ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Морфология и химический состав. Размер вирионов от 150 до 300 им, вирионы имеют внешнюю оболочку толщиной около 5-8 нм с выступами длиной 9-13 нм. Нуклеокопсид имеет размер 15-18 нм.

Нуклеиновая кислота вируса метится 3Н уридином. Тельца-включения при ЧС представляют агрегаты вирусных частиц. Плавучая плотность вирионов в CsCl (1,231 г/см3) н тартрате калия (1,233 г/см3) оказалась одинаковой. Вирусные частицы, обнаруженные в гиалоплазме клеток селезенки, легких и почек, инфицированных ВЧП (шт. Snieder Hill) тхорзофреток, имели различные формы - сферическую, овальную, типа ракетки, филамен- тозную (до 800 нм). Размеры вирионов колебались от 100 до 200 нм, у некоторых - до 300 нм. В легких они почковались в межклеточное пространство. Капсид представлял матрикс умеренной осмиефилни с рассеяными в гранулами. Рибонуклеопротеид (РНП) имеет форму гранул в поперечном и тяжей в продольном сечении и хаотично рассеяны в плотном матриксе капсиды. Нуклеокапсиды, окруженные 3-слойной наружной мембраной, имели на поверхности большое количество “шипиков”- пепломеров размером 15-17 им (15а).

Вирионы ВЧС содержат 6 основных белков - L, H, Р, NP, F1 и F2, имеющих мол.м. 20, 76, 66, 58, 40 и 23 кД соответсвенно. Белки F1 и F2 связаны дисульфидным мостиком в белок F с мол.м. 62 кД. Белки H, F1 и F2 гликозилированы, a NP и Р - фосфорилированы. Помимо структурных белков вириона в инфицированных клетках выявляется вирусспецифический белок NS (мол.м. 18 кД). Иммунологическое родство белков ВЧС с белками вируса кори (ВК) имеет место по белку Н. Несмотря на близкое иммунологическое родство этих мор- бишшвирусов пептидные карты их сильно разнятся (37). Белки с мол.м. 59, 41 и 34 кД составляют нуклеокапсидный белок (NP), полипептид слияния (F) и мембранный полипептид (М) соответственно (55, 56).

Устойчивость. Во внешней среде в выделениях больных животных (кал, слизь) сохраняется 7-11 дн, в крови при 4°С - до 14 дн, в селезенке - до 2 мес, в органах павших животных при -20°С - до 6 мес, в крови - до 3, в носовой слизи - до 1-2 мес. При -10°С сохраняется в течение нескольких месяцев, при -76°С - неограниченное время, а в лиофилизирован- ном состоянии - более года. Высушенный вирус устойчив при комнатной температуре, а инактивированный формалином или фотодинамически (метиленовым синим) сохраняет АГ- свойства в течение длительного времени. При 60°С вирус инактивируется за 30 мин, при 100°С - мгновенно. Вирус, культивированный в КЭ, менее стабилен, чем содержащийся в гомогенатах вируссодержащей ткани. ВЧП инактивируется видимым светом. Телячья сыворотка или глютатион снижают скорость инактивации ВЧП. Аминокислоты и р-р Эрла оказывают стабилизирующий эффект на световую чувствительность вируса. Однако некоторые ингредиенты среды могут увеличивать чувствительность вируса к свету. Вирулентный ВЧП в ткани селезенки собак при 60°С сохранялся в течение 30 мин при 37°С - в течение 60 мин, ио инактивировался при 56°С. Вирус в экссудате носовой полости при комнатной температуре сохранялся в течение 20 мин. При 0°С относительно быстро инактивируется, замораживание и оттаивание ведет к снижению его титра. Шт. Anderstepoort сохранял инфекционность в ХАО в течение 37 мес при -16-18°С, а в 10%-ной суспензии при -5°С в течение 60 дн. Селезенка инфицированных хорьков сохраняла патогенность для этих животных в течение 693 дн при -24°С. Инфекционность вируса в клеточной суспензии сохранялась в течение 172 дн при -30°С. Адаптированные к КЭ штаммы ВЧП (Onderstepoort и Lederti) в суспензии, приготовленной на р-ре сахароза-глюкоза-глютамии, сохраняют инфекционный титр в течение 6 мес при 65°С.

Для штаммов, адаптированных к КЭ, лиофилизация может явиться причиной потери титра вируса, который обычно снижается на 0,5-1,5 lg, что может отражаться на активности коммерческих вакцин. Лиофилизированный ВЧП при 5°С сохранял активность в течение 5 мес. Он сравнительно устойчив при pH 4,5 и выше, частично инактивируется при pH 9,0. Оптимальный pH - 7,0. Наиболее стабильный шт. Wigeonsin FXNO сохранялся при pH 8,8, но активность его падала при pH выше 9 и ниже 8. ВЧП инактивируется Уф лучами - 22000 Эрг/см2 снижает титр вируса на 1 lg. Радиация 105 рентген р-частицами снижала титр на 4 lg при -70°С и на 1 lg при 0°С. Вирус инактивируется хлороформом и эфиром. 0,05% р-р формалина инактивирует его при 37° С в течение 4 ч. p-пропиолактон в конечной концентрации 0,1% инактивировал данный вирус в течение 2-х ч при 37°С. Инфекционность вируссодержащей ХАО исчезала через 7-8 нед в условиях 4°С и через 7-8 дн при 25°С. Суспензия вируссодержащей ХАО полностью инактивировалась через 15 ч при 15°С, через 1 ч при 37°С. Вирус, репродуцированный в культуре клеток КЭ, через 2 ч инактивировался наполовину при 21°С, через 1 ч - при 37°С, через 10 мин - при 45°С и через 2-3 мин - при 56°С.

Антигенная структура, вариабельность и родство. ВЧП в составе имеет преципити- рующий и КС АГ. Растворимые АГ из ВЧП преципитируются в агаровом геле гипериммун- ной сывороткой. ВЧ в иммунобиологическом отношении однороден. Различные изоляты и варианты адаптированных штаммов ВЧП не могут быть серологически идентифицированы подобно другим членам группы MRD (М - meacles - корь, R - rinderpest - чума КРС, D - distemper - чума собак).

Все выделенные штаммы обладают общими свойствами, позволяющими отнести их в одну группу. Однако по происхождению и некоторым биологическим особенностям их можно разделить на 2 подгруппы: классические и вариантные.

Недавно выделенные в США, Европе, Африке изоляты вируса от различных видов животных значительно отличаются от вакцинных штаммов ВЧС. Все проанализированные изоляты дикого штамма группируются согласно географическому распространению, а не в соответствии с видами хозяина. Эпизоотию у крупных кошачьих в Калифорнийском Сафари-парке связывают с заражением вирусом не кошачьих плотоядных (38).

Установлено уникальное родство между ВЧС и вирусом чумы тюленей (ВЧТ). Отмечена максимальная (67%) гомология гена М ВЧТ с ВЧС, далее следует ВК (58%) и ВЧ КРС (57%). По белку М ВЧС и ВЧТ имеют 90% гомологии; гомология с другими морбилливиру- сами составляет 73-77%. Белок М - наиболее консервативный белок морбилливирусов (58). В другом сообщении степень гомологии генов N и Р ВЧТ и ВЧС составляла 84-76% соответственно. Эти различия на геномном уровне показывают, что ВЧТ и ВЧС относятся к разным видам морбилливирусов (27). Подтверждается ранее высказанное предположение о том, что тюлени могут быть источником заражения млекопитающих (собак, норок) (25).

В 1987-1988 гг. в популяции байкальской нерпы зарегистрирована эпизоотия, при которой пало несколько тысяч животных. Возбудителем оказался слабопатогенный для собак морбилливирус (18). Помимо озера Байкал подобная эпизоотия имела место на Балтийском море. Возбудитель её оказался близким или идентичным вирусу ЧП. У собак, инокулиро- ванных ВЧ КРС, образуется устойчивость к вирулентному вирусу ЧП.

Локализация вируса. До последнего времени считалось, что виремия при ЧС связана исключительно с лейкоцитами, что подтверждал ос ь ИФ. Однако недавно было показано, что ВЧС может быть в плазме крови, которая обеспечивает экстрацеллюлярную диссемина- цию вируса, а также в лейкоцитах. Раньше всего вирус удается выявить в миндалинах и бронхиальных лимфоузлах. Отсюда с кровью он проникает в костный мозг, селезенку, лимфоузлы, что сопровождается первым подъемом температуры. У большинства выживших со бак вирус обнаруживается в эпидермальных клетках конечностей (синдром расстройства ЦНС и затвердение подушечек лап после переболевания, по-видимому, объясняются этим явлением.)

Доказана персистенция ВЧС в ЦНС. Вирус выделяют из крови, лимфоузлов, селезенки и других внутренних органов собак. У переболевших животных наблюдается вирусоносительство в течение 1-2 мес.

У хорьков репродукция ВЧП осуществляется в нескольких типах клеток (Рис. 41). Во всех изученных органах выявлены клетки СМФ с морфологическими признаками инфекции. Очевидно благодаря клеткам именно этого типа происходит диссиминация вируса в различные ткани органов (6). Недавно установлено, что оболочечный ГА (ГА белок) определяет клеточный тропизм (58а).

Антигенная активность. При введении ВЧС на 5-6-й день в организме вырабатываются АТ на все его АГ. КСА обнаруживаются в кровн с 10-15-го дня ; на 15-20-й день достигают максимального титра н обнаруживаются в течение года после переболевания.

Серологические обследования собак в Ливерпуле на АТ к коронавирусу собак (в PH со шт. К-378 в клетках А-72), ВЧС (в PH со шт. Onderstepoort в клетках VERO) и ротавирусу (в непрямой ИФ с ротавирусом обезьян S -11, на клетках МА-104) АТ обнаружены соответственно у 54, 84, 70 и 80% животных. Количество животных с АТ к ВЧ, корона- и ротавирусу возрастало с увеличением возраста животных (60). Для титрования АТ к ВЧП перспективно применять метод латекс-агглютинации. Этот тест в сравнении с другими реакциями гораздо проще, быстрее и дешевле при диагностике кори и оценке эффективности коревой вакцины и чумы собак (1). ВНА к ВЧП передаются от матери к потомству in utero и с молозивом. Щенки с титром материанских АТ менее чем 1:20 чувствительны к заражению вирулентным шт. Snyder Hill ВЧП, с титром АТ выше 1:100 устойчивы к контрольному заражению. Материнские АТ препятствуют иммунологической реакции на вакцинацию; с ними связаны неудачи при иммунизации щенков вакцинным вирусом. Установлена высокая степень корреляции результатов реакции иммуносорбции фермент-мечеными АТ (РИФМА) и PH для выявления клонов AT IgM и IgG в течение 70 дн после инфекции (52).

Экспериментальная инфекция. Клиническое течение чумы у экспериментально зараженных хорьков проявляется перемежающей лихорадкой с 4-6-го дня после инокуляции. Через 4 дня появлялись поражения кожи.

Одновременно с адаптацией к организму хорьков наблюдается ослабление вирулентности вируса для собак. Кролики и морские свинки реагируют на искусственное заражение только кратковременным подъемом температуры, хотя вирус у них хорошо сохраняется. Взрослые кошки невосприимчивы к ВЧП, тогда как месячные котята тяжело переболевают при парентеральном заражении. Белые мыши мало восприимчивы, но при последовательном пассировании вируса удается получить фиксированный для мышей штамм, вирулентность которого для собак сохраняется. Наиболее восприимчивы к ВЧП оказались мыши линии Balb. Обезьяны невосприимчивы к вирусу, хотя его удается выделить из организма зараженных особей. В качестве лабораторных животных используют белых африканских хорьков и тхорзофреток.

Экспериментальная инфекция почти всегда удается при введении вируссодержащего материала per os, подкожно, внутривенно и путем аэрозоля. Для этого лучше использовать щенков 6-12-мес возраста. Кроме собак, парентеральным и контактным способами удается заразить волков, лисиц, норок, хорьков, ласок и речных выдр.

Культивирование. Первые опыты по культивированию ВЧП в эксплантатах ткани проводил Mitscherlich в 1938 г. Позднее его размножали в эсплантатах селезенки, мезентериальных лимфоузлов, легких и тестикул 10-14-дн щенят. Авторы провели 19 пассажей, при этом тигр вируса в эксплантатах селезенки достиг 2104 ИД/г. ВЧП активно размножается в первичных культурах клеток почки собак, хорьков, легких собак и хорьков; в первичной культуре клеток почки щенят 3-4 дн возраста. В этих культурах на среде 199 с добавлением 20% сыворотки телят ВЧП образует бляшки под агаровым покрытием. В клетках HeLa и линии клеток печени человека вирус не вызывал ЦПЭ (9,10).

При сравнительном изучении репродукции 3-х штаммов ВЧП на различных клеточных системах установлено, что у 1-го из них (шт. Рокборн) отсутствовало выраженное ЦПД, 2-й штамм накапливался в титре 3,5-5,0 lg ТЦД50/МЛ и шт. Акбар-37 накапливался в титре 5,0- 6,5

lg ТЦДзо/Мл (17). Штаммы, адаптированные к КЭ, хорошо развиваются в культуре фибробластов КЭ, перевиваемых линиях клеток HeLa, Hep и др. Максимальное накопление адаптированных штаммов в культуре клеток отмечено на 8-9-й деиь. Вирус репродуцируется в культуре альвеолярных макрофагов легких собак. Через 2-6 дн в ней формируются характерные круглые многоядерные гигантские клетки, которые через 1-2 нед исчезают с образованием синцития. Адаптированный к клеткам Vero шт. Green ВЧП способен образовывать бляшки в клетках Hep-2, BS-C-1 и HeLa, но не в клетках Vero и культуре клеток почки собак (41). Адаптированный к КЭ или культуре клеток, вирус может размножаться во многих клеточных системах (собак, КРС, обезьян, человека). ВЧП вызывает ЦПЭ и титры его выше в роллерных культурах, чем в стационарных.

Предложен метод крупномасштабного культивирования ВЧП на микроносителях Gelaspker М (Lachema, Bruc) (диаметр 150-200 мкм), для чего клетки КЭ или Vero выращивают в виде псевдосуспензионной культуры. При этом биологическое накопление вируса более чем в 10 раз превышало таковое при использовании стационарных культур (46).

Разработан метод дифференциации патогенных и аттенуированных штаммов ВЧП in vitro. МонАТ реагируют с нуклеокапсидным АГ аттенуированного шт. Onderstepoort, который культивируется в клетках Vero и не реагирует с патогенными шт. А75/17 и СН84, культивируемыми в первичных культурах клеток собак. Однако после нескольких пассажей в клетках Vero штаммы приобретали эпитоп, реагирующий с монАТ, одновременно утрачивали патогенность для собак (40).

Шт. Д84-1 ВЧС, адаптированный к культуре фибробластов КЭ, вызывает выраженные ЦПИ в культуре клеток и незначительное бляшкообразование на ХАО. Шт. Д84-1 генетически стабилен и нейровирулентен для мышат (53).