ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Распространение инфекции на большие расстояния (по воздуху до 15 км) связано с перевозкой птицы, тушек вынужденно убитой птицы, инфицированной тары, яиц из неблагополучного хозяйства, а также необезвреженной одежды, обуви. В яйцах, собранных от больной птицы, зародыш при инкубации погибает от вируса.

Проведены интересные исследования роли лектинов злаков во взаимодействии вакцинного вируса НБ IHT.V4. Показаны как сродство, так и антагонизм их ГА-активности (48). Имеются данные о передаче вируса через некоторых паразитов, в частности E.tenella, Е, noeca-trix. Такую же роль могут играть кокцидии. Было доказано, что после заражения вирусом цыплят, которые до этого были инвазированы половозрелыми или развивающимися формами Ascaridae galli, вирус внедрялся в паразитов и его можно было выделить. Особую важность имеет наличие вируса в яйцах A.galli, в которых он может длительное время сохраняться и передаваться восприимчивым птицам. В Австралии проведена оценка патогенности 45 изолятов вируса НБ, циркулирующих в настоящее время. Все патогенные изоляты передавались путем контакта (47). Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях вирус выделяли от домашних разных видов (индейки, цесарки, утки), синантропных (голуби, воробьи, галки) и диких птиц. В 1979 г. от попугаев (Ка1акое Би1ригеа) выделен велогенный штамм (0№-1) вируса НБ. В 1-5% случаев вирус выделяли из клоаки водоплавающих птиц. В 1982 г. от японского ястреба-перепелятника (Асарйет Х^щаШБ ?о1апз) выделен вариант вируса НБ, отличающийся температурочувствительностью в РГА; он вызывал ГА только при 4°С, а не при 25 или 37°С.

В литературе приведены случаи заражения людей вирусом НБ, которые, главным образом, могут быть при нарушении гигиены на предприятиях и индивидуальной гигиены персонала. У больных лиц развивался конъюнктивит.

Имеются сведения об эпизоотологических особенностях и клинической картине НБ среди голубей в некоторых районах Судана в 1982 г. Клинически эта болезнь характеризовалась внезапным угнетением, потерей аппетита, нервными явлениями, неспособностью летать. В ряде хозяйств летальность среди голубей достигала 100%. Выделенный вирус не отличался от прототипных штаммов вируса НБ. В течение 1984 г. в Австрии резко возросла инфицированность голубей вирусом НБ. В 1990-1991 гг. при серологическом определении АТ против вируса НБ у водоплавающих (уток и гусей) с помощью РТГ А и ИФА показано, что АТ в РТГА выявлены у 3,1% мускусных и 10% пекинских уток, по ИФА - у 20,3 и 24,8% соответственно (26а).

В 1970-1972 гг. в Голландии погибло большое количество норок от менингоэнцефалита. Причиной смертности был вирус НБ. Выделенный на КЭ, он обладал низкой патогенностью для норок при интрацеребральном введении. Оказывается, животные заражались при поедании потрохов инфицированной птицы, среди которой в это время наблюдалась НБ.

Описан случай острого респираторного заболевания у 3-мес дрофы вихляя в Таифе (Саудовская Аравия). Из легких, селезенки и трахеи пораженной птицы был впервые выделен вирус НБ и вирус оспы птиц. Диагностирована также тяжелая вторичная бактериальная инфекция, описаны клиническая и патологоанатомическая картины (54).

ДИАГНОСТИКА

При характерном течении болезни постановка диагноза не представляет сложности. При вспышке болезни на фоне пассивного или поствакцинального иммунитета, а тем более в стационарно неблагополучном хозяйстве поставить диагноз бывает чрезвычайно трудно.

Выделение вируса

Вирус, в зависимости от его тропизма можно выделить из головного и костного мозга, трахеи, кишечника, селезенки, легких, печени. Для исследования рекомендуется брать голову, легкие, трахею и селезенку от только что павших или вынужденно убитых птиц. Вирус удается выделить только в период вспышки болезни. Через 15 дн выделить его обычными методами, как правило, не удается. Поэтому патологический материал необходимо брать в начале вспышки (в первые 3-5 дн) и направлять в лабораторию в термосе со льдом. Внутренние органы можно помещать в стерильный 50%-ный р-р глицерина на дистиллированной воде. Смывы из трахеи и клоаки лучше консервировать на холоде или при температуре не выше 4°С. Мазки-отпечатки исследуют методом ФА, срезы - с помощью ЭМ или ИЭМ, а

суспензию - в РГА. Эго позволит выявить специфический АГ (вирус) и ГА-агент в течение 3-

5 ч, определить направленность дальнейших исследований.

Заражение КЭ. Эмбрионы 9-11-дн возраста заражают по 0,2 мл, не менее 10 КЭ на каждый материал, в аллантоисную полость общепринятым методом и инкубируют 72 ч при 37,5°С (погибших в первые 24 ч эмбрионов не учитывают). Если через 72 ч нет погибших КЭ, то 5 из партии зараженных убивают, оставляя их при 4°С на ночь. Остальные 5 КЭ инкубируют до 120 ч и затем убивают. Аллантоисную жидкость от погибших и живых КЭ проверяют на ГА в РГА с куриными эритроцитами (1-5%-ная взвесь). Обычно велогенные штаммы вируса вызывают гибель КЭ уже через 32-60 ч после заражения, мезогенные - через 60-90, а лентогенные - через 100 ч и более. Иногда при первом пассаже не удается выделить вирус, поэтому необходимо провести не менее 3-х “слепых” пассажей. Учитывая, что в вакцинируемых стадах можно выделить и вакцинный вирус (шт. Н, La Sota , Бор 74/ВГНКИ и др.), вторьм этапом исследования должно быть определение патогенности выделенного изолята. Первьм ориентиром могут служить данные РГА. Обычно полевые изоляты обладают низкой ГА-активностью, проявляя ее в разведениях 1:16- 1:128, тогда как вакцинные штаммы, наоборот, проявляют высокий ГА-титр - 1:256 - 1:2048.

Ненадежным оказался метод выделения вируса от зараженных иммунных кур: чем выше иммунитет у несушек, тем меньше вероятности выделения вируса из их эмбрионов. При исследовании большого количества полевых образцов на выделение вируса НБ можно использовать фрагменты ХАО, связанные с яичной скорлупой. Для этого фрагменты ХАО размером 0,6-1,0 см2 культивируют в среде Игла. Эффективность выделения вируса 97%. При внесении вируса в среду культивирования или непосредственно на ХАО КЭ получены совпадающие результаты (55).

Заражение культуры клеток. Выделение вируса в культуре клеток осуществляется редко, так как культуральный вирус по Г А-активности значительно уступает эмбриональному. Однако в тех случаях, когда в лаборатории можно получить культуру фибробластов КЭ и специалисты владеют этим методом, его можно применять для выделения и идентификации вируса. Приготовление вирусной суспензии, выращивание и заражение культуры клеток куриных фибробластов производят общепринятым методом. Можно использовать перевиваемые линии ВНК-21 и Нер-2.

В зараженной культуре фибробластов КЭ вирус НБ через 48-60 ч вызывает ЦПИ, специфичность которых подтверждается реакцией гемадсорбцин с эритроцитами кур. С вируссодержащей культуральной жидкостью может быть поставлена РГ А в отношении эритроцитов крови кур. Обычно при первичном выделении ГА-титр культурального вируса не превышает 1:32 - 1:128. Отсутствие или низкие титры ГА вируса в первом пассаже на культуре ткани не дают основания исключить НБ.

Заражение птиц. Если КЭ под руками нет, вирус можно выделить на неиммунной к НБ птице. Для этого испытуемый материал 1:10 (0,5 мл) внутримышечно инокулируют цыплятам в возрасте 2-4 мес. За инфицированной птицей наблюдают 10-12 дн. При появлении характерных для болезни симптомов птиц в агональном состоянии убивают и берут пробы головного мозга и селезенки, которые можно использовать для заражения КЭ и иммунологической пробы (для одновременного заражения птиц иммунной и неиммунной групп).

Титрование вируса. Обычно проводят на КЭ, культурах клеток по общепринятой методике и на 6-10 нед цыплятах. Доза инокуляции вируса для цыплят 0,5 мл (внутримышечно или внутривенно). Срок наблюдения 15 дн.

Индикация вируса

Экспресс-методы выявления антигена вируса НБ. Через 24 ч в инфицированных культурах клеток (шт. Н) наблюдают появление многоядерных симпластов и цитоплазматических эозинофильных включений неправильной глыбчатой формы. Через 48 ч после заражения цитоплазма бывает нафарширована тельцами-включениями. В ядрах изменений не отмечалось. Разработан высокочувствительный авидин-биотиновый ИФА. В данном тесте применяют монАТ к вирусу НБ, очищенные и меченые биотином. Тест характеризуется простотой выполнения и короткими сроками (3-4 ч) получения результатов (41). Непрямой точечный вариант ИФА является быстрым, легким, специфическим методом обнаружения вируса в смывах с различных органов (42).

Для идентификации РНК вируса НБ пользуются экспресс-методом ПЦР, амплифици- рующей участок длиной 238 п.н. в гене белка слияния F с использованием в качестве праймеров нуклеотидов, фланкирующих последовательность (27).

В организме птицы, зараженной вирусом НБ, в процессе продолжительного контакта с вирусом эритроциты теряют способность Г А (становятся инаглютинабельными). Чтобы косвенно доказать присутствие вируса в организме, от исследуемой птицы берут 0,04 мл крови в формалинизированую (0,1%-ную) вируссодержащую аллантоисную жидкость, вирус должен обладать высокой агглютинирующей активностью. Если на стекле наступает гемагглю- тинация, это свидетельствует об отсутствии в исследуемой капле крови вируса НБ. Учет реакции ведут через несколько секунд. Метод применим для выявления патогенного вируса в вакцинированном стаде, так как вакцинные штаммы лентогенной группы инагглютинабель- ности эритроцитов не вызывают (19).

РГА. Используют с целью ориентировочного определения присутствия вируса в исследуемом материале и для его титрования. ГА вируса входят в состав вирусной частицы (вириона) и могут содержаться в инфицированных аллантоисной и амниотической жидкостях, оболочках и органах КЭ, легких, печени, почках и селезенке погибшей птицы, в жидкой и клеточной фракциях тканевых культур. Можно брать эритроциты крови кур, морской свинки, лошади, человека и др. Разные виды вирусов и даже шт. одного и того же вируса могут отличаться друг от друга способностью агглютинировать эритроциты указанных животных. Спектр Г А служит характеристикой биологической активности вируса и штаммов. Например, большинство шт. вируса НБ не вызывает Г А эритроцитов лошади, чем отличается от вируса классической чумы птиц, который способен ГА их в высоких разведениях.

Предложена экспресс-диагностика атипичных форм НБ кровекапельной реакцией гемагглютинации (ККРА). Простота постановки её, совмещение исследований на НБ и пулло- роз-тиф позволяют включить ее в технологический процесс ветобработки птицы (7).

Серологическая идентификация

Вирусы НБ можно идентифицировать в РТГ А, PH, РСК, РИФ и др.

РТГА. Основной, высокоспецифичный и простой в выполнении метод идентификации вируса НБ. Для постановки необходимо иметь эталонные специфические сыворотки к вирусу и выделенный на КЭ вирус (аллантоисная жидкость). РТГА ставят общепринятым методом в макро- и микровариантах. Идентификацию вируса считают завершенной, если эталонная специфическая сыворотка тормозит ГА-активность вируса в пределах целого илн 1/2-1/8 титра с гомологичным эталонным АГ.

Для быстрой идентификации выделенного вируса рекомендуют следующий метод: на предметное стекло наносят капли аллантоисной жидкости и 1%-ную суспензию куриных эритроцитов. Затем ставят пробу на нейтрализацию ГА-активности. Для этого на предметное стекло наносят каплю той же аллантоисной жидкости, каплю эталонной специфической сыворотки и хорошенько перемешивают. Если агглютинации эритроцитов нет, значит выделенный вирус является вирусом НБ.

Приготовление гипериммунных сывороток. 5-8-мес кур с титрами анти-ГА поствакци- нального иммунитета против НБ 1:4-1:64 гипериммунизируют вирус-вакцинами из шг. В1, La Sota, Н. Первое введение делают с адъювантом (автоклавированная смесь ланолина с ва зелином в соотношении 1:1,5). На 1 мл смеси добавляют 5 мл вакцинного вируса. Смесь растирают в ступке и помещают в водяную баню на 30 мин при температуре 56°С. 1

-й раз вакцину вводят с адъювантом в объеме 1 мл внутримышечно, 2-й раз - через 3 дня без адъюванта, 3-й раз еще через 3 дня без адъюванта. Через 10 дн проверяют активность гипериммунных сывороток. Титр их обычно составляет 1:6144-1:12288.

PH на КЭ. Используют для идентификации вируса редко, так как она трудоемка и длительна. Реакцию используют в спорных ситуациях. PH ставят общепринятым методом обычно в варианте разведения вируса и постоянной дозы сыворотки. Реакцию считают положительной при индексе нейтрализации >21g.

РСК. В диагностической практике при НБ используют редко. Предложена РСК как быстрый и дешевый метод дифференциации штаммов вируса НБ по вирулентности.

РИФ. Метод основан на применении родаминсульфохлорида для конъюгации иммунной сыворотки к вирусу с целью идентификации вирусного АГ в пораженных клетках павших и убитых птиц. Применение этого красителя наиболее приемлемо и удобно благодаря яркому оранжево-красному свечению АГ. ФИТЦ-конъюгаты (флюоресцеинизотиоцианат) менее пригодны. Для обнаружения специфического АГ применяют гомологичные РСХ- конъюгаты общепринятым методом. В большинстве случаев АГ выявляется в ядрах клеток белой крови (лимфоцитах, моноцитах, псевдоэозинофилах и эозинофилах) или пораженных клеток указанных органов в виде яркой флюоресценции оранжево-красного цвета. В контрольных препаратах, обработанных теми же гомологичными конъюгатами, подобного свечения не наблюдается, лишь в некоторых случаях выявляется точечное желто-оранжевое свечение в цитоплазме юных эозинофилов.

Установлено, что вирусный АГ в зараженных культурах клеток (ФЭК и ВНК-21) выявляется, начиная с 4 ч (для велогенных штаммов) и с 6 ч (для лентогенных штаммов), до 10- 12 ч свечение АГ отмечали только в цитоплазме, а через 20 ч - в цитоплазме и ядрах клеток.

РНГА. Во ВНИВИП разработана методика получения высушенных стандартных высокочувствительных и специфических эритроцитарных тест-препаратов с АТ к вирусу НБ для экспресс-диагностики. Указанный эритроцитарный диагностикум позволяет выявить вирус в экскретах органов и тканей (10,11).

ИФА. Методом ИФА вирусный АГ выявляют в ранние сроки после заражения до появления ЦПД. Через 12 ч после заражения видны единичные АГ-содержащие клетки.

Идентификация при помощи монАТ. Исследованы различные штаммы вируса и изоляты НБ на гомологичное родство к монАТ. В результате тестирования 40 изолятов и штаммов с использованием набора из 9 монАТ выявлено 8 групп. Вирусы каждой группы обладали не только общими АГ-свойствами, но и одинаковьми эпизоотическими чертами. МонАТ к ГА и гликопротеину F рекомендовано использовать для определения патогенности и биологической характеристики штаммов, циркулирующих в стадах вакцинированных и невакцинированных птиц. Они могут быть использованы для идентификации полевых изолятов, АГ-родственных шт. La Sota и Bl, быстрой дифференциации этих вакцинных штаммов от вирулентных полевых изолятов.

Метод картирования олигонуклеотидов. Этим методом исследован биохимический состав нескольких штаммов вируса НБ, выделенных в штатах Калифорния, Техас и Флорида, это позволило легко дифференцировать штаммы друг от друга. Часть штаммов оказались идентичными. Считают, что метод олигонуклеотидного картирования может быть эффективно использован с целью оценки эпизоотической ситуации на любой территории.

Определение вирулентности выделенного вируса. Помимо серологической идентификации часто возникает необходимость определения вирулентности выделенного изолята. Это особенно важно в том случае, когда возникает подозрение, что выделенный возбудитель является штаммом, применяемым для массовой вакцинации. Степень вирулентности можно определить следующими методами.

Метод Хенсона - определение индекса внутримозговой вирулентности. Исследуемым материалом в разведении 1:10 заражают интрацеребрально в дозе по 0,05 мл 10 1-дн цыплят, полученных от невакцинированных против НБ кур. Время наблюдения 8 дн. Все погибшие цыплята считаются специфическими; их сумму умножают на коэффициент 2. Все цыплята, проявившие клинические признаки, тоже считаются специфическими; их сумму умножают на коэффициент 1. Индекс интрацеребральной патогенности вычисляют путем деления суммы балов на 80 (число наблюдений за 10 цыплятами в течение 8 дн). Для лентогенных штаммов индекс до 0,2, для велогенных штаммов - больше 1,5. Недостатком данной методики является - постоянный период наблюдения - 8 дн.

Метод определения среднего времени гибели 10-дн эмбрионов, вызванный минимальный летальной дозой (СВГ/МЛД). Для этого готовят серию 10-кратных разведений исследуемого вируса от 10'1 до 10‘10, пять из них (10'1, 10'7, 10'8, 10"9, Ю'10 используют для заражения 10-дн КЭ в аллантоисную полость в объёме по 0,1 мл. Каждым из этих разведений инокулируют по 10 КЭ: по 5 заражают в 8 ч утра и5-в 16ч (в общем заражают 50 эмбрионов) и инкубируют их при 37°С. Наблюдают за ними 2 раза в день через 8 ч в течение 120 ч. Час гибели калодого погибшего эмбриона регистрируют. Минимальной летальной дозой Считают самое большое разведение вируса, вызывающее гибель всех инокулированных эмбрионов. Среднее время гибели находят путем деления суммы часов гибели всех эмбрионов, вызванной минимальной летальной дозой, на число эмбрионов: среднее время гибели до 60 ч - велогенные штаммы; среднее время гибели от 61 до 90 ч - мезогенные штаммы; среднее время гибели от 90 и больше 100 ч - лентогенные штаммы.

Однако методы эти дорогостоящие и требуют много времени - необходимо затратить по меньшей мере 7 дн для того, чтобы дифференцировать дикие штаммы от вакцинных.

РСК. Быстрый и дешевый способ дифференциации штаммов. Диагноз ставят в течение 3

дн после получения проб. Самое слабое связывание комплемента вызывают велогенные дикие штаммы, самое сильное -лентогенные (например La Sota), в границах между сильными и слабыми - мезогенные. Кроме того, вирулентные штаммы менее антигенны, чем вак- -

цинные, в отношении индукции синтеза КСА у морских свинок. Самую отчетливую дифференциацию дает сыворотка морских свинок, иммунизированных штаммом Хитчнера (В1).

Биопроба. Начиная с 1972 г. в США, а затем и в других странах были выделены штаммы с очень высокой вирулентностью. Их называют штаммами WND (висцеро- тропные штаммы НБ). Для идентификации проводится биопроба на восприимчивых цыплятах в возрасте не менее 6 нед. Цыплят заражают в клоаку. Несколько особей заражают в глаз, внося туда каплю вируса. За птицами наблюдают 10 дн. Если в течение этого периода ни один цыпленок не погибает, считают, что штамм не относится к WND. Если же птицы заболеют и погибнут в течение 10 дн, производят вскрытие. В США принята следующая оценка интенсивности изменений (в баллах): точные кровоизлияния или некротические изменения в трахее - 25; точечные кровоизлияния или некротические изменения в трахее и ^сопутствующая им отечность трахеи и в области входа в грудную клетку - 100; точечные кровоизлияния или некротические изменения в зобе - 100; некроз и изъязвление желез спелой кишки и пейеровых бляшек - 100; точечные кровоизлияния или некротические измененная слизистой оболочки клоаки - 10; воспаление брюшины в области яичника - 10; точечные кровоизлияния в других местах - 10. Диагностика WND считается обоснованной, если об- .1цее число баллов достигает 150 или более.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика

Критерием, позволяющим судить о персистенции вирулентного вируса в стаде, являются тигры АТ в сыворотке крови птиц. Исследования проводят только с парными сыворотками, полученными от одних и тех же птиц (или на одной и той же группе птиц). Первую пробу берут перед вакцинацией (или в начале болезни), вторую - на 15-20-й день, последующие -

в любое время (обычно 1 раз в месяц).

РТГА. Реакцию ставят с 4 ГАЕ в макро- и микровариантах по общепринятой методике. Результаты считают положительными, если разница в титрах 1-й и 2-й сывороток составляет не менее 3-х разведений. Повышение числа положительно реагирующих в РТГА между двумя исследованиями свидетельствует о распространении инфекции в стаде. Постинфекци- онные АТ обычно бывают в титре 10 lg и более и устанавливаются в течение продолжительного времени, что указывает на проходящую или прошедшую инфекцию. Обнаружение в стаде птицы анти-ГА в разведении сыворотки крови 1:1024 - 1:2048 через 12-25 дн после применения живых вирусвакцин не является сигналом о неблагополучии его в отношении НБ, наоборот, это свидетельствует о высокой реакции птицы на вакцину. Но если через 4-5 мес после вакцинации в стаде будут обнаружены титры АТ 1:2048 или неровные тигры, т.е., когда у части проб крови (10-15%) их нет или они не превышают 1:2 - 1:4, а в другой части (14-20%) составляют 1:1024 - 1:2048 и выше, то стадо надо считать имевшим контакт с вирулентным вирусом.

Для определения активности эпизоотического процесса птиц через 2 нед обследуют повторно. Обнаружение высоких титров АТ (1:4096 и выше) свидетельствует об обострении эпизоотической ситуации. Для серологического контроля нз каждого птичника берут по 25 проб крови. Кратность исследований определяется эпизоотической ситуацией.

АТ обнаруживаются не только в сыворотке крови. Большое количество их содержится, например, в желтке яиц иммунизированных птиц. Этим путем происходит передача пассивной резистентности потомству. Обнаружение АТ в желтке яиц, полученных от вакцинированных кур, по мнению ряда авторов, более достоверно для определения состояния резистентности поголовья птиц. Готовят экстракт из желтка (38): в пробирку наливают 1,5 мл яичного желтка и 6 мл физиологического р-ра и тщательно перемешивают; добавляют 2 мл дихлорэтилена н 1 мл эфира. Содержимое тщательно смешивают встряхиванием. Оставляют смесь при 37°С до следующего дня, после чего центрифугируют в течение 10 мин при 1,000 мин'1. Фракция дихлорэтилена находится внизу на дне пробирки, над ней расположена полоса жира. Слегка мутную надосадочную жидкость (она соответствует разведению 1:5 желтка яиц) отсасывают пипеткой и используют в РТГА. Более простой метод заключается в следующем: желток отделяют от белка и 1 мл его разводят 2 мл фосфатного буфера с pH 7,2. Полученную смесь гомогенизируют, затем центрифугируют 15 мин при 1,000 мин"1. Для РТГ А берут надосадочную жидкость между самым верхним слоем и осевшими частицами желтка. Титры АТ в желтке соответствуют содержанию их в сыворотке крови кур. Считают, что для определения иммунного статуса стада кур к НБ значительно проще исследовать АТ в яичных желтках, чем в сыворотке крови. Такой подход экономичен, исключает стрессы и опасность распространения болезни при взятии крови (10,11).

Исследуя желток, можно определить время первичной иммунизации цыплят, выведенных из анализируемой партии яиц. Титр пассивных АТ в постнатальный период за 4,5 дня снижается на 1 log2.TaK, при исходном титре АТ 7 log к 18 дню он уменьшается до 3 log 2, и до 5 log2 - к 9 дню. Надежный иммунный ответ будет получен у 80-100% птиц при вакцинации цыплят в указанном возрасте per os, интраназально или аэрозольно. Результаты исследования желтка и парных сывороток кур позволяют судить об уровне сероконверсии и по нему определять напряженность поствакцинального иммунитета. Четырехкратное и более увеличение анти-ГА свидетельствует о циркуляции эпизоотического вируса. Аналогичное заключение делают по возрастанию индекса нейтрализации в 50-100 раз по сравнению с первоначальными данными (6). Ставить диагноз по сероконверсии при внедрении полевого вируса в стадо иммунной птицы трудно без выделения вируса и определения его вирулентности на цыплятах. Можно только предполагать, что птица имела контакт с полевьм штаммом.

РРГ. Эта реакция (РРГ) получила широкое применение и высокую оценку при многих парам иксов ирусн ых инфекциях. В опытах с вирусом НБ показаны линейная зависимость диаметра зоны гемолиза от концентрации АТ и полная корреляция результатов РРГ и РТГ А. Так, при титрах в РТГ А 1:16-1:32 диаметр зоны гемолиза составлял 6-7 мм, а при 1:64 и 1:1024 - 7,5±0,3 и 9,5±0,5 мм соответственно. При повторных исследованиях одних и тех же сывороток расхождение показателей не превышало 0,5 мм.

ELISA. Многочисленные данные зарубежных исследователей свидетельствуют о высокой чувствительности, специфичности этого метода и корреляции между титрами АТ в РТГ А и ELISA. В Марокко разработан набор для скрининга сыворотки птиц на присутствие АТ к НБ. Титры в ELISA выше, чем в РТГ А и показывают высокую степень корреляции (17).

При исследовании сывороток крови от вакцинированных птиц титр АТ в ELISA был в 2-4 выше, чем в РТГА. АТ к вирусу в ELISA и РТГА выявляются в 98, и 91,7% соответственно, коэффициент корреляции равен 0,85 (21). Однако ELISA отличается большей чувствительностью (9). На основании реактивности с монАТ штаммы вируса НБ разбиты на 5 групп. Для постановки реакций ELIS А и РЗГ А при обнаружении АТ к вирусу НБ целесообразно использовать хлороформный экстракт.

Дифференциальная диагностика. НБ следует дифференцировать от ИБП, гриппа, ПМВ-2, ИЛТ и микоплазмоза птиц. Для лабораторной диагностики гриппа птиц, ИБ и НБ используют диагностикумы биофабричного производства. Дифференциация вирусов гриппа, насчитывающих 14 подтипов, и парамиксовирусов, включающих 9 серотипов, возможна только в лаборатории. Особое внимание следует сосредоточить на эпизоотологическом мониторинге при этих болезнях, исследовании парных сывороток и периодическом лабораторном анализе патматериала (5).