Определение сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином.
Реактивы: резорциновый реактив.
Реактив готовят в мерной колбе на 100 мл. 200 мг резорцина растворяют в 10 мл дистиллированной воды, добавляют 80 мл концентрированной соляной кислоты (плотность 1,19) и 0,25 мл 0,1 моль/л раствора меди сульфата, смешивают, объем доводят дистиллированной водой до 100 мл. Реактив можно использовать через 4 ч после приготовления. Годен в течение 1 мес при хранении в холодильнике;реактив для экстракции. 85 мл бутилацетата смешивают с 15 мл бутилового спирта;
5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты;
основной калибровочный раствор. 50 мг%-ный водный раствор И-ацетилнейраминовой кислоты. 0,5 мг кристаллической Ы-аце- тилнейраминовой кислоты (мол. масса 309) растворяют в 1 мл воды.
- мл основного калибровочного раствора содержит 0,5 мг N-ацетил- нейраминовой кислоты.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; водяная баня.
Ход определения. К0,1мл сыворотки или плазмы крови добавляют 1,9 мл 5%-ного раствора трихлоруксусной кислоты, перемешивают и помещают в кипящую водяную баню на 7 мин (точно). Охлаждают в проточной воде до комнатной температуры, фильтруют через бумажный фильтр. К 0,5 мл прозрачного фильтрата (соответствует 0,025 мл сыворотки) добавляют 0,5 мл дистиллированной воды. В каждую пробирку вносят по 1 мл резорцинового реактива, закрывают стеклянными пробками и помещают на 15 мин в кипящую водяную баню (пробирки закрывают пробками для уменьшения испарения), охлаждают проточной водой, добавляют по 3 мл раствора для экстракции, встряхивают, оставляют на 15 мин для расслоения фаз.
Верхний окрашенный слой отсасывают и измеряют на ФЭКе при длине волны 575—590 нм (желтый светофильтр) в кювете с толщиной слоя 0,5 см против контроля.Контроль. К 1 мл дистиллированной воды прибавляют 1 мл резорцинового реактива, помещают на 15 мин в кипящую водяную баню, охлаждают в проточной воде до комнатной температуры, добавляют 3 мл раствора для экстракции, встряхивают, отсасывают верхний слой, который используют в качестве контроля.
Для построения калибровочного графика готовят разведения (рабочий раствор) из основного калибровочного раствора И-аце- тилнейраминовой кислоты (табл. 19).
19. Разведения для построения калибровочного графика
|
0,1 |
0,9 |
50 |
162 |
200 |
0,65 |
|
0,2 |
0,8 |
100 |
324 |
400 |
1,29 |
|
0,3 |
0,7 |
150 |
485 |
600 |
1,94 |
|
0,4 |
0,6 |
200 |
647 |
800 |
2,59 |
|
0,5 |
0,5 |
250 |
809 |
1000 |
3,24 |
Основной раствор Л'-ацетилнейрамино- вой кислоты, мл
Вода, мл
Содержание в 1 мл
Концентрация в плазме
мг/л
ммоль/л
Из каждого рабочего калибровочного раствора с указанной концентрацией берут по 1 мл, добавляют по 1 мл резорцинового реактива и далее обрабатывают так же, как опытные пробы. Расчет ведут по калибровочному графику.
Клиническое значение.
Сиаловые кислоты являются N-ацетильными производными нейраминовой кислоты, играющей важную роль в качестве строительных блоков структурных полисахаридов. Нейраминовая кислота представляет собой производное девятиуглеродной сахарной кислоты. Ее можно рассматривать как продукт присоединения шестиуглеродного аминосахара к трехуглеродной сахарной кислоте. Нейраминовая кислота и ее производные — сиаловые кислоты в свободном состоянии присутствуют в крови, ликворе, слюне и других биологических субстратах.Содержание нейраминовых кислот в сыворотке крови резко возрастает при многих инфекционных заболеваниях, раковых опухолях, лейкозах, дистрофических и воспалительных процессах в почках (нефроз, нефрит) и печени (гепатоз), а также при поражении соединительной ткани (коллагенозы) и сердечной мышцы.
Источник'. 43.
Еще по теме Определение сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином. :
- Определение активности сорбитолдещдрогеназы (СДГ) в сыворотке крови по реакции с резорцином (метод Севела—Товарека).
- Определение мочевой кислоты в сыворотке крови по реакции с фосфорно-вольфрамовым реактивом.
- Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом.
- Определение мочевой кислоты в сыворотке крови животных с использованием заводского набора реактивов.
- Определение железа в сыворотке крови по цветной реакции с сульфонированным (3-фенантролином.
- Определение содержания неэтерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в сыворотке (плазме) крови (по Лауреллу и Тибблингу).
- Определение магния в сыворотке (плазме) крови по цветной реакции с титановым желтым (по Кункелю, Пирсону, Швейгерту в модификации И. В. Петрухина).
- Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.
- Определение молочной кислоты по реакции с параоксидифени- лом.
- Определение белковых фракций в сыворотке крови.
- ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЕСТОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (DIAGNOSTICAUTOMATIONINC., США)
- Определение свободного аминного азота в сыворотке крови по методу Г. А. Узбекова в модификации 3. С. Чулковой.
- Определение общего кальция в сыворотке крови комплексоном Арсеназо III.