ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Источники и пути передачи инфекции. Птичий АВ серотипа 1 передаётся не только горизонтально, но и вертикально - через яйцо. Однако при эксперментальном заражении далеко не всегда удаётся воспроизвести вертикальный путь передачи инфекции.

При горизонтальной передаче инфекции помёт - основной источник заражения. Высокий титр вируса в помёте способствует тому, что оральная передача вируса может проходить через заражённую воду или корм. Аэрогенный путь заражения играет значительную роль, когда заболевание проявляется респираторной инфекцией в комплексе с микоплазмами и ИБК. У индеек, заражённых вертикальным путём, передача вируса наблюдалась оральным и респираторным путями. Через 7 дн вирус был выделен из респираторного тракта, а через 11 дн - из помёта. Для вирусов геморрагического энтерита индюков и вируса болезни мраморной селезёнки фазанов трансовариальная передача не доказана. Эти вирусы передавались через помёт и при 37°С сохраняли патогенные свойства в течение нескольких недель. Вирус геморрагического энтерита индюков был выделен из подстилки (37, 49). В распространении вируса CELO участвуют различные птицы - переносчики. Вирус выделяли от диких птиц и от индюков, гусей, голубей, фазанов, куропаток.

Контагиозность АВ птиц не очень высока, и заражение стада протекает относительно медленно. Но поскольку эти вирусы в окружающей среде сохраняют активность долгое время, имеется возможность частых и повторных заражений восприимчивого поголовья (8).

Чрезвычайно сложно установить роль АВ при заболеваниях птицы в хозяйствах, поскольку имеется 12 серотипов, которые в разных сочетаниях могут циркулировать в организме здоровых цыплят. Пассивные материнские и активно приобретённые АТ защищают только от инфекции, вызванной гомологичным серотипом АВ, поэтому иногда на одной ферме, в одном стаде или даже у одной и той же птицы выделяют АВ нескольких серотипов.

Спектр патогенности АВ птиц в естественных условиях. Серологические исследования показали, что CELO-инфекция может быть у индеек, фазанов, дроздов-белобровиков, дроздов и лебедей, но основной хозяин - куры. По данным серологических исследований достоверно показано наличие АВИ у уток и других видов мигрирующих птиц. В Японии погибло 200 попугаев в течение 2 нед после прибытия из других стран. При гистопатологиче- ском исследовании в эпителии почечных канальцев и в рогах матки обнаружены внутриядерные включения 2-х видов.

ДИАГНОСТИКА

Поскольку эпизоотологическое наблюдение с учетом количества заболевших, клинических проявлений болезни и патологических изменений при АВИ не поддается анализу и во многих случаях инфекция протекает незамеченной, диагностика (групповая и типовая идентификация АВ) основана на использовании лабораторных тестов.

Выделение и идентификация вируса. Для выделения вируса лучший источник - ткани со специфическими поражениями, трахея, клоака, а также культура клеток, зараженная 10%-ной суспензией пораженного органа или помета. Для клеточных культур используют печень, почки и легкие эмбриона кур, однако культура клеток фибробластов тех же эмбрионов и культура клеток трахеи не чувствительны. Однако при этом всегда имеется риск контаминации, если эмбрионы или куры получены не из SPF-стад. Поэтому всегда необходимо ставить контроль для культуры клеток. При отрицательном результате в первом пассаже необходимо продолжать пассирование изолята. Как правило, делают не менее 2-3 пассажей в культуре клеток и 3-5 пассажей на эмбрионах. В то же время вирус может быть изолирован из кишечника клинически здоровых птиц.

QBV и CELO-вирусы были вначале изолированы из аллантоисной полости КЭ. Необходимо было провести 2 или 3 слепых пассажа, чтобы вызвать гибель эмбрионов. Вирусы QBV и CELO (оба относятся к серотипу 1) вызывают изменения КЭ в виде карликовости, покраснения, сморщивания кожи, т. е. похожи на те, которые образуются при действии вируса ИБ. Другие серотипы птичьих АВ на КЭ изолируются труднее. Для выделения вируса может быть использована культура клеток почки КЭ, почки цыпленка; ФЭК, культура клеток трахеи - малочувствительны. Многие шт. АВ размножаются на КЭ, не вызывая их гибели, только от серотипа 1 (CELO) и серотипа 5 (Tipton) эмбрионы гибнут.

АВ могут быть изолированы из печени, селезенки, трахеи у коммерческих кур с клиническими признаками болезни. Вирусы серотипа 1 (FAV-1) лучше всего выделяются на SPF- эмбрионах кур при заражении их на ХАО. В положительных случаях на ней образуются диффузные вздутия, очаговые бляшки, эмбрионы отстают в росте, появляются курчавое оперение, кожная эритема и очаговые некрозы печени. Через 5-10 дн после инфицирования эмбрионы, как правило, погибают. В печени и в пораженных участках ХАО отмечаются внутриядерные включения. Остальные серотипы АВ кур лучше выделяются в моиослойной культуре клеток. При этом устраняются трудности, связанные с адаптацией изолятов полевого вируса.

Иногда при наличии АВ инфекция проявляется уже при первом пассаже, через 2-5 дн после заражения культуры появляются типичные участки круглых дегенерированных клеток с внутриядерными включениями.

При использовании эмбрионов или культуры клеток предварительный диагноз основывается на изменениях, вызванных этими вирусами, т. е. поражение эмбрионов и ЦПЭ с тельцами-включениями в культуре клеток, хотя массивные изменения эмбрионов не являются патогномоничными признаками. Клонирование изолята можно проводить, пользуясь методом трех предельных разведений или, предпочтительнее, методом селекции бляшек.

Серодиагностика. Для исследования куриных сывороток на присутствие специфических АТ в PH и РТГ А их предварительно освобождают от специфических ингибиторов каолином, фильтратом холерного вибриона, гепарином, МпС12 или гемадсорбцией.

В серодиагностике АВ инфекции птиц наиболее широко используют две реакции: двойную РДП и PH, а для идентификации выделенного вируса - тесты ИФ, РЗГА, ИФА и РСК. Поскольку РДП обнаруживает групповой АГ, то АТ выявляются к любому из 12 серотипов АВ птиц. Результаты серодиагностики трудно интерпретировать из-за широкого распространения АВ инфекции в хозяйствах и ассоциации АВ с другими вирусами, особенно при интенсивном откорме бройлеров (17,19, 20).

Серологические тесты (РДП) чаще используют в качестве контроля при выращивании птицы на SPF-фермах. Среди неполовозрелых или растущих птиц положительно реагировало в РДП до 10-40 % поголовья, а среди половозрелых - до 80 % и выше. Увеличение пре- ципитинов в связи с возрастом птицы, видимо, обусловлено накоплением других серотипов АВ в период роста или яйцекладки.

Тест иммунодиффузии для исследования полевых сывороток на АВИ птиц проводится по методике Domermuth (23). ВНА к вирусу CELO обнаруживали по уменьшению фокусов. РСК не давала такого ясного результата как РДП в геле и не предлагается для серодиагн- стики.

ИФА более чувствителен, чем РДП, РЗГА и в большинстве по чувствительности сравним лишь с PH. Титры АТ не всегда прямо коррелируют с титром в других серологических реакциях, исключая PH (8).

ELISA является общей группоспецифической реакцией, хотя в некоторых случаях, применяя данный тест, можно получить выраженный типиспецифический ответ. Так, в 1982 г. В. W. Calnek и др. (16), используя 10 серотипов птичьих аденовирусов, показали высокое значение данного теста во взаимоперекрёстных реакциях. С помощью ИФА был обнаружен группоспецифический АГ, общий для всех 12 серотипов АВ птиц. Высокая специфичность и чувствительность позволяет использовать метод ELISA для изучения патогенеза АВ инфекции, лабораторной дифференциальной диагностики гепатитов, а также скрининга коммерческих СПФ-стад, на наличие птичьих АВ (40, 48).

В настоящее время ИФА проводят микрометодом в плашках с круглым дном. Перед использованием конъюгат разводят 1:100 (PBS) с 0,05% твина-20. Субстратом является орто- фенилендиамин (0,1 мг/мл) на свежеприготовленном 0,03%-ном раствора перекиси водорода на дистиллированной воде.

Поскольку AAV является парвовирусом, то при размножении его должен присутствовать “помощник” - АВ птиц CELO. Поэтому во всех поголовьях птиц, где имеется AAV, неизбежно продуцируются АТ к АВ. Чтобы обнаружить АТ к AAV в ELISA, необходимо очистить его, чтобы удалить какие-либо АВ АГ, или, наоборот, разделение 2-х вирусов может быть достигнуто лучше всего при изопикническом центрифугировании в градиенте плотности.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

Переболевшая АВИ птица преобретает иммунитет, строго адекватный серотипу вирусов CELO или GAL. Продолжительность и напряжённость его зависит от возраста птицы, момента вылупления цыплят, сроков их инфицирования, титров материнских (желточных) АТ, патогенности лабораторного штамма или полевого изолята, а также сопутствующих инфекций вирусной и бактериальной природы. В литературе встречаются разобщённые данные авторов, изучавших постинфекционный и поствакцинальный иммунитеты в разных странах и на разной по иммунологическому статусу птице (SPF-птица). Поэтому результаты изучения данного вопроса, практически не поддаются обобщению. Так напряжённость и продолжительность иммунитета при бронхите перепелов адекватна тяжести переболевания; переболевшие перепела сохраняли устойчивость к заражению в течение в 2-х мес. Высокий уровень постинфекционных АТ у них к QBV обеспечивал устойчивость птиц к повторному заражению вирусом в течение 6 мес.

Материнские АТ у цыплят не предотвращают размножение вируса в пищеварительном тракте; у большинства вновь вылупившихся цыплят с материнскими АТ развивается латентная инфекция и, как правило, такие цыплята имеют тенденцию утрачивать их уже в 3-4- нед возрасте, после чего на них может появиться активная инфекция.

Проводить специфическую профилактику АВИ у птицы очень трудно и не потому, что наши знания о патогенности и поведения АВ птиц ограничены, а потому, что даже при одной болезни птицы возможно выделение множества различных серотипов и изолятов АВ. Учитывая это обстоятельство, специфическая вакцинация птиц против АВИ пока ещё находится на стадии научных поисков.

Вакцина для взрослых индеек из шт. Tipton вызывала образование ВНА, устойчивость к инфицированию новорождённых индюшат, содержащих материнские АТ (24). У спешно применяли инактивированную p-пропиолактоновую вакцину с масляным адъювантом против CELO инфекции (33). Помимо ВНА вакцина сообщала цыплятам устойчивость к заражению в 60-80% случаев. В 1979 г. испытывали подобную вакцину на 2-х группах птицы, заражённых впоследствии вирусами CELO и EDS-76, было показано чёткое иммунологическое различие этих вирусов. Успешно применяли трёхвалентную вакцину против аденоинфекции (из шт. Phelps), ньюкаслской болезни и инфекционного бронхита птиц (33,46).

В литературе приведены более обнадёживащие результаты по вакцинации индеек (против гемаррагического энтерита) и фазанов (против болезни мраморной селезёнки). Изучены формирование иммунитета у перепелов и кур на АВ CELO-1. Изучали также динамику посвакцинальных АТ у вирджинских куропаток, поражённых вирусом бронхита перепелов, и устойчивоть их к инфекции в течение 6 мес. после вакцинации. Для профилактики применяли живую вакцину из ослаблённого вируса путём серийных пассажей его на КЭ. С. Н. Domermuth и др. (23) впервые успешно применяли инактивированную вакцину против геморрагического энтерита индеек, приготовленную из суспензии больных птиц. В дальнейшем подобные результаты были получены во Франции и Италии (11).

Успешно испытана живая авирулентная вакцина против болезни мраморной селезёнки фазанов. Для этой цели вирус репродуцировался в лимфобластоидных клетках; поствакци- нальный иммунитет развивался через 3 нед. Инактивированную вакцину готовили из селезёнки индеек, клинически болевших в лёгкой форме геморрагическим энтеритом. В ответ на вакцинацию у привитых фазанов продуцировались ПА. Спустя 7 нед все вакцинированные фазаны не реагировали на экспериментальное инфицирование вирусом болезни мраморной селезёнки. Инактивированная p-пропиолактоновая эмульсинвакцина против той же инфекции сообщала фазанам надёжную устойчивость и образование ПА продолжительностью 180-240 дн в 50 и 35% случаев соответственно (23, 24).

Другие клинические формы проявления аденовирусной инфекции.

Гепатит с тельцами-включениями (инклюзионный гепатит - IBHV). Иногда это заболевание называют инфекционной анемией цыплят. В Японии от поражённых инклюзион- ным гепатитом голубей выделен urr.S-PL-l - типичный АВ птиц серотипа 2. Он высоко вирулентен для 1-дн цыплят, вызывает у них гепатит и панкреатит. Аналогичный АВ был выделен в 1990 г. от белохвостых перепёлок. Он оказался идентичным вирусу бронхита перепёлок и был отнесён к серотипу 1 птичьего аденовируса (27, 29, 53).

Возбудитель инюпозионного гепатита цыплят устойчив к теплу, хлороформу, кислотам; при инокуляции на ХАО КЭ образовывал светонепроницаемые участки, в культуре клеток печени КЭ вирус - внутриядерные включения.

При инфекционной анемии бройлеров у погибших птиц обычно отмечали чёткую анемию, пожелтение слизистых оболочек, диффузные геморрагии, анаплазию костного мозга. При сильном поражении печени отмечали внутриядерные включения. При инфекционной анемии бройлеров выделяли различные типы аденовирусов; отмечали иммунодепрессию, усиливающую тяжесть болезни.

Аденовирусный синовит бройлеров. Помимо респираторных симптомов инюпозион- ного гепатита, доказано участие АВ в поражении ног у цыплят. Недавно установлено, что теносииовиты бройлеров связаны с АВ домашних птиц. Австралийские исследователи изолировали АВ и Staphylococcus aureus при вспышках клинического теносииовита. В стадах вспышки связаны с возрастом, первые клинические признаки появляются в 1-3 нед. У поражённых птиц отмечают опухоли под местом соединения сухожилия с суставом, что мешало их движению. Птицы при передвижении испытывают боль, у них спотыкающаяся походка. Также наблюдаются переломы, в результате которых для птиц становится проблемой доставать пищу и воду. Иногда повреждается одна нога, но отмечается поражение и двух ног. При прогрессирующих признаках наступает хроническая стадия, но смерти может не наступить. Похожие признаки отмечались в Западной Вирджинии в 1978 г. среди 5-нед бройлеров.

Гепатит кур-несушек. Этот синдром вначале наблюдали в стадах США (шт. Индиана) в период пика продуктивности или после него. В результате выделен АВ, обозначенный как “Индиана С”. Этот вирус является аденовирусом серотипа 1, подобным CELO-вирусу.

Аденовирусная инфекция у птиц других видов. Вирус CELO, изолированный от фазанов, явился осложняющим фактором, содействующим появлению респираторной болезни среди этих птиц. Вирус, изолированный от гусят, может осложнять аспергиллёз и сальмонеллёз. Кроме того, его присутствием объясняется снижение процесса вылупляемости гусиных эмбрионов. Изолирован вирус CELO от цесарок с явлениями панкреатита, от индеек с микоплазмом и стафилококкозным артритом.

Аденоинфекция перепёлок и индеек. Бронхит перепелов может возникать в виде вспышки, полностью поражая всё стадо в течение 3-7 дн с момента выявления первого признака болезни. Болезнь характеризовалась высокой контагиозностью, респираторными расстройствами и падежом перепелов, достигающим 80%. Первые симптомы аденоинфекции у перепелов проявлялись в 3-недельном возрасте в виде отказа от корма, далее следовал кашель, чихание и хриплое дыхание без выделений из носа, у 2-3% птиц наступал изгиб шеи к спине между крыльями и между ногами. Болезнь длилась 1-3 нед, позднее у некоторых птиц наблюдались нервные симптомы и чётко выраженные респираторные признаки. Вирджинские перепела обычно поражались в 8-нед возрасте или ранее, и болезнь, проявляющаяся депрессией, скученностью и взъерошенностью оперения у больных птиц, продолжалась в течение 2-х нед. При респираторной форме у некоторых птиц в результате переполнения носовых проходов отмечались отёки кожи вокруг инфраорбитальных синусов. Однако носовых выделений не отмечалось. У птиц более старшего возраста симптомы болезни были выражены слабее, и распространялась она медленнее.

Данный вирус вызывает высокую смертность выращенных на ферме вирджинских куропаток в возрасте 3 нед. При вскрытии их выявлены множественные бледные фокусы диаметром 1-2 мм. Гистологические изменения в них варьировали от острого гепатоцеллюляр- ного некроза без воспалительной реакции до некроза с инфильтрацией мононуклеарными воспалительными клетками и отчасти гетерофилами. В гепатоцитах, прилежащих к поражённым областям, отмечали базофильные внутриядерные включения. Из поражённой пчени был выделен птичий АВ группы 1.

У 4-нед перепелов, заражённых интраназально и внутримышечно аллантоисным вирусом 3-го пассжа, первые симптомы отмечались на 7-й день после заражения и проявлялись кашлем, чиханием, хриплым дыханием, в контрольной группе птиц симптомы были выражены так же хорошо, как и у экспериментально заражённых. 9-нед виржинские перепела более устойчивы к вирусу CELO при конъюктивальной и внутримышечной инокуляции. Чувствительность более молодых перепелов (3-нед и моложе) оказались выше. Они проявляли респираторные и нервные симптомы, а некоторые погибали от инфекции. Респираторные симптомы появлялись как при инокуляции перепелам вируса бронхита и вируса CELO, так и в контактных контрольных группах. Инкубационный период составлял 3-4 дня.

При контакте больных перепелов с курами различного возраста последние не заболевали, хотя вирус от них выделялся. Симптомы, наблюдаемые у больных перепелов, легко воспроизводились при интраназалыюм заражении испытуемым материалом. Некоторые перепела через 7 ди погибали, в трахее имелось небольшое количество желтоватой слизи, а также отмечалось помутнение воздухоносных мешков. В эпизоотологическом отношении для бронхита перепелов характерны внезапные вспышки с быстрым распространением болезни, респираторные симптомы и высокая смертность. При вскрытии в трахее, бронхах и воздухоносных мешках находят обширные изменения в верхнем отделе респираторного тракта и конъюнктиве.

Диагноз на бронхит перепелов основан на выделении вируса на эмбрионах или в культуре клеток трахеи, из воздухоносных мешков, лёгких и водянистой влаги глаза. PH ставят с моноспецифическими сыворотками к вирусу CELO или вирусу бронхита перепелов (QBV) с целью идентификации изолята.

К вирусу бронхита перепелов оказались малочувствительными индейки. При заражении в 3-4-нед возрасте интраназально или в синус у них отмечали только лёгкие респираторные признаки болезни или их отсутствие.

Геморрагический энтерит индеек. АВ индеек - Turkey adenovirus (TAV) впервые зарегистрирован в США в 1973 г., а болезнь “мраморная селезёнка фазанов” впервые описана в Италии. В 1987 г. в Польше зарегистрировано 2 случая аденовирусного энтерита индеек. Вирус был выделен из 12-пёрстной кишки и селезёнки после 5 пассажей на б-нед восприимчивых индюшатах (32)..

Вирусы геморрагического энтерита индюков и болезни “мраморная селезёнка” фазанов устойчивы при 56°С в течение 1 ч. Инфекционность этих вирусов подавлялась 0,0086%-ным раствором гипохлорида натрия, сульфатом натриевого лаурила. Вирусы сохраняли вирулентность в течение 4 нед при 37° С, 6 мес при 4°С и 4 года при 40° С, были устойчивы к хлороформу, эфиру и pH 3 в течение 30 мин. Они ие размножаются в КЭ, эмбрионах индюков, уток, гусей и фазанов (23, 35, 45). Размножали эти вирусы при последовательных пассажах в индюшиных клетках, полученных из лимфобластов типа В, взятых из опухоли, индуцированной вирусом болезни Марека. Уже иа 3-ем пассаже в этой клеточной системе ЦПД проявлялось набуханием поражённых клеток, при микроскопии которых на 5-7-й дн наблюдалось увеличение объёма их ядер. Последние были беспорядочно заполнены вирио- нами.

Возбудитель геморрагического энтерита индеек успешно культивируется в культуре лейкоцитов крови индеек. О первом успешном перенесении этого вируса на цыплят сообщили A. Silim et al. (50). Авторы считают его источником инфекции для индеек, хотя у цыплят болезнь протекает бессимптомно или легко. Для выделения TAV используют содержимое кишечника и селезёнку больной или павшей птицы. Этот вирус не размножается на эмбрионах домашних птиц и в культуре клеток из них. Его обычно выделяют на индюшатах, заражаемых в клоаку, орально или внутривенно. Смерть наступает на 5-б-й дн. У оставшихся в живых птиц наблюдается гипертрофия селезёнки. В настоящее время для выделения данного вируса чаще используют клеточные линии опухолей индюков MDTS-RP19 или суспензионную культуру клеток Lubovits-McCoy с добавлением куриной или фетальной сыворотки крупного рогатого скота при инкубации культуры в термостате с CQ> при 41°С.

Геморрагический энтерит поражает индеек в возрасте 5-12 нед. Падеж достигает 50%. У индеек в возрасте 4-10 нед клинически болезнь проявляется общей депрессией, анорексией и появлением крови в помете. Наблюдается некро-геморрагический энтерит, геморрагия печени, увеличение селезенки с некротическими очагами поражения. При микроскопии препаратов из печени и селезенки наблюдаются внутриядерные включения. По морфологическим и серологическим свойствам АВ индеек сходны с вирусом болезни “мраморной селезенки фазанов”. Изоляты от индеек в Сев. Ирландии были отнесены к двум серотипам: TAV-1 и TAV-2. Однако в США на основании кинетической PH они были разделены на 4 группы.

Болезнь “мраморная селезенка фазанов”. Эго острая болезнь, протекающая с симптомами поражения дыхательных путей и вызывающая большие потери среди фазанов при интенсивном содержании. Для нее характерен внезапный падеж птицы в возрасте 2-8 мес от асфиксии, возникающей в результате острого отека легких. Селезенка при вскрытии увеличена в 2-4 раза. На ее поверхности находят многочисленные некротические очаги, придающие органу мраморный вид. Отмечены также увеличение печени, геморрагический энтерит, геморрагии в нижней части пищевода, измнение цвета и консистенции почек и костного мозга. Гистологически обнаруживают, что гиперплазированная селезенка и некротические очаги состоят из белой пульпы, содержащей амилоид. Скопление амилоида наблюдается также в легких и почках. В ретикулярных клетках обнаруживали внутриядерные включения эозинофильной и базофильной окраски. Электронно-микроскопический анализ выявил наличие вирусных частиц, по морфологии и размерам характерных для АВ. В паренхиме органов отмечалась различной степени дистрофия или некротические изменения.

Обе инфекции можно попеременно переносить от индеек на фазанов с помощью гомо- генатов из соответствующих тканей. Однако гибель наступает только у естественных хозяев. Реконвалесцентная сыворотка, полученная от индеек, выживших после геморрагического энтерита, способна защищать фазанов от инфекции, вызываемой вирусом болезни “мраморная селезенка”.

В РДП вирус образует линии преципитации, идентичные тем, которые образуют вирусы, вызывающие геморрагический энтерит индеек и болезнь “мраморная селезенка фазанов”.

Вирус болезни “мраморная селезенка фазанов” имеет также антигенные варианты. При болезни “мраморная селезенка фазанов” преципитирующих АТ в желточном мешке и в сыворотке новорожденных фазанов до 80-дн возраста не обнаруживали (10). Однако наблюдали повышенную сопротивляемость птенцов фазанов, рожденных от серопозитивных родителей, что также свидетельствует о защитной роли материнских АТ при АВ инфекции птиц.

Аденовирусная инфекция гусей (GAV). АВ гусей был выделен из фекалий 1-2-мес гусят и гусиных эмбрионов. Вирус резистентен к 20%-ным р-ром хлороформа и эфира, 0,1%- ному р-ру дезоксихолата натрия, к 0,25%-ному р-ру трипсина. Патогенность для клеток почки гусей не снижалась ни при pH 3, ни под действием 50°С свыше 3 ч, но бивалентные катионы ослабляли терморезистентность. GAV не агглютинирует эритроциты гусей, домашних кур и морских свинок. Антисыворотки к TAV не нейтрализуют GAV. Более точной серологической типизации пока нет.