ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
Морфология и химический состав. Вирионы пулевидной формы, размер их 70-175 нм (130-220). Палочковидные субъединицы (9-3-3 нм) прикреплены к нити нуклеиновой кислоты, которая свернута в спираль, состоящую из 30 витков с наружным диаметром 49 нм и 4 витков с меньшим диаметром, находящихся в полусферической части вириона.
Спиральный нуклеокапсид заключен в оболочку (толщиной 18 нм), на поверхности которой имеются характерные ворсинки длиной 10 нм. Наружная оболочка вирионов содержит фосфолипиды клетки, а внутренний спиралевидный остов представлен вирусспецифическим АГ. Наружные шиповидные выступы связаны с внутренним спиралевидным компонентом. Они пронизывают оболочку вириона, образуя на его поверхности выступы (Рис. 45). Геном ВВС - это нефрагментированная 1-нитевая молекула РНК, с мол.м. 4-4,5 МД. РНК, выделенная из вирионов (около 2%), неинфекционна. Геном содержит не менее 6 цистронов. Основные белковые компоненты ВВС Р2 и Р5, а также минорные Р1 и Р4, находятся в поверхностной оболочке вируса и частично погружены в липидную мембрану. Компонент РЗ, представляющий белок ядра вириона, изолирован оболочкой от внешней среды. При размножении вируса образуются частицы 3-х типов: полноценные инфекционные В частицы и неинфекционные дефектные LT и Т- частицы. В частицы содержат 42 S РНК, LT- 28 S РНК и Т - 23 S РНК. Предполагают, что 42 S РНК В - частиц, возможно, является продуктом “сшивания” 28S и 23S РНК, причем это “сшивание” может происходить уже на стадии соответствующих нуклеокапсидов. Образование LT и Т частиц в таком случае есть следствие дефекта этого “сшивающего” механизма, приводящего к “надеванию” внешней оболочки “несшитых” 100S и 80S нуклеокапсидов. Нуклеокапсиды В частиц имеют констангу седиментации 140S, LT100 S и T80S. В частицы содержат специфическую РНК-полимеразу, которая участвует в двух реакциях: в транскрипции и в посттранскрипционной модификации продукта РНК. В составе нуклеокапсидов всех 3-х типов частиц обнаружен основной белковой компонент (N белок) и небольшое количество L, М и NS1 белков. L белок - большой белок (мол.м. 190кД), представляет собой нерасщепленный предшественник других вирусных белков. Он ассоциирован с вирионным нуклеокапсидом и, вероятно, образует вирусную РНК - полимеразу. G белок (мол.м. 69кД) - гликопротеин, представлен двумя субъединицами G11 и G2. Они представляют собой компоненты оболочки вириона и могут быть изолированы в достаточно чистом виде с помощью протеолитических ферментов. N (мол.м. 50кД) - структурный белок нуклеокапсида всех изученных рабдовирусов. Он связан с вирионной РНК, что делает последнюю резистентной к РНК-азе. NS 1 - белок (мол.м. 40кД) - минорный компонент ядра вирусного нуклеокапсида Он связан с L и N белками так же, как и с вирионной РНК. Функция NS белка неясна. М белок-матрикс, служащий для связывания рибонуклеокапсида с белком оболочки. РНК-полимераза (транскриптаза), вероятно, представлена в вирионе L или NS1 белком, а нуклеокапсидная матрица состоит из РНК, “одетой “ N белком. Т частицы не обладают транскриптазной активностью, содержат активную транскриптазу, но не содержат активной матрицы. Основная масса нуклеокапсидов имеет констату седиментации 100S и содержит 28 S РНК. Дефектные интерферирующие частицы обладают транскриптазной активностью. Предполагают, что РНК ВВС содержит 2 различных участка, один из которых осуществляет транскрипцию, а другой - репликацию. Первый участок у РНК дефект ных частиц либо отсутствует, либо по какой-то причине не функционирует. Внутри вириона ВВС и вируса бешенства локализована эндогенная протеинкиназа, которая фосфорилирует NS1 - минорный белок нуклеокапсида и в меньшей степени М белок оболочки. Источником происхождения протеинкиназы вирионов, по-видимому, является клетка хозяина (3).Устойчивость. Добавление сыворотки к вируссодержащей суспензии способствует защите вируса от неблагоприятных воздействий. Вирус хорошо сохраняется в замороженном (-20°С и ниже) и лиофилизированном состояниях.
В 50%-ном забуференном р-ре глицерина (pH 7,5) при 4-6°С вируссодержащие материалы сохраняют активность около 4-х мес. В инфицированных кормушках и поилках вирус сохраняет активность 3-4 дня, в садовой земле при 4°С - до 30 дн. Температура 100°С и 2%-ный р-р NaOH убивают его почти мгновенно. Различные штаммы вируса неодинаково чувствительны к протеолитическим ферментам (трипсину и хемотрипсину). Высокочувствительны шт. Индиана и Нью-Джерси, малочувствителен шт. Кокэл и нечувствительны шт. Аргентина и Бразилия. Оба фермента удаляют АГ с поверхности вирионов у шт. Индиана. У шт. Бразилия удаляется около 70% АГ и остальные 30% устойчивы даже при продолжительной обработке. Он имеет поверхностные выступы 2-х типов, отличающиеся по своей устойчивости к протеолитическим ферментам.Антигенная структура. Первый растворимый АГ вируса (шт. Индиана), представляющий белок сердцевины вириона, имеет константу седиментации 208. Второй растворимый АГ (константа седиментации 6Б) реагирует перекрестно с АТ на вирусную оболочку. Данный АГ в оболочках вирусных частиц 2-х серотипов (Индиана и Нью-Джерси) различен.
Антигенная активность. Все штаммы 2-х серотипов (Индиана и Нью-Джерси) при экспериментальной инфекции индуцируют ВНА. Вирус вызывает появление в крови реконвалесцентов специфических ВНА и КСА. Первые обнаруживаются на 7-10 день болезни. КСА у КРС и лошадей можно обнаружить на 6-8 день после заражения, к 9-16-му дню они достигают максимума и, постепенно снижаясь, к 50-110-му дню исчезают. У некоторых животных ВНА в высоких титрах могут сохраняться до 13 и даже 48 мес. Выздоровевшие животные с высоким уровнем ВНА, но отрицательно реагирующие по РСК, чувствительны к повторному заражению гомологичным вирусом.
Антигенная вариабельность и родство. Имеется 4 АГ различных типа ВВС: Нью- Джерси, Индиана, Коралл и Керн-Каньон, различающихся в PH иммунологически в опытах перекрестного заражения. Однако в РСК и реакции камедь-агглютинации вирусы дают перекрестные реакции, что свидетельствует о наличии у них общего АГ.
При помощи РДП в агаровом геле также удалось выявить общий для обоих серотипов растворимый АГ. Однако субвирусные структуры, полученные при обработке вирусов твином и эфиром или дезокси- холатом натрия, в РСК давали значительные перекресты. Вероятно, типо- и штаммоспецифические особенности вирусов определяются белком, входящим в состав поверхностных структур, а за реакцию с гетерологичными сыворотками ответствен белок РНП. ВВС не имеет АГ и иммунологического родства с вирусом ящура и с вирусом везикулярной экзантемы. Серотип Нью-Джерси встречается чаще и вызываемая им болезнь протекает тяжелее, чем вызываемая шт. Индиана.Г А свойства. Серотипы Индиана и Нью-Джерси различаются по адсорбции и элюции. Оба активно сорбируются эритроцитами гусей при низкой темпера туре в узком диапазоне pH (для шт. Индиана pH 5,8, для Нью-Джерси pH 6,4). Адсорбция и гемагглютинация шт. Индиана стабильны при pH 5,8 и 37°С, тогда как шт. Нью-Джерси элюирует медленно при 0°С и pH 6,4. Оптимальные условия для постановки РГА: температура 4°С, pH 5,8 и эритроциты гусей. При 56°С ГА разрушается за 1 мин; при 35°С и pH 9,0 стабилен несколько дней. При 4°С - 60°С ГА сохраняется довольно долго. При центрифугировании вируса в градиенте плотности СБС1 ГА выявляется во фракциях плотностью 1,22-1,24 г/см3.
Экспериментальная инфекция. Легко воспроизводится на КРС, лошадях, овцах, козах, мулах, свиньях, косулях, белых мышах, морских свинках, хомяках и хорьках и нерегулярно - на кошках, крысах, кроликах, енотах. При заражении КРС в язык или десну, а также при втирании вируса в скарифицированную слизистую оболочку, развивается типичная картина болезни. При аэрозольном заражении клинически болезнь не проявляется, хотя у животных отмечают появление специфических АТ. Контактное заражение в эксперименте не всегда удается. При интрацеребральном заражении у мышей 3-4-нед возраста развивается энцефалит. У морских свинок массой 500-600 г после введения вируса в плантарную поверхность кожи лапки через 44-50 ч появляются везикулы, поражаются также почки и печень.
Кроликов удается заразить в язык (не всеми штаммами) и в мозг. Цыплят можно заразить интрацеребрально, но непрерывные серийные пассирования вируса на них не удаются. Можно заразить уток и гусей при введении материала в язык и в плантарную поверхность лапок. Возможно экспериментальное заражение голубей, енотов и лягушек. Последние после инфицирования могут быть носителями вируса в течение многих недель. Возможно случайное заражение человека при манипуляции с вирусом и при контакте с животными (2).Культивирование. Удается в 7-8-дн КЭ при нанесении материала на ХАО и инкубировании при 35°С. С возрастом чувствительность эмбрионов к вирусу снижается. Если эмбрионы в течение 1-2 дн не погибают, у них развиваются пролиферативные, а затем некротические изменения на оболочке. Вирус размножается также в аллантоисной полости. Кроме КЭ, вирус удается культивировать на мышатах-сосунах 7-10-дн возраста, зараженных интрацеребрально и интраперитонеально. Титры вируса в КЭ и мышатах-сосунах могут достигать 107,5-109 ИД 50/мл. Вирус культивируют также в первичных культурах фибробластов КЭ и клетках почечной ткани морских свинок, КРС, свиней, а также во многих перевиваемых линиях клеток различного происхождения (L, HeLa, КВ, КЕМ, СОЦ, Hep, RES и др.). Размножение его сопровождается развитием ЦПИ. В монослойной культуре почечных клеток под агаровым покрытием вирус вызывает образование бляшек. Его можно титровать методом бляшек. Все штаммы ВВС размножаются в дрозофиле. Наиболее адаптированы к ней серотипы Нью-Джерси и Бразильский. У зараженных дрозофил возникает такая же чувствительность к СОг, как и при заражении вирусом сигма.
Еще по теме ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ:
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ.
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ
- ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ