофильиая инфильтрация, пролиферация респираторного и железистого эпителия, полная или частичная обтура- ция просветов бронхов Гиперплазия и метаплазия респираторного и железистого эпителия, содержащего внутриядер ные базофильные включения Инфекци

онньш

ларинго

трахеит Острая контагиозная болезнь преимущественно цыплят в возрасте 60-180 дн. Продолжит. 10-15 дней Фибринозно-гемора- гически ларннготра- хеит Гиперемия, геморрагии, псевдоэозинофильиая инфильтрация и выпот фибринозного экссудата с десквамацией и пролиферацией эпителия Фибринозно - геморр. ларинготрахеит, десква- мация и пролиферация эпителия, содержащего внутриядерные ацидофильные включения

Глава XVI. Family Herpesvirida Г ерпесвирусные инфекции

Продолжение таблицы XVI. 2 Аспергил

лез Острая, реже фоническая болезнь, вспышке которой способствуют неблагоприятные условия. Болеет шица в возрасте 1-150 дн Фибринозная пневмония, аэросакулит н некрозы (грану лемы) размером 1-5 мм с характерной концентрической слоистостью Гиперемия, отек, псевдо- эозинофильная н эпите- лиоидно-клегочная инфильтрация,сопровожда ющаяся развитием некроза с гигантоклеточной и гранулематозной реакцией по периферии Обнаружение мицелия гриба в зоне некроза Колисепт

ицемия Острая септ, болезнь, развишю её способствуют неблагоприятные условия и респ. инф. Продсшж. 8- 15 дн. Болеет птица преимущественно в 30-140 дн Фибринозный аэро- саккулит, пневмония, перикардит, сальпингит Гиперемия, псевдоэозн- нофильная инфильтрация, выпот фибринозного эксудата н микробная тромбоэмболия с некрозами с г игантоклеточной н гранулематозной реакцией по периферии

РЗГА. Сероконверсия не менее 80% и среднегеометрический титр АТ более 4 1о|*2 свидетельствуют о напряженном иммунитете (6).

Помимо живых культуральных вакцин, в Японии применяется клеточно-ассоциированная живая вакцина из вируса ларинготрахеита СЕ. В вирусинфи цированных клетках которой содержится значительно больше вирусспецифичес ких белков, чем в свободных вирионах (30). Иммунитет у привитой птицы разви вался на 6-й день после иммунизации. Даже в 10-кратной дозе вакцина оказалась безопасной для цыплят (31).

Предложена также живая вакцина против ИЛТ и болезни Марека, которая индуцировала иммунитет к обоим вирусам при подкожном и внутримышечном введениях (24). Показана эффективность одновременной вакцинации цыплят против НБ и ИЛТ. Оказалось, что вакцинный шт. Ла-Сота не оказывает тормозящего влияния на репродукцию шт. ВНИИБП вируса ИЛТ в КЭ (6, 8). Биологическая активность и иммуногенность вирусвакцины против ИЛТ кур из клона НТ не изменялась при хранении ее в течение 12 мес при температуре 2- 6°С (13а).

Предпочтительный метод иммунизации - закапывание вакцины на конъюнктиву или применение ее в виде аэрозоля. Вакцинация аэрозолем, содержащим вакцинный вирус, может сопровождаться нежелательными последствиями особенно при наличии в хозяйстве ми- коплазменной инфекции. При аэрозольной вакцинации иммунитет развивается через 4-5 дн и сохраняется до года.

В настоящее время в СНГ и РФ применяют вакцины ВНИИБП и ВНИИВВиМ. Первая после двукратного аэрозольного применения (5-7,5 ^ ЭИД50) создавала иммунитет у всех 5- 6 - нед цыплят яичных стад и у 80% цыплят мясных пород кур. Через 4,5 мес после вакцинации у 90% кур сохранялся напряженный иммунитет. Вакцину ВНИИВВиМ готовят из аттенуированного шт. НТ, она менее реактогенна при аэрозольном применении (4). Несмотря на высокую биологическую активность и ареактогенность вакцины против ИЛТ из клона НТ, не рекомендуется использовать её для вакцинации разновозрастных цыплят и там, где нет необходимых условий для создания нужной её концентрации в птичнике. Вакцина против ИЛТ из клона НТ при клоачном методе применения в дозе 11240 ЭИД50 и выше формирует у 30-40 дн цыплят напряженный иммунитет после однократной вакцинации (5).

Относительно эффективности инактивированной вакцины в литературе имеются противоречивые данные. Для изготовления инактивированного препарата используют р- пропилактон, этилэнимин, формалин. Однократная иммунизация цыплят инактивированной эмульсин-вакциной сообщает устойчивость цыплят к заражению в течение 12 мес. Таким образом, получена эффективная инактивированная вакцина, которую рекомендовано при менять в хозяйствах с частыми вспышками ИЛТ ( 17 ).

Генно-инженерные вакцины. Независимо от методов аппликации живой вирусвакцины у птицы наблюдается довольно длительное носительство вакцинного вируса. Аттенуированные вакцины могут быть причиной возникновения латентной формы инфекции. Разрабатываемые генно-инженерные вакцины лишены этого недостатка. В сочетании с гигиеническими мероприятиями такие вакцины могли бы привести к искоренению ИЛТ к 2000г. в птицеводческих хозяйствах (14, 15, 21). Описаны методы конструирования мутантов вируса ИЛТ, у которых ген ТК (тимидинкиназы) инактивирован мутациями разного типа: делениями (например участка ДНК между 2 сайтами Narl), вставками чужеродной ДНК или деле- цией и вставкой. Эти мутанты не продуцируют функциональную ТК и являются аттенуированными. В ген ТК вируса ИЛТ можно встраивать гетерологичные гены, кодирующие АГ патогенов птиц: вирусов БМ, НБ, ИБК, ретровирусов и т.д. Такие варианты вируса ИЛТ можно использовать в качестве вакцинных векторов, индуцирующих иммунный ответ (7, 24, 27). Получен положительный результат при использовании для специфической профилактики ИЛТ очищенного афинной хроматографией гликопротеина (32,33).

Оценка поствакцинального иммунитета. Куры, переболевшие инфекционным ларин- готрахеитом, в естественных условиях приобретают практически пожизненный иммунитет. Установлено, что двукратная ассоциированная аэрозольная иммунизация птиц против НБ, ИЛТ и оспы не угнетает клеточных и гуморальных показателей иммунитета. Большинство исследователей поствакцннальный иммунитет оценивают по уровню ВНА, а напряженность -

путем контрольного заражения. Установлена тесная корреляция между напряженностью иммунитета и титром в первые 2 нед после вакцинации. В ряде случаев цыплята могут быть устойчивы к заражению, но серонегативны, что свидетельствует о том, что иммунное состояние наступает раньше, чем появляются АТ в крови.

В сыворотках крови вакцинированных кур на 10-14-й дн обнаруживают ВНА. В небольших титрах они у птиц выявлялись в PH через 55 нед после вакцинации. Установлена прямая зависимость между уровнем защиты кур после вакцинации и титрами ВНА. При титре поствакцинальных антител 1:76, 1:16, 1:10 и 1:8 процент заболеваемости птицы после экспериментального заражения составлял 0, 45, 55 и 100% соответственно. Птица, иммунизированная клоачно, не заболевает при интратрахеальном заражении, а выжившая после интратрахеальной вакцинации остается невосприимчивой при заражении в клоаку. В связи с этим поствакцинальный иммунитет оценивают по наличию ВНА в сыворотке крови вакцинированных кур, а также по результатам биопробы (клоачная реакция). Для ориентировочной оценки напряженности иммунитета птиц после вакцинации против ИЛТ можно использовать РДП и РИЭФ, но они менее показательны. Связь титров АТ с вирусоносительством и вирусовыделением не изучена.

Пассивный иммунитет. Заражение 1-дневных цыплят, полученных от вакцинированных птиц, приводило к 40%-ной заболеваемости и смертности; гибель цыплят, полученных от не иммунных родителей, составляла 100%. Куры, содержащие ВНА в титре 1:76 и ниже не защищают потомство цыплят и в организме их возможна репродукция вируса в раннем возрасте.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Дудко Ю.С. Тез. докл. н. конф. ВНИИВИМ, Покров,1990 :85. 2.Дудко Ю. С. Тез. докл.нконф.ВНИИВИМ, Покров,1990 :88. 3. Ерохина Л.М. Пат. анат. диагн. вир. бол. животных, М. Колос, 1984. За.Зуев Ю.В. и др. Матер, н. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992 : 159. 4.Слободенюк М.И. и др. Ветеринария 1994, 1 :30. 5. Шевченко А.А. и др. Тез. докл. н. конф. ВНИИВИМ, Покров 1990 :113. б.Макогон В.Ф. и др.Ветеринария,1991, 6 :24. 7.Пат.США 5279965, Keeler C.L.№681704. 8.Перзашкевич B.C. и др. Тез. докл. Всеросс. н.- пр. конф. ВН ИИЗЖ, 1995 :267. 9.Сергеев В.А. Вирусные вакцины, Киев, Урожай, 1993. Ю.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вир., М. Колос, 1979. П.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. жив., М. 1991. 12.Цыбанова Т.С. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир,1995 :265. 13.Цыбанова Т.С. и др. Тез . докл. н.-пр. конф., ВНИИЗЖ, Владимир,1995 :264. 14.BagustT.G. et.al. Avian diseas, 1986, 30, 1 :176. 15.Bagust T.J. et.al. Avian Pathol ,1995, 24, 3

:373. 16.Bains B.S. A manuel of poultry disaeses Ed Roche Basle,1979. 17.Barhoom S. et.al. Avian Pathol, 1986, 15, 2 :213. 18.Davison S. et.al. Avian Dis 1989, 33, 1 :18. 19.Fahey K.J. et.al. Avian Pathol, 1983, 12, 4 :505. 20.Glissen J.R, Proceedings, 1988 :137. 21.Goodwin M.A. et.al. Avian Diseas, 1995, 39, 2 :444. 22.Guo Peixuan. et.al. Virology, 1994, 202, 2 :771. 23a.Haghes C.S. et.al. Arch Virol, 1991, 121, 1-4 .213. 23.Hilbink F.W. et.al. Veter Q 1987, 9 :215. 24.Honda T. et.al. Заявка 74148 16. 07. 87 г. опубл. 25. 12. 90. 25Johnson M.A. et.al. Arch Virol ,1991, 119, 3-4 :181. 26.Kaleta E.F. Avian Pathol ,1990, 19, 2 :193. 27.Keler L. J Cell Bioteh, 1992, Suppl 16 :130. 28.Lercio B. et.al. Proceedings 1988 :132. 29.0hkubo Y. et.al. Avian Dis 1988, 32 ,1 :24. ЗО.Тапепо A. et.al. Jap J Vet Sci ,1990, 52, 4 :827. 31.Taneno A. et.al. J Vet Med Sci, 1991, 53, 4 :671. 32.York J.J. et.al. Avian Path, 1989, 18, 4 :643. 33.York J.J. et.al. Avian Path 1991, 20, 4 : 693. 34.Vodopija J. Rev. Infec Diseores, 1988, 10, Suppl 4 :758. 35.Wiliams R.D.et.al. J Metod Gen virol, 1992, 73, 9 :2415.