ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Спектр патогенности в естественных условиях. В естественных условиях к возбудителю БН наиболее восприимчивы овцы (особенно ягнята) и значительно слабее - козы. КРС, буйволы, лошади, ослы, мулы, свиньи, а так же лабораторные животные (кролики, морские свинки, крысы, мыши) не чувствительны. Однако вирус может быть адаптирован к взрослым белым мышам, вызывая у них энцефалит при интрацеребральном введении. Мышат- сосунов можно инфицировать интрацеребрально или интраперитонеально.

ДИАГНОСТИКА

Диагноз ставят на основании эпизоотологических (сезонность, болеют только овцы и козы с высокой летальностью), клинических признаков (лихорадка, слизистые истечения из носа, диарея, трахеит), патологоанатомических изменений (отек легких, холецистит, геморрагический гастроэнтероколит с полосчатыми кровоизлияниями по верхушкам складок слизистой оболочки, нефрозонефрит) и лабораторных исследований (выделение и идентификация вируса, обнаружение АТ), учитывая географию распространения болезни.

Выделение вируса

Взятие и подготовка материалов.

Для выделения вируса из крови используют гепаринизированную или дефибринирован- ную кровь, а также сыворотку, плазму или растертый в солевом р-ре сгусток, которые обрабатывают по обычной методике с соблюдением стерильности и после соответствующего бактериологического контроля используют для биопробы. Кусочки паренхиматозных органов отмывают от глицерина, готовят 10%-ную суспензию на фосфатном буферном р-ре с антибиотиками, центрифугируют и полученную жидкость используют для биопробы. Собранных клещей сортируют по видам и объединяют по 10-50 особей, растирают в ступке и готовят взвесь на физиологическом или фосфатном буферном р-ре. Если материалы не исследуют сразу, их замораживают и хранят при -70°С.

Хранение и консервирование материала. Вирус хорошо сохраняется в лиофилизиро- ванном или замороженном состояниях, а также в глицерине. Инфицированная кровь или сыворотка в холодильнике при 4°С остаются активными длительное время. В 50%-ном глицерине вирус остается активным 93 дня. В запаянных ампулах лиофильно высушенный вирус сохраняет жизнеспособность 143 дня. В клещах теряет инфекционность при кормлении на иммунных животных.

Выделение вируса на культуре клеток. Вирус выделяют на культурах клеток (почка ягненка и козленка). ЦПЭ проявляется образованием плеоморфных цитоплазматических телец-включений, окружающих ядро.

Выделение вируса на животных. Используют 3-4-дн мышат (внутримозговое или внутрибрюшинное заражение). Вирус через 72 ч после заражения вызывает характерные некротические изменения тканей головного мозга, геморрагии, инфильтрацию лимфоцитов.

При выделение вируса на естественно восприимчивых животных наличие вируса в патологическом материале определяют при помощи биопробы на ягнятах, которые не имели соприкосновения с инфицированными клещами - переносчиками возбудителя БН. Ягнятам вводят внутривенно, внутрибрюшинно или подкожно вируссодержащую кровь или сыворотку от больных животных в объеме 0,001-1 мл. При наличии возбудителя в первые 48 ч после инокуляции у зараженных животных резко повышается температура тела (до 41,1- 41,6°С). При внутривенном или внутрибрюшинном заражении температура повышается раньше, чем при подкожной инокуляции. Симптомы болезни проявляются только после снижения температуры. Они характеризуются слизисто-гнойными истечениями из носа, часто с примесью крови, водянистой диареей с частой самопроизвольной дефекацией и выделением темно-зеленых фекалий. Зараженные животные погибают через 2 дня снижения температуры (между 4-8 дн после заражения). При вскрытии обнаруживают изменения, наблюдаемые при естественном течении болезни. Для выделения вируса от зараженных ягнят берут кровь в период первоначального подъема температуры, а также паренхиматозные органы и лимфоузлы от убитых животных.

Индикация и идентификация вируса. Вирусоскопия, электронная и иммуноэлектрон- ная микроскопия не применяются.

Обнаружение специфических телец-включений. Наиболее характерный признак для данного вируса - способность его формировать своеобразной морфологии цитоплазматические эозинофильные тельца-включения. Последние имеют разнообразную форму - от кольцевидных образований, окружающих ядро со всех сторон, до огромных глыбчатых причудливой формы и структуры тел.

Серологическая идентификация. Выделенный вирус идентифицируют в РСК, РДП, PH, ИФ, РНГА и др. Быстрый (через 24-48 ч) ответ получают при заражении клеток ВНК21 с последующей идентификацией в непрямой ИФ. Однако более чувствителен метод заражения мышей и использования мышиного мозга в прямой ИФ или РСК. Немецкие исследователи использовали для количественного и качественного выявления вирусного АГ иммуно- пероксидазный метод. Конъюгаты готовят из сыворотки овец, полученной через 33 дня после заражения вирусом БН, и кроличьего антиовечьего ]& С помощью прямого и непрямого иммунопероксидазных тестов АГ вируса БН обнаруживают в культурах клеток ВНК и клеток почки овцы через 24 ч после заражения. Лучшие результаты получены через 36-48 ч. Гранулярно окрашенные скопления АГ в виде колец и полусфер обнаруживают в цитоплазме клеток, вокруг неокрашенного ядра. В зараженной перевиваемой линии клеток клещей Я.аррепШсиЫиз обнаружено 2 типа клеток, содержащих специфически окрашенный АГ: округлые и веретенообразные со множеством темно окрашенных гранул в цитоплазме.

Из испытанных культур предпочтительнее использовать культуру клеток ВНК. Клетки почки овцы быстрее дегенерируют, и возникают трудности в дифференциации специфического и неспецифического окрашивания. Эффективность метода зависит от качества культур и плотности монослоя: неудовлетворительные результаты могут быть получены при большой или недостаточной концентрации засева клеток.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. РСК используют для определения АТ в сыворотке крови животных-реконвалесцеитов через 10-20 дн в течение 6-9 мес, а также в сыворотке вакцинированных животных на протяжении 2-6 мес. ПА проявляются рано - через 1-2 дня после окончания виремии и сохраняются у овец более года, а у коз - до 1,5 лет. ВНА выявляют в PH в течение 15 мес. после заражения.

Результаты сравнительной оценки нескольких методов д ля обнаружения АТ показали, что у экспериментально инфицированных овец АТ в РНГА отмечали на 7-й день после заражения, в ИФ - на 12-й день.

Дифференциальная диагностика. БН следует отличать от лихорадки долины Рифт, катаральной лихорадки овец и гидроперикардита жвачных. Для лихорадки долины Рифт характерны некротические очажки в печени. При гистологическом исследовании в печеночных клетках выявляют внутриядерные ацидофильные тельца-включения. При катаральной лихорадке овец наиболее выраженными патологоанатомическими признаками являются опухание и изъязвление языка, губ, морды, а также дегенеративно-некротические изменения скелетных мышц и сердца. Гидроперикардитом болеют жвачные и всеядные животные. Болезнь характеризуется развитием серозно-фибриозного перикардита.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

Переболевшие животные приобретают иммунитет до 3,5 и более лет. Гипериммунная сыворотка крови овец обладает гемолитическими свойствами и для лечебных целей непригодна. Живые вакцины применяют в странах Африки на основе шт. Энтеббе, аттенуированного путем длительного пассирования через мозг мышей (140-150 пассажей).

Сравнительная оценка поствакцинального иммунитета не изучена.