Определение мочевой кислоты в сыворотке крови по реакции с фосфорно-вольфрамовым реактивом.
Принцип.
Мочевая кислота восстанавливает фосфорно-вольфрамовый реактив с образованием соединения голубого цвета. Интенсивность окраски пропорциональна концентрации мочевой кислоты.Реактивы: серная кислота (ч. д. а., х. ч.), 0,35 моль/л. К 200 мл дистиллированной воды добавляют 10 мл концентрированной серной кислоты (плотность 1,84) и доводят объем водой до 500 мл;
натрий вольфрамовокислый двухводный (Ма2\\Ю4 • 2Н2О,
ч. д. а.), 100 г/л. Растворяют 50,0 г вольфрамовокислого натрия в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем до 500 мл;
натрия карбонат (Ка2СОз, ч. д. а.), 103 г/л. Растворяют 51,5 г натрия карбоната в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем до 500 мл;
85%-ная ортофосфорная кислота (ч. д. а.);
лития сульфат (^804 • Н2О, ч. д. а.);
лития карбонат (и2СОз, ч. д. а.);
фосфорно-вольфрамовый реактив. В круглодонную колбу вместимостью 1,5 л вносят 40,0 г вольфрамовокислого натрия и 300 мл дистиллированной воды. Добавляют 32 мл 85%-ной ортофосфор- ной кислоты и несколько стеклянных бусинок. Осторожно кипя
тят в течение 2 ч на песочной или глицериновой бане с обратным холодильником. Охлаждают до комнатной температуры и доливают дистиллированной водой до 1 л. Добавляют 32,0 г лития сульфата. Раствор стабилен при хранении в холодильнике; мочевая кислота (имп.); формалин, не менее 37,5 % формальдегида; основной калибровочный раствор мочевой кислоты, 6 ммоль/л.
Растворяют 0,6 г карбоната лития в 150 мл дистиллированной воды, фильтруют и нагревают до 60 °С. Взвешивают 1,017 г мочевой кислоты, вносят в предварительно нагретую мерную колбу вместимостью 1 л, вливают теплый раствор лития карбоната и быстро встряхивают. После растворения мочевой кислоты колбу охлаждают до комнатной температуры, добавляют 20 мл раствора формалина, наливают 300—350 мл дистиллированной воды. Добавляют несколько капель раствора метилового оранжевого, затем встряхивают, медленно добавляют 20—22 мл 0,35 моль/л серной кислоты до появления розового цвета. Доливают колбу до метки дистиллированной водой. Раствор стабилен при хранении в холодильнике в посуде из темного стекла. 1 мл раствора содержит 0,006 ммоль/1 мг мочевой кислоты;рабочий калибровочный раствор мочевой кислоты, 0,3 ммоль/л.
- мл основного калибровочного раствора в мерной колбе доводят до 100 мл дистиллированной водой. Стабилен в течение 2 нед при хранении в холодильнике.
Оборудование: фотоэлектроколориметр; баня песочная или глицериновая; обратный холодильник.
Ход определения. Опытная проба. К 8 мл дистиллированной воды прибавляют 1 мл сыворотки, 0,5 мл 0,35 моль/л серной кислоты и перемешивают. Добавляют 0,5 мл раствора вольфрамовокислого натрия и тщательно перемешивают. Через 5—10 мин фильтруют. К 3 мл фильтрата добавляют 1,5 мл раствора натрия карбоната, перемешивают. Затем добавляют 1 мл фосфорно-вольфрамового реактива, перемешивают, переворачивая пробирку. Через 30 мин измеряют на ФЭКе в кювете с толщиной слоя 1 см при длине волны 590—700 нм (красный светофильтр) против холостой пробы.
Холостая проба. Ставят так же, как опытную, но вместо фильтрата берут 3 мл дистиллированной воды.
Калибровочная проба. Ставят и измеряют так же, как опытную, но вместо фильтрата берут 3 мл рабочего калибровочного раствора с содержанием 0,3 ммоль/л мочевой кислоты.
Формул
Концентрация мочевой кислоты (х) в ммоль/л составит
При пересчете ммоль/л в мг% полученную величину делят на 0,059 или умножают на 16,94.
Например, найденная величина мочевой кислоты составила 0,24 ммоль/л, это будет соответственно 4,06 мг%.
Источник: 55.
Еще по теме Определение мочевой кислоты в сыворотке крови по реакции с фосфорно-вольфрамовым реактивом. :
- Определение мочевой кислоты в сыворотке крови животных с использованием заводского набора реактивов.
- Определение сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином.
- Определение мочевины в сыворотке крови по цветной реакции с диацетилмонооксимом.
- Определение активности у-глутамилтранспептидазы (у-глута- милтрансферазы) в сыворотке крови с помощью набора реактивов.
- Определение неорганического фосфора в сыворотке крови с ва- надат-молибденовым реактивом (по Пулсу в модификации В. Ф. Коромыслова и Л. А. Кудрявцевой).
- Определение железа в сыворотке крови по цветной реакции с сульфонированным (3-фенантролином.
- Определение активности сорбитолдещдрогеназы (СДГ) в сыворотке крови по реакции с резорцином (метод Севела—Товарека).
- Определение содержания неэтерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в сыворотке (плазме) крови (по Лауреллу и Тибблингу).
- Определение магния в сыворотке (плазме) крови по цветной реакции с титановым желтым (по Кункелю, Пирсону, Швейгерту в модификации И. В. Петрухина).
- Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.
- ФОСФОРНЫЕ УДОБРЕНИЯ, СОДЕРЖАЩИЕ ФОСФОРНЫЕ СОЕДИНЕНИЯ, НЕРАСТВОРИМЫЕ В ВОДЕ, НО РАСТВОРИМЫЕ В СЛАБЫХ КИСЛОТАХ
- Определение молочной кислоты по реакции с параоксидифени- лом.
- Определение нитратов в кормах, крови, молоке и патологическом материале с использованием реактива Грисса.
- Определение нитритов в кормах, крови и патологическом материале с использованием реактива Грисса.
- Определение белковых фракций в сыворотке крови.
- ОПРЕДЕЛЕНИЕ ТЕСТОСТЕРОНА В СЫВОРОТКЕ КРОВИ (DIAGNOSTICAUTOMATIONINC., США)
- Определение общего кальция в сыворотке крови комплексоном Арсеназо III.