ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

Для специфической профилактики применяют инактивированные и живые вакцины. Количество первых последнее время значительно сокращалось. Однако односторонняя ориентация на живые вакцины разной степени аттенуации и в ряде случаев нежелательные последствия их применения вынудили исследователей и практических специалистов вновь вернуться к инактивированным препаратам, правда, более современным.

Применение живых вакцин. Ассортимент живых вакцин, применяемых в настоящее время весьма широк: Н, В, F, FR, Комаров, Roakin, JIa Сота, Банковский, Муктесвар, Мин- несот, Бургас, Нью-Джерси, Нью-Йорк, Накарелла, К, ГАМ, V4 и др. (10а). Среди вакцинных лентогенных штаммов вируса НБ известны - В, NDP, LZ58 и Clone 30, Ulster 2С. По эффективности вакцина из шт. Ulster 2С занимает промежуточное положение между Clone 30,

NZ58 и NDP (24).

В 1989 г. в Австралии выделен шт. N4, характеризующийся полной авирулентностью для птицы и активным распространением его среди птиц (высокой контагиозностью). Вирус вызывает иммунитет при введении интраокулярно, внутримышечно и аэрозольно. Он перси- стирует в организме привитой птицы до 2 лет. У подсаженной не привитой птицы к вакцинированной в течение 80 дн обнаруживались АТ. Несмотря на низкие титры (ниже 3 log2) привитая птица обладала устойчивостью к заражению вирулентным вирусом, что свидетельствует о развитии местного секреторного или клеточно-опосредованного иммунитета без высоких титров гуморальных АТ (36).

Пероральная вакцинация IIIT.V4 (Австрия) стимулирует лимфоидные ткани кишечного тракта, что индуцирует секреторные иммуноглобулины и обеспечивает защиту даже при низком уровне циркуляторных гуморальных АТ. Шт.

Пылевидная вакцина из шт. La-Sota разработана во ВНИИВВиМ. В основе технологии изготовления использован метод сушки смеси вируссодержащего материала с наполнителем. Вакцина обеспечивает высокий иммунологический эффект и практически не обладает реактогенностью в широком диапазоне доз, имеет выраженную иммуногенность для цыплят 14-16 нед возраста в благополучном и стационарно неблагополучном стаде птиц (4, 6).

В ВГНКИ ветпрепаратов проведены исследования по совершенствованию методов контроля иммуногенности вакцин против НБ. Установленный минимальный защитный титр анти-ГА 3 log2 и более давал вполне объективную информацию о иммуногенности вакцины. Для исключения погрешностей в методику была включена референс-вакцина НЕ, позволяющая правильно интерпретировать получаемые результаты и более дифференцировано подходить к оценке этого показателя у серийно производимого препарата. Референс-серии готовят во ВГНКИ, контролируют на соответствие заложенным в ТУ параметрам и поставляют на биопредприятия. Новая методика предусматривает 10-кратный запас иммуногенности и обязательное соответствие параметрам референс-серий не менее чем на 80%. Экспериментально определены иммунизирующие дозы (ИМД), обеспечивающие абсолютную защиту птицы от 1000 ЛД50 вирулентного вируса (ИМД90), равные для шт. La Sota / 6,7 lg ЭИД50, для шт. Бор/74 ВГНКИ - 6 lg ЭИД30 при интраназальном применении и 7,7 и 7,0 lg ЭИД50 соответственно при энтеральном применении. Они оказались значительно выше, чем в случаях применения серий вакцин с минимально допустимой по ТУ активностью (8,0 lg ЭИДзо /см3). В связи с этим минимально допустимая инфекционная активность препаратов увеличена до 9 lg ЭИД50 /см3. Соответственно утверждены новые наставления по применению вакцин из шт. La Sota и Бор/74 ВГНКИ (9в).

В СНГ широко применяют сухие вирусвакцины из шт. Н, Bl, La Sota, Бор/74/ВГНКИ. В профилактике НЕ важна разработка оптимальной схемы иммунизации птицы. Наиболее подходящий возраст для первой вакцинации - 10-14-й день, а для ревакцинации - 5-6 нед. Лучшие результаты получены при аэрозольной вакцинации в 10-дн, 5- и 8-нед возрасте. У индюшат осложнения после применения живой вакцины против НБ в 2-3 нед возрасте связывают с подавлением вакцинным вирусом фагоцитарной активности альвеолярных макрофагов. Во избежание этого предложена более рациональная схема иммунизации индюшат. В первый день жизни им вводят подкожно инактивированную вакцину в дозе 0,1 мл, а через 2 нед аэрозольно вакцинируют живой вакциной из шт. В1. Такая вакцинация обеспечивает длительный иммунитет. Высокий уровень поствакцинального иммунитета у матерей не препятствовал иммунизации суточных индюшат инактивированной вакциной (34а). В неблагополучных товарных хозяйствах рекомендуют прививать индеек аэрозольно с интервалом 5 нед в течение всего производственного периода.

Преимущество гранулированных форм вакцин из IIIT.V4 u Roakin в их более высокой термостабильности; их можно транспортировать без рефрижератора и смешивать с любым обычным кормом (40, 49).

Активность клеточного иммунитета у цыплят, вакцинированных шт. V4 вируса НЕ, определяли с помощью теста ингибиции миграции лейкоцитов (ИМЛ). Исследовали иммуногенность шт. V4 вируса НБ, задаваемого орально в комплексе с различными адъювантами.

Ни один из адъювантов, кроме авридина, не усиливал серологическую реакцию у вакцинированных цыплят (51).

Исследовали роль защитных реакций слизистых оболочек в создании поствакцинального иммунитета. Цыплят вакцинировали 2-кратно с 2-недельным интервалом интраназально, интраокупярно и введением вакцины в зоб. Каждый цыпленок получал дозу 7,8 lg ЭИД50 /nrr.V4. Через неделю в сыворотке и слезной жидкости цыплят, вакцинированных всеми способами, обнаруживали повышение уровня АТ. Оральная вакцинация шт.У4 индуцирует у цыплят не только гуморальные иммунные реакции, но и реакции иммунокомпетентных элементов слизистых оболочек (52). Показана высокая интерферирующая активность ПМВ- 2, что необходимо учитывать при изготовлении эмбриональной вакцины против НБ (3).

Получена живая вакцина из мутанта шт. Hitchner В1 путем клонирования методом бляшек серийными пассажами при температуре 28-30°С (56). H.A. Лагуткин и соавт. (5а) рекомендуют выпускать вакцины из шт. Bl, La Sota и Бор/74 ВГНКИ с активностью не ниже 9 lg ЭИДзо/мл и с титром в РГА не ниже 1:128. Доза при интраназальном (окулярном) введении должна быть 2-4 млн. ЭИД50 / мл, а при пероральном применении 10-20 млн. ЭИД50/МЛ с выпаиванием 2 дня подряд (57).

Э.Ф. Токарик и соавт. рекомендовали свой способ профилактики НБ, суть которого состоит в том, что цыплят в суточном возрасте иммунизируют вакциной из шт. La-Sota в дозе 20-40 ЭИД50/на голову. После вакцинации цыплятам с кормом вводили пробиотик Авилакт- 1К в суточной дозе 0,5 - 1,5% от массы корма 2-мя циклами по 7-15 дн с перерывом 15-12 дн. Использование пробиотика Авилакт-1К повышал антигенность вируса La Sota, усиливал иммунный ответ и устраняет нежелательное действие материнских АТ при иммунизации суточных цыплят (9а, 12а). Экспериментальное обоснование эффективной дозы вакцины и перевод её дозировки с объёмных единиц в количественные (ЭИД50) проведено во ВНИ- ТИБП (12). Для цыплят 15-20-сут возраста эффективная защитная доза (защита 80-100%) при интраназальной вакцинации составляет 103-106,3 ЭИД50 при титрах анти-ГА 1:8-1:512. Для цыплят 5-сут возраста, имевших материнские АТ, эффективная доза составляет 106,3 ЭИД50. В опытах с использованием для заражения цыплят как 100 ЛД50, так и 210б ЛД50 вирулентного штамма вируса НБ показано, что применение вакцины в дозах 110б-5 106 ЭИД50 обеспечивало защиту как 5, так и 20-сут цыплят. Динамика накопления анти-ГА и устойчивости птицы следующая: на 4-й день титр анти-ГА составлял 1:8-1:16, степень защиты - 70%; на 6-й день - титр - 1:32, защита - 90%; на 8-й день титр - 1:32-1:64, защита 100%; на 14-й день титр - 1:64-1:512, защита - 100%. Максимальное накопление анти-ГА наблюдалось через 30 дн, к 120-му дню титр их снижался до 1:8-1:4. Однако степень защиты через 3 мес составляла 92-100%, через 5 мес - 70-85% (12). Полученные авторами данные послужили основанием для корректировки как нормативно-технической документации по изготовлению вакцин, так и наставления по её применению.

Пассивный иммунитет у цыплят имеет прямое отношение к вирусоносительству и виру- совыделению. Так, при заражении пассивно иммунных цыплят патогенным вирусом 68% из них не проявляли признаков болезни в течение 80 дн наблюдения, но выделяли вирус в течение 45 дн, а вирусоносительство наблюдалось 54 дня. Этот факт имеет большое эпизоото- логическое значение при проведении мероприятий по санации хозяйств от НБ.

Во ВНИИВВиМ разработана новая технология ассоциированной вирус-вакцины против ШГГ и НБ. Она позволяет получать вакцины для аэрогенного применения с активностью 7 lg ЭИД50 /см3 по вирусу ИЛТ и 7,2-7,7 lg ЭИД50 /см3 по НБ; для интраназального и орального применения - по ИЛТ не ниже 7,0 lg ЭИД50 /см3, по НБ -не ниже 9,0 lg ЭИД50 /см3. После двукратной вакцинации в оптимальных дозах иммунитет формируется у 85-100% птиц и сохраняется около 6 мес (2а, 26, 4а). На основе мезогенного шт. ГАМ-61[А(в)ВН], выделенного из эпизоотического и затем аттенуированного в культуре клеток почек теленка и КЭ, разработана новая вакцина. После испытания в лабораторных и камеральных условиях установлено, что штамм обладает высокой иммуногенностью: обеспечивает защиту 97-100% птицы, привитой различными способами; безвреден в 10- и 100-кратной дозе для цыплят моложе 60-дн возраста; кроме того, его можно использовать в хозяйствах с острой эпизоотической ситуацией. Иммунитет наступает через 72-96 ч. Высокая эффективность вакцины подтверждена на 8-миллионном поголовье птиц в стационарно неблагополучных хозяйствах Ставропольского и Краснодарского краев. Серийное производство вакцины начато на Краснодарской биофабрике (96). Авторами изучен механизм формирования ранней невосприимчивости экспериментально инфицированных цыплят, привитых вакциной из шт.ГАМ-61. Оценку иммунитета проводили по тестам, представленным в таблице VI. 1.

Таблица VI. 1. Динамика формирования факторов резистентности у

цыплят, привитых вакциной из шт. ГАМ-61 Показатели Время после вакцинации (час)

4 8 12 24 30 48 72 96 120 168 Устойчивость к заражению % 75 75 100 100 Средний титр антител (10) 0 0 0,8 2,5 2,6 Титр интер- ферона(к^) 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 Т-лимфоциты (% ЮК) 12,8 13,8 16,4 48,9 . 29,4 35,4 _ _ 30,9

Результаты опытов показали, что в механизме формирования ранней невосприимчивости к вирусу НБ ведущая роль принадлежит факторам клеточного иммунитета. Защитное влияние гуморальных АТ проявляется значительно позже, и в течение первых 3-5 сут не в полной мере отражает истинный иммунологический статус организма (9г, 9д).

Аэрозольная вакцинация эффективна и безопасна только в стадах, благополучных по респираторным заболеваниям вирусной или бактериальной природы. В противном случае она провоцирует проявление ИЛТ, микоплазмоза и других болезней.

Применение инактивированных вакцин. Инактивированные вакцины обычно применяют в сочетании с живыми. Хороший защитный эффект получали, если однодневных цыплят прививали живой вакциной, а через 3 и 8 нед - инактивированной (25).

Предложено одновременное применение живых и убитых вирусов НБ для вакцинации суточных цыплят с низким уровнем материнских АТ. В качестве живой вакцины использовали лентогенный шт. La Sota, а в качестве инактивированной - формсшвакцину, содержащую неионизированный детергент твин-80 в виде водно-масляной эмульсии с низким содержанием минерального масла. Живую вакцину вводили в глазнично-носовую область, а инактивированную- подкожно. Титры специфических АТ у цыплят, привитых живой вакциной медленно возрастали в период с 28-го по 73-й день, в то время как уровень АТ у цыплят второй группы, привитых одновременно живой и инактивированной вакцинами, был постоянен. Разовая одновременная вакцинация в инкубационном зале обеспечивает стойкий иммунитет на весь период откорма бройлеров и позволяет исключить ревакцинацию (21а).

Инактивированные вакцины готовят из вируса, размноженного в КЭ. Активность одной дозы вакцины обычно не менее 8 lg ЭИДм/См3 инактивированного вируса. Концентрация его оказывает существенное влияние на титр сывороточных АТ. В качестве инактивантов вируса НБ используют формальдегид, ?-пропиолактон, этиленимин. Хорошими адъювантными свойствами обладал авридин. Вакцина с авридином не вызывала реакций на месте введения (35). Помимо того, инактивированную эмульгированную вакцину типа “вода в масле” готовили с помощью p-пропиолактона и в качестве эмульгатора использовали арла- цел и твин-80. Кур прививали в возрасте 8 нед, когда полностью исчезали материнские АТ. Вакцину вводят 2-3 раза с 4-нед интервалом. Подкожное введение оказалось более эффективным, чем внутримышечное. Максимальные титры сывороточных анти-ГА составляли 1:1280-1:2560. АТ сохранялись в течение 30 или 35 нед соответственно после 2- и 3-кратной вакцинации. Напряженный иммунитет сохранялся свыше года. При хранении вакцины с адъювантом при 4°С более 18 мес ее эффективность не снижалась. При однократной вакцинации кур в возрасте 16 нед титр АТ начинал снижаться через 12 нед (38а).

Вакцина против НБ оказалась эффективной против парамиксовируса птиц типа 3, вызывающего снижение продуктивности у индеек. Хороший иммунитет создавала вакцина из гомологичного вируса, вводимая двукратно. Вакцина из парамиксовируса-3 защищала птицу от вируса НБ, но не наоборот, т.е. имеет место одностороннее АГ родство (20). Сотрудники ВНИИЗЖ предложили готовить инактивированную вакцину из шт. La Sota, которую инактивировали этиленимином, а вместо ГОА предложили свой более дешевый адъювант (56).

Оценка поствакцинального иммунитета. Эффективность вакцинации зависит от иммуногенности вакцинного штамма, наличия пассивного иммунитета, возраста цыплят, дозы и метода введения вакцины, соблюдения сроков между прививками, техники вакцинации, очередности применения более или менее аттенуированных штаммов, физиологического состояния организма птицы и пр. Поэтому схемы и методы вакцинации должны разрабатываться для конкретных хозяйств исходя из эпизоотической ситуации. При проведении профилактической вакцинации необходимо добиваться создания 100%-ного напряженного иммунитета у птицы всех возрастных групп. Этого можно достигнуть в том случае, если в хозяйстве хорошо организована система контроля поствакцинального иммунитета.

Эффективность вакцинации против НБ можно оценивать двумя способами: биопробой и определением титра анти-ГА. Во втором способе исследуют сыворотки в РТГА. Для этого через 12-15 дн после вакцинации берут кровь от 25 цыплят из 5-6 точек каждого птичника. Напряженность иммунитета проверяют также за несколько дней перед следующей вакцинацией. В угрожаемых и бывших неблагополучных хозяйствах напряженность иммунитета у взрослой птицы проверяют через каждые 60 дн. Вакцинацию считают эффективной, если в более 80% проб исследуемой сыворотки крови цыплят в возрасте до 30 дн АТ выявляли в разведениях 1:8 и выше, у молодняка до120дн - 1:16и выше, у взрослых кур - 1:64 и выше, меньшие титры АТ служат показателем необходимости ревакцинации птицы.

Анти-ГА появляются на 7-10-й день после вакцинации; титр их достигает максимального уровня 1:256-1:2048 к 25-30-му дню. Через 60 ди после вакцинации титры АТ снижаются (1:8-1:256), а через 5-6 мес остаются только их следы. Через 2 мес после вакцинации у 99,5- 100% исследованных желтков яиц титры АТ выше 1:8. Выявлена четкая корреляция титров в сыворотке крови и пульпе пера в отношении материнских АТ, так и в отношении активно выработанных АТ на 60-96-й дн после вакцинации.

Если после ревакцинации уровень сероконверсии равен 1,2 и более, то иммунизация проведена качественно и своевременно, если он ниже 1,2 или отрицательный, то прививка птицы была сделана без учета титра пассивных или высокого титра активных АТ. Случаи низкой сероконверсии или слабой напряженности иммунитета после первичной вакцинации отмечают при недостаточном АГ-раздражении (заниженной прививной дозе), иммунизации птицы с высоким титром АТ, сближении срока ревакцинации и частых АГ раздражении (многократные вакцинации за короткий промежуток времени), нарушении гигиены кормления и содержания, острых инфекционных болезнях или влиянии других иммунодепрессив- ных факторов (5).

Высокий уровень АТ и сохранение его в течение года и более после однократной иммунизации вирусвакцинами из штаммов Bl, La Sota, F, Br или инактивированной ГОА- вакциной свидетельствует о циркуляции среди птиц полевого вируса НБ.

Необходимо обратить внимание на недостаточное АГ раздражение при оральном применении вакцины. Однократное выпаивание препарата в рекомендуемых дозах индуцирует выработку специфических АТ только у 20-70% птиц, а применение его 2 дня подряд, как правило, обеспечивает устойчивость к вирулентному вирусу у 80-100%. Расчет дозы сделан в зависимости от активности вакцины, выпускаемой биологической промышленностью (табл. VI.2)

Таблица VI.2. Расчетная доза в зависимости от исходной

активности вакцины (ЭИД50 см3) против НБ Метод введения Возраст

(дн) 2-108 ЭИД50 на 1 голову 6,32-108 2 1 09 6,32-109 Интраназальный 1-300 0,4 1,264 4,0 12,64 Пероральный 1-25 2,0 6,32 12,64 20,0 63,20 26-45 4,0 18,98 40,0 126,0 46-300 6,0 60,0 189,0

Согласно наставлению, в 1 ампуле (2 мл) 500 назальных или 200 оральных доз; содержимое ее растворяют соответственно в 50 и 1000 мл воды. Вакцину вводят птице интрана- зально - 2 капли (0,1 мл), перорально цыплятам до 25-дн возраста - по 5 мл, до 45-дн возраста - по 10 мл и взрослым - по 15 мл (2 дня подряд). Так как вакцину из шт. Бор/74 ВГНКИ выпаивают однократно, то птица получает дозу в 2 раза меньше, чем указано в таблице. (5).

Генно-инженерные вакцины. Сконструирован рекомбинант вируса оспы птиц, экспрессирующий ГА-нейраминидазный протеин вируса НБ. Рекомбинант обладал выраженными защитными свойствами - птица, иммунизированная внутримышечно, после одной прививки через 28 сут выдерживала заражение вирулентным вирусом (14). Для получения рекомбинантной живой вакцины ген слияния А вируса НБ клонировали под контролем промотора Р75 в вакцинный штамм ВЧП по Coity Spei. Был отобран один рекомбинант fp EFF2, у которого ген F был выявлен в концевых повторах геномной ДНК. Считается что данная векторная система может быть использована для получения генно-инженерной мультива- лентной вакцины, экспрессирующей гены таких патогенных для птиц вирусов как ИБ, БМ, ИЛТ, ИББ (18).