Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом.  

Реактивы: трихлоруксусная кислота, 100 г/л;

диацетилмонооксим, 25 г/л воды.

0,25%-ный раствор тиосемикарбозида (или 0,32%-ный раствор тиосемикарбозида гидрохлорида). Реактивы устойчивы при хранении в посуде из темного стекла;

серная кислота концентрированная;

85%-ная ортофосфорная кислота;

железа хлорат;

основной раствор железа хлората. 5 г хлорного железа растворяют и доводят дистиллированной водой до 100 мл, затем прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты;

рабочий раствор железа хлората. 1 мл основного раствора железа хлората доводят до 100 мл дистиллированной водой, добавляют 8 мл концентрированной серной кислоты и 1 мл 85%-ной орто- фосфорной кислоты. Хранят в темной посуде. Реактив годен в течение 2 нед;

цветной реактив. К 30 мл рабочего раствора железа хлората добавляют 20 мл дистиллированной воды, 1 мл 2,5%-ного раствора диацетилмонооксима и 0,25 мл 0,25%-ного раствора тиосемикарбозида. Цветной реактив готовят каждый раз перед употреблением;

калибровочный раствор мочевины — 25 мг%. 250 мг мочевины (х. ч.), высушенной в сушильном шкафу при 105 °С до постоянной массы, растворяют в мерной колбе на 1 л дистиллированной водой. В качестве растворителя можно использовать 0,2%-ный раствор бензойной кислоты (0,2 г кристаллической бензойной кислоты растворяют в 100 мл дистиллированной воды при интенсивном помешивании и нагревают на водяной бане). Стандарт, приготовленный на растворе бензойной кислоты, более стабилен, чем водный. Оба раствора при работе должны давать небольшие колебания экстинкции на ФЭКе.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; водяная баня; центрифуга; центрифужные пробирки; алюминиевая фольга.

Ход определения. В центрифужную пробирку вносят

0. 8 мл дистиллированной воды, 0,2 мл сыворотки крови и 1 мл 10%-ного раствора трихлоруксусной кислоты. Перемешивают и оставляют на 10—20 мин, центрифугируют 15—20 мин при 3000 мин-1. В чистую пробирку вносят 0,5 мл прозрачной надосадочной жидкости (не взмучивая осадок) и 5 мл цветного реактива. Пробирку закрывают резиновой пробкой, обернутой алюминиевой фольгой, выдерживают в кипящей водяной бане 20 мин (точно) и затем охлаждают в течение 2—3 мин под струей водопроводной воды. Измерение проводят на ФЭКе при длине волны 530—560 нм (зеленый светофильтр) против холостой пробы в кювете с толщиной слоя 1 см не позднее чем через 15 мин после охлаждения.

Холостую пробу ставят так же, как опытную, но вместо надосадочной жидкости берут 0,5 мл дистиллированной воды. Одновременно определяют содержание мочевины в стандартной пробе. Стандартную пробу обрабатывают аналогично опытной, но вместо сыворотки берут 0,2 мл стандартного раствора мочевины.

Расчет проводят по формуле

где х — концентрация мочевины в сыворотке крови, мг%; Еоп — экстинкция опытной пробы; Е„ — экстинкция стандартной пробы; 25 — концентрация мочевины в калибровочном растворе, мг%.

Для перевода мг% в ммоль/л полученную величину умножают на коэффициент 0,1665. Ошибка метода составляет ±4 %.

Источник’. 43.

Клиническое значение. Мочевина — основной конечный продукт азотистого обмена. Синтезируется главным образом в печени, а у жвачных животных, кроме того, в стенке рубца из азота аммиака, аминокислот и амидов. Непосредственный предшественник мочевины в печени — гуанидиновая группировка аминокислоты аргинина. На долю мочевины приходится не менее половины остаточного азота крови и 80—83 % мочи.

Мочевина главным образом выделяется почками, у жвачных животных часть ее поступает в преджелудки со слюной, где распадается до аммиака и углекислого газа с последующим использованием продуктов распада рубцовой микрофлорой.

Значительное повышение содержания мочевины в крови (уремия) наблюдается при циркуляторной недостаточности почек, при которой нарушается фильтрация в клубочках. Такая патология возникает при сердечной недостаточности и дегидратации. Наиболее частые причины уремии — заболевания, при которых поражаются преимущественно почечные клубочки (хронический нефрит), или задержка выделения мочи при мочекаменной болезни, аденоме предстаты и др. Уремией сопровождается почечная недостаточность.

Повышение содержания мочевины в крови наблюдали при алкалозе рубца, скармливании животным большого количества гороха, зеленых бобовых кормов (вико-овсяная смесь, горохо-овсяная смесь). Резкую уремию (до 200 мг%) наблюдают у тяжело больных диспепсией телят (И. П. Кондрахин).

Продукционная гиперазотемия возникает при механических повреждениях тканей, обширных ожогах, лихорадочных состояниях, когда идет усиленный распад тканевых белков.

Тяжесть уремии связана не с концентрацией самой мочевины (она малотоксична), а с накоплением токсических производных гуанидина — гуанидинянтарной кислоты, метилгуанидина, гауни- динуксусной и гуанидинпропионовой кислот, которые образуются в организме вследствие нарушения нормального синтеза мочевины из арганина.

Уменьшение содержания мочевины в крови бывает при длительном белковом недокорме, при нарушении мочевинообразовательной функции печени, наблюдаемой при кетозе коров.