ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Устойчивость. Низкие температуры консервируют вирус. Температура 23°С инактивирует его через 28-53 дня, 50°С - через 1 ч, 60°С - за 5-10 мин, 70°С - мгновенно. Высушивание без вакуума инактивирует вирус в течение 10-14 дн. В гниющем материале он гибнет через 15 дн. УФ лучи убивают за 5-10 мин. Дезинфицирующие вещества (р-ры формальдегида, гидроксида натрия, хлорной извести) действуют на ВБ губительно. Вирус устойчив к pH 5-10 при 4°С.

Антигенная структура. Нуклеокапсид ВБ представляет собой спиральные тела, состоящие из белков N, NS и L, составляющих 96% его массы, белок N-вирионной РНК, защищающей ее от действия РНК-азы; высокомолекулярный белок L и небольшой белок NS не связаны с нуклеокапсидом и содержатся в вирионе в незначительном количестве. Внутренним белком вирусной оболочки является негликозилированный мембранный или мат- риксный (М) белок. Кроме белка М у ВБ в состав внутреннего слоя оболочки входит белок А или клеточный актин с мол.м. 43 кД, содержание которого достигает 1-5% массы вирион- ных белков. До недавнего времени считалось, что все штаммы ВБ имеют одинаковый АГ состав. Однако с помощью монАТ удается легко различать фиксированные и дикие его штаммы как по нуклеокапсидным, так и по гликопротеиновым АГ. В вирионах ВБ обнаружено 5 белков (33). Гликопротеин G способен индуцировать образование ВНА и защищать животных от заражения. Нуклеокапсидный АГ индуцирует образование КСА и ПА.

Антигенная вариабельность и родство. Ранее все штаммы ВБ рассматривались как единые в АГ отношении. Однако благодаря гибридомной технологии появилась возможность получения монАТ к отдельной АГ детерминанте. МонАТ позволили выявить тонкие АГ связи и различия между штаммами вирусов группы Б. В настоящее время считают, что вирус Б имеет 4 серотипа, что, видимо, обусловлено различием в составе мембранных белков. Учитывая это, была предложена следующая классификация вируса: вирус 1-го серотипа; прототип этого вируса - шт. CVS и сходные с ним полевые и лабораторные штаммы, выделенные в различных частях света; вирус 2-го серотипа; прототип его - шт. Lagos Bat, выделенный из костного мозга летучей мыши в Нигерии; вирус 3-го серотипа; прототип его -

шт. Мокола, выделенный от землеройки и человека; вирус 4-го серотипа - шт. Obodhiang, выделен от лошадей, комаров и москитов в Нигерии и еще не классифицирован.

Все варианты ВБ в иммунобиологическом отношении родственны. Нуклеопротеидные АГ различных ВБ имеют группоспецифическое родство с другими рабдовирусами (63). МонАТ к различным штаммам ВБ открыли новую страницу в изучении тонкой АГ структуры лиссавирусов, представили дополнительные возможности для решения теоретических и прикладных задач рабиологии (5, 67). Показана перекрестная защита мышей против широкого спектра изолятов ВБ. При этом мышей вакцинировали рекомбииатной вакциной (на основе вируса вакцины) экспрессирующей гликопротеин G, нуклеопротеин N или оба (N+G) лабораторного шт. CVS, или полученной на диплоидных клетках вакциной (HDCV), и определяли устойчивость мышей к 17 штаммам ВБ, представляющих весь спектр известных вариантов возбудителя. В итоге сделан вывод, что любой штамм ВБ или его гликопротеин могут быть использованы для вакцинации во всем мире (50).

Локализация и выделение вируса. Многочисленные исследования патогенеза Б позволили условно разделить острую рабическую инфекцию на III основных фазы: I - экстра- невральная фаза, без видимого размножения вируса в месте инокуляции; II - интра- невральное, центростремительное распространение инфекции и III - диссеминация вируса по всему организму, сопровождаемая появлением симптомов болезни и, как правило, гибелью животного (36).

Персистенция вируса. За последние годы описаны казуистические случаи неоднократного выделения ВБ из слюны здоровых собак на протяжении почти 2-х лет после их инфицирования. Аналогичная картина наблюдалась и у некоторых экспериментально зараженных кошек. В 1981 г. представлены результаты 4-летного изучения Б мангустов, выловленных в ряде районов Гренады. С помощью ИФ ВБ обнаружен в срезах мозга 100 (2,1%) из 4754 обследованных мангустов. Среди 1675 обследованных животных обнаружены ВНА в пробах 498 сывороток (30%). При сопоставлении результатов обнаружения Б и соответствующих АТ обнаружено, что число больных животных в течение 1971-1974 гг. ежегодно снижалось (с 3,5 до 0,6%), количество мангустов с определяемыми АТ увеличилось с 20,8 до 43,2%. АТ к Б, как отмечено, в опытах с отловленными в природе мангустами (20 особей), циркулировали в крови еще 35 мес. У животных с наиболее высокими титрами АТ (1:1400) отмечена и наибольшая скорость их снижения (20,35, 44).

Одно из свойств ВБ - способность к персистенции in vivo и in vitro. Хроническая инфекция клеток Нер-2/2 и ВНК-21/13 фиксированным ВБ сопровождается определенными изменениями клеточного метаболизма. АГ ВБ образуется в цитоплазме клеток независимо от включений. Персистенцию ВБ удается наблюдать при хронической инфекции в клеточных культурах, причем по морфологии и скорости размножения клеток хронически инфицированные культуры не отличались от незараженных. Вирусный АГ передавался при делении клеток. После того, как была показана возможность образования дефектных интерферирующих частиц (ДИЧ) ВБ при первичной инфекции in vivo, ДИЧ были выделены и охарактеризованы при хронической инфекции ВБ клеток ВНК. Генерация ДИЧ в нейронах ЦНС может не только определять окончательный исход инфекции, но и объяснять ее латентный характер. В настоящее время данные о роли интерферона и ДИЧ в механизме хронической инфекции ВБ в клеточных культурах противоречивы. Показано, что ts-мутанты, представляющие собой условно дефектные вирусы, могут интерферировать с размножением вируса дикого типа. Вопрос о роли ts-мутантов при хронической инфекции ВБ изучен недостаточно. Современные представления о мутации этого вируса подтверждаются рядом примеров. Так, с помощью монАТ из популяции вирулентного ВБ удавалось селекционировать варианты с измененньм поверхностным гликопротеином и признаками аттенуации для ЦНС. Мутант ВБ, имеющий 2 аминокислотные замены (лейцин-132 на фенилаланин; аргинин-333 на глютамин), утратил нейровирулентность для взрослых мышей (64).

Вирулентность шт. ERA и CVS ВБ для мышей зависела от наличия аргннина или лизина в положении 333 вирусного гликопротеина. Замена аргннина в положении 333 на лейцин, изолейцин, метионин, цистин или серин полностью лишала вирулентности (65). Такие варианты характеризовались минимальным количеством точечных мутаций.

Антигенная активность . Животные, иммунизированные против Б, продуцируют ВНА, КСА, ПА, анти-Г А и литические (разрушающие клетки, зараженные вирусом в присутствии комплемента) АТ.

Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на теплокровных всех видов, однако в условиях лаборатории - чаще всего на мышах и сравнительно редко (требуются особые условия) на собаках. Показана различная чувствительность мышей к экспериментальному Б в зависимости от патогенных свойств вируса, пола, возраста и способа инфицирования. Показано, что патогенность v. fixe Б для взрослых мышей зависит от АГ детерминант поверхностных гликопротеинов вируса. Изменение патогенности коррелирует с замещением аргинина в позиции 333 молекулы гликопротеина другой аминокислотой. Последнее время появились сообщения о возможности выздоровления больных Б животных в естественных и экспериментальных условиях (20, 25).

Культивирование. Помимо интрацеребральных пассажей на кроликах и белых мышах ВБ (шт. Fluri-HEP и Lep) успешно репродуцируется в кулмуре фибробластов КЭ. Установлена его способность образовывать бляшки в клетках ВНК-21/13, взвешенных в агарозе. ВБ также образует бляшки в культуре CER, отличающейся высокой чувствительностью к лнс- савирусам. Показана высокая чувствительность к ВБ (шт. ТС-80 н CVS) и высокий уровень накопления АГ в зараженных перевиваемых культурах - почки сайгака (ПС) и почки эмбриона африканской козы (ПЭАК) (2).

ГА свойства. Обусловлены наличием у вируса Г А АГ, находящегося на поверхности вириона в выступах его оболочки. Было показано, что выращенный в культуре клеток и концентрированный ВБ вызывает феномен гемагглютинации. Между инфекционной и ГА активностью существует линейная зависимость, поэтому титрование вируса по инфекцион- ности может быть заменено тестом определения Г А активности.

ГАд свойства. Впервые гемадсорбирующие свойства ВБ (шт. Мочалин), выращенного в культуре первичных клеток почки сирийского хомячка, описаны в 1967 г. Феномен воспроизводился с эритроцитами гуся, курицы, сирийского хомячка, морской свинки и обезьяны при температуре 4°С. Специфичность реакции была подтверждена с помощью иммунной сыворотки; после 3-4-кратного отмывания гемадсорбция не разрушалась и не воспроизводилась с другими штаммами ВБ (Внуково, Тенчу).