Определение белковых фракций в сыворотке крови турбидимет- рическим (нефелометрическим) методом.  

Реактивы: основной фосфатный раствор. 33,5 г натрия гидроксида (ч. д. а., х. ч.) растворяют в 400 мл дистиллированной воды, добавляют 226,8 г калия фосфата однозамещенного (КН2РО4, ч. д. а., х. ч.). После растворения охлаждают до комнатной температуры и добавляют дистиллированную воду до объема 500 мл;

рабочие фосфатные растворы. В мерные колбы на 100 мл берут 92,4 мл (№ 1), 74,9 мл (№ 2), 58,8 мл (№ 3), 48,7 мл (№ 4) основного фосфатного раствора и доводят объем дистиллированной водой до метки. Тщательно размешивают путем встряхивания. При хранении разведенных растворов для предупреждения бактериального загрязнения добавляют по 1 капле хлороформа на 100 мл раствора.

Оборудование: фотоколориметр; химические пробирки; пипетки на 1, 2, 5, 10 мл, бюретка; мерные колбы на 100 и 500 мл.

Ход определения. На каждую пробу сыворотки крови в штатив устанавливают по 6 пробирок, обозначив их № 0, 1, 2, 3,

4. и 5. В пробирку № 0 вносят 10 мл дистиллированной воды, в пробирки № 1, 2, 3 и 4 — по 5 мл соответствующих рабочих фосфатных растворов (№ 1—4). В пробирку № 5 вносят 0,5 л сыворотки крови, 0,75 мл дистиллированной воды и 3,75 мл основного фосфатного раствора, закрывают пробкой и перемешивают путем перевертывания ее 5—6 раз. После этого переносят по 0,5 мл смеси в пробирки № 1, 2, 3, 4 и 1 мл в пробирку № 0. Содержимое пробирок тщательно, но осторожно перемешивают, избегая образования пузырьков воздуха. Через 15 мин определяют на ФЭКе оптическую плотность (Е) растворов при красном светофильтре в кювете с толщиной слоя 1 см против контроля (проба № 0).
   Проводят измерение в обратной последовательности — сначала в пробирке № 4, а затем в пробирках № 3, 2 и 1.

Расчет ведут по схеме: Е пробирки № 1 — Е пробирки № 2= = Е альбуминов; Е пробирки №2 — Е пробирки № 3 = Е а-глобу- линов; Е пробирки № 3 — Е пробирки № 4 = Е Р-глобулинов; Е пробирки №4 = ? у-глобулинов.

Принимая сумму Е альбуминов и Е всех глобулиновых фракций за 100 %, вычисляют содержание каждой фракции в относительных процентах. Зная концентрацию общего белка сыворотки крови, можно произвести пересчет в абсолютные величины.

Пример расчета: Е пробирки № 1 = 0,800; Е пробирки № 2 = = 0,400; Е пробирки № 3 = 0,300; Е пробирки № 4 = 0,200. Тогда Е альбуминов составит 0,800 — 0,400 = 0,400; Е у-глобулинов 0,400 —

• 0,300 = 0,100; Е Р-глобулинов 0,300 — 0,200 = 0,100; Е у-глобули- нов = 0,200.

Для облегчения расчета нулевые знаки в показаниях экстинк- ции не учитывают. Ошибка метода составляет + 4 %.

Источники: 32, 52.

Клиническое значение. Альбумин — простой низкомолекулярный белок (40—70 тыс. дальтон), синтезируется в печени. Основные его функции — связывание воды, обеспечение коллоидно-осмотического (онкотического) давления, транспорт ионов магния, кальция, билирубина, СЖК, стероидных гормонов и других веществ эндогенного и экзогенного происхождения.

Снижение содержания альбумина наблюдается при уменьшении его синтеза, обусловленного поражением печени (гепатит, гепатоз,

цирроз, амилоидоз печени), острой и хронической пневмонией, бронхопневмонией, лейкозом и др.; при недостатке протеина в кормах, плохом его усвоении, больших потерях с мочой (алиментарная дистрофия, гипокобальтоз, диарея до наступления обезвоживания).

Увеличение содержания альбуминов встречается очень редко и чаще связано с дегидратацией организма.

Из а|-глобулинов в сыворотке крови обнаруживают два белка: а!-антитрипсин и а(-гликопротеин, а]-Антитрипсин — ингибитор ряда протеаз. Его содержание повышается при механическом повреждении тканей и воспалительных заболеваниях.

аг-Глобулины содержат аг-макроглобулин, гаптоглобин и церу- лоплазмин. с^-Макроглобулин — цинксодержащий гликопротеин с большой молекулярной массой. Ингибирует протеолитические ферменты трипсин, химотрипсин, тромбин, плазмин и калликре- ин. Содержание его увеличивается при циррозе печени, нефрозе, сахарном диабете, снижается при ревматоидном полиартрите.

Гаптоглобин связывает и транспортирует свободный гемоглобин А в клетки ретикулоэндотелия. Содержание его снижается при гепатите, гемолитической анемии, увеличивается при острых воспалительных процессах, сахарном диабете.

Церулоплазмин — медьсодержащий белок, окисляет трехвалентное железо в двухвалентное. Уровень его растет при остром воспалительном процессе, холестазе, ревматоидном артрите, снижается при циррозе печени, хроническом гепатите.

Содержание а2-глобулинов в крови здоровых животных незначительное.

Р-Глобулины содержат два белка — трансферин и гемопексин. Трансферин участвует в транспорте трехвалентного железа, снижается его содержание при воспалительных процессах. Гемопексин переносит сывороточный гем. Уровень его падает при гемолитической анемии, заболеваниях печени, нефротическом синдроме, повышается — при воспалительном процессе.

у-Глобулины — иммунные белки. Уровень их повышается при инфекционном воспалительном процессе, а также за счет патологических белков — парапротеинов, относящихся к иммуноглобулинам. Увеличение содержания у-глобулинов, умеренное повышение уровня р-глобулинов при заметном снижении альбуминов присуще гепатиту, токсическому гепатозу, лейкемии, злокачественным новообразованиям, воспалению легких и бронхов.

Снижение у-глобулинов отмечают у новорожденных животных при физиологической незрелости иммунной системы, иммунных дефицитах. Гипогаммаглобинемию отмечают при белковом недокорме, истощении, воздействии на организм радиации.

Выраженное увеличение количества а-глобулинов с умеренным снижением альбуминов характерно для поздней стадии пневмонии, хронического эндокардита, холецистита, уроцистита, пиелита, токсикозов беременности.

Повышение уровня а2- и р-глобулинов при значительном снижении количества у-глобулинов бывает при липоидном и амилоидном нефрозе, нефрите, нефросклерозе, токсикозе беременности, кахексии, злокачественных новообразованиях.

Значительное увеличение содержания у-глобулинов, умеренное увеличение (3-глобулинов при заметном снижении количества альбуминов присуще гепатитам, токсическому гепатозу, кетозу, гемолитическим процессам, лейкемиям и злокачественным новообразованиям кроветворного и лимфатического аппарата.

При циррозе печени, коллагенозе и некоторых других болезнях наблюдают значительное снижение содержания альбуминов и заметное увеличение у-глобулинов.