ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Морфология и химический состав. ГА - один из самых крупных белков в вирионе, на его долю приходится 25-35% белков. Он ответствен за прикрепление вирусной частицы к клетке хозяина и вовлекается в начальные стадии инфекции. Именно против Г А направлены АТ, нейтрализующие инфекционность вируса гриппа. Ввиду столь важной роли ГА в развитии инфекции, структура этого белка привлекла внимание многих исследователей, и к настоящему времени в структурном отношении он наиболее изучен (23). Часть сахаров ГА ВГП может изменяться в различных хозяйских клетках даже в течение одного пассажа (17).

Второй поверхностный АГ вируса гриппа - нейрамииидаза. Этот фермент в составе вируса гриппа известен с 1942 г., одиако функциональная роль его в репродукции вируса до сих пор в полной мере не выяснена. Предполагается, что главная функция нейраминидазы - предотвращение агрегации вирусных частиц иа поверхности клеток. Также известно, что иейраминидаза играет большую роль в иммунологии и патогенезе заболевания.

Устойчивость. При температуре 55°С ВГП инактивируется за 1 ч, при 60°С - за 10 мин, при 65-70°С - за 2-5 мии. При низких температурах и в лиофилизированном состоянии (при -30°С в запаянных ампулах в тёмном месте) сохраняется до 2 лет. В присутствии MgCl2 вирус инактивируется быстрее, а MgS04 стабилизирует его. ГА и инфекционность вируса обычно сохраняются при - 60 °С несколько лет, а при 4°С - несколько недель. Г А свойства более стабильны, чем инфекционные. Инфекционность и ГА-активность вируса можно сохранить, если в осадок добавить простой белок (протамин), квасцы или фосфат кальция или же обработать 35%-ным метанолом при -5°С. Инфекционность вируса пропадает при обработке его формальдегидом, детергентами, оксидированными агентами (йодин), слабыми кислотами, додецилсульфатом, гидроксиламином, ионами аммония. Степень термоинактивации оказалась различной для штаммов, выделенных в одной и той же географической зоне.

Антигенная вариабельность и родство. В настоящее время вирусы гриппа А птиц на основании их поверхностных АГ - ГА (Н) и нейраминидазы (N) - разделены на 13 по Н-АГ и 9 вариантов по N-AГ (табл.VIII.2.) Штаммоспецифические АГ-связи определяются с помощью: РТГА - для определения сходства по ГА; РТНА - для определения сходства или различия по НА; теста двойной диффузии - для определения сходства ГА и НА. У штаммов вируса гриппа А птиц, имеющих АГ характеристику H1N1, выявлено не менее 4 АГ детерминант нейраминидазы. Четкие различия выявлены также у НА штаммов вируса гриппа А птиц с АГ формулой H3N8, следовательно, НА штаммов вируса гриппа А птиц с АГ характеристиками H1N1 и H3N8 имеет на своей поверхности не менее 4-х АГ различных детерминант: 1 общую для вирусов, имеющих одинаковый сероподтип, 2 - перекрестно реагирующих и 1 - штаммоспецифическую (7).

Таблица VIII.2. Обозначения серотипов вируса гриппа А птиц Серовариант Наименование штамма Формула 1. А/утка/ Альберта/35/76/ H1N1 2. А/утка/Г ермания/1215/73 H2N3 3. А/утка/У краина 1/63 H3N8 4. А/утка/ЧССР/56 H4N6 5. А/крачка/Ю. Африка/61 H5N3 6. А/индюк/Массачусетс/3740/65 H6N2 7. А/вирус чумы птиц/Росток/34 H7N1 8. А/утка/Онтарио/6118/68 H8N4 9. А/индюк/В исконсин( 1 /66) H9N2 10. А/цыпленок/Г ермания/49 H10N7 11. А/Утка/Англия/5 6 H11N6 12. А/утка/ Альберта/ 60/16 H12N5 13. А/черноголовый хохотун/Астрахань/142/7 H13N2

Кроме 13 подтипов Г А, все штаммы ВГП содержат в своей структуре НА или птичьего, или человечьего, или лошадиного происхождения. Собственно птичьей НА известно 6 типов. Подтиповая классификация ВГП продолжается и по сегодняшний день, т.к. новые факты выделения их от птиц различных видов регистрируются ежегодно в различных регионах земного шара. В 1971 г. была опубликована номенклатура вирусов гриппа А, рекомендованная группой экспертов ВОЗ. Согласно этой рекомендации каждый штамм обозначается по месту и времени выделения, а в скобках указывается его АГ формула. Эта номенклатура себя оправдала, однако накопившиеся за последние годы данные требуют ее пересмотра. В 1980 г. ВОЗ предложила новую номенклатуру ВГП. Предложено обозначать серотипы ГА и НА последовательными номерами, независимо от происхождения вирусов. Таблица эталонных штаммов ВГП свидетельствует о том, что изменения нуклеотидной последовательности

и, как следствие, замена аминокислотных остатков сопряжено с изменением патогенности вируса гриппа в отношении птиц и КЭ. Так, например, изолят А/индюк/Висконсин/68 (H5N9) ВГП состоит из 2-х популяций вируса, имеющих разные гены NS и вызывающих разные биологические реакции в КЭ: быструю (эмбриолетальную - /REL/) или медленную (эмбриолетальную - /SEL/) летальность.

Дикие водоплавающие птицы - резервуар различных подтипов Г А (Н) и нейраминидазы (N) вируса гриппа. В этих популяциях заражения часто происходят там, где водоплавающие птицы, свиньи и люди живут близко и за счет генной реассортации могут образовываться новые более патогенные штаммы вируса гриппа (11). Анализ АГ свойств методами ИФА и РТГА свидетельствует о родстве внутренних белков “человеческих” и “птичьих” вирусов гриппа и различиях в структуре поверхностного гликопротеина - ГА. Вирус гриппа А с АГ формулой H2N2 не выделятся от человека с 1968 г, но изолируется от птиц и, в случае реверсии, может стать эпидемическим (2). Выделенный в Японии в 1925-1926 г. ГА вирус чумы птиц шт. Chiba имеет АГ состав Havl Neql и обозначен как вирус гриппа А/курица/ Япония/25 (HavlNeql) (20). Основные направления изучения АГ-вариабельности вируса гриппа А птиц - это характеристика Г А и НА первичной структуры белков клеточных мембран, которые служат мишенью для адсорбции вируса (18).

Антигенная активность. Вирусы гриппа индуцируют в организме больной и переболевшей птицы АТ, обладающие анти-ГА- и КС свойствами. В экспериментальных условиях специфические АТ можно получить на кроликах, крысах и морских свинках как на нативный вирулентный вирус, так и на инактивированный р-пропиолактоном.

Экспериментальная инфекция. Вирусы КЧП (грипп А - H7N1, а также H5N3) патогенны для кур и цыплят при любом методе заражения. Белые мыши заболевают при заражении в носовую полость и мозг. Некоторые штаммы токсичны при внутривенном введении. Экспериментальное заражение вирусом других подтипов иногда протекает бессимптомно. Экспериментальная инфекция у восприимчивых птиц зависит от вирулентности вируса, степени его адаптации и сопутствующих инфекций (микоплазмоз, колибактериоз, ас- пергиллёз и др.).

Культивирование. Все штаммы ВГП хорошо размножаются в КЭ при заражении в аллантоисную или амниотическую полость. Накопление вируса зависит от вирулентности штамма и степени его адаптации к этой системе. Все штаммы КЧП уже в 1-ом пассаже (при выделении) вызывают гибель эмбрионов через 26-36 ч, по мере адаптации вирулентность их возрастает, достигая 107-108 ЭЛД50/Мл и выше. Вирус гриппа А6 слабовирулентен для эмбрионов, и ГА-титр его возрастает. Одни штаммы ВГП после адаптации размножаются в культуре клеток фибробластов КЭ, почек обезьян и других первично-трипсинизированных культурах клеток. Другие дают в определённых клеточных культурах один цикл размножения, продуцируя инфекционный вирус. Так размножаются вирусы КЧП в L-клетках и некоторые штаммы гриппа птиц в диплоидных культурах клеток человека. Вирус КЧП, адаптированный в культуре клеток WI-38, развивался в миелобластах цыплят, заражённых вирусом миелобластоза, и в первичных культурах клеток лёгких эмбриона человека. Большинство штаммов вируса дают бляшки в первичной культуре клеток фибробластов.

Нейраминидазная активность. Нейраминидазная активность штаммов ВГП не зависит от ГА- и инфекционной активности и не коррелирует с ними (5) .

ГА свойства. Все ВГП агглютинируют эритроциты кур, морских свинок, кроликов, лошадей, овец и других животных. В отличие от вируса НБ штаммы вируса КЧП агглютинируют эритроциты лошади и овцы. Это свойство используют для дифференциации выделенных на эмбрионах штаммов вируса КЧП и НБ.

Эталонные штаммы ВГП (смесь различных сероподтипов) обладают разной ГА- (1:64- 1:1024) и инфекционной активностью (5,28-8,70 ЭИД50/мл) при однотипных условиях накопления (табл. VIII.3.)

Таблица VIII.3. Сравнительная характеристика Г А

и инфекционной активности штаммов Вирусы Титр ГА ЭИДдомл NA актиность на 1 ГАЕ А/цыпленок/Г ермания/49(Н10N7) 1 1024 6,27-7,66 1,64-10,5 А/утка/Англия/56(Н11N6) 1 128-1:512 5,66-7,80 42,0-299,0 А/утка/Чехословакия/ 5 6(H4N 6) 1 64-1:256 5,39-8,70 39,0-157,0 А/крачка/Ю. Африка/61 (H5N3) 1 64-1:256 6,77-8,23 26,0-165,0 А/индюшка/Массачусетс/5 6(H6N2) 1 128-1:512 5,84-8,31 6,0-39,0 А/утка/У краина/63 (НЗ N 6 8) А/индюк/ О 1 126-1:256 5,28-7,66 85,0-390,0 нтарио/6118(H8N4) 1 128-1:512 6,59-8,0 1,2-2,58

МА-активность в условных единицах (у) у разных штаммов варьирует в пределах от 1,2 до 390 у. ГАд свойства проявляются с эритроцитами кур, при культивировании вируса в культуре фибробластов КЭ.