ХАРАКТЕРИСТИКА ВОЗБУДИТЕЛЯ

Морфология и химический состав. Вирус содержит ДНК, вирионы размером 62-77 нм и имеют форму икосаэдра; частицы обычно 6-гранные, хотя отдельные из них 20- гранные, имеют кубический тип симметрии. Вирионы не имеют наружной липопротеиновой оболочки, не содержат липидов и гликопротеидов. Капсид их состоит из 252 капсомеров. Мол.м. ДНК АВ овец составляет 23,3 МД, она на 5-6 МД больше мол.м. ДНК АВ КРС серотипа 2, что еще раз подтверждает наличие генетических различий АВ животных обоих видов (28). В этих исследованиях были использованы, как референтные штаммы 5-и прототипных штаммов овечьих АВ и прототипный шт. № 19 типа 2 бычьего АВ. Плавучая плотность полных вирионов овечьего АВ при центрифугировании в градиенте плотности СБС1 - 1,333 г/см3. Значительное различие было также обнаружено и в поведении бычьего типа 2 и овечьего прототипного штамма. Бычий шт. 19 при ультрацентрифугировании показал, по крайней мере, одну полосу, в то время как овечьи шт. выявили 3 полосы неполных вирусных частиц. Различия были обнаруженны и между вирусами 2-х видов хозяев. Был подтвержден факт, что структура неполных, дефектных вирусных частиц обоих вирусов может различаться в зависимости от вида хозяина (28).

В литературе нет данных по сравнительному изучению ДНК 2-х типов АВ с применением проназы. Заметные отличия были установлены между нуклеиновой кислотой бычьего АВ (типа 2) и штаммами овечьих АВ. Мол.м. ДНК бычьего АВ оказалась на 5-6 МД меньше таковой АВ овец. Структурные белки вириона были проанализированы электрофорезом в ПААТ. Мол.м. гексона - 105 кД, однако она оказалась более низкой у овечьих и бычьих штаммов по сравнению с массой ДНК АВ человека. Были также обнаружены значительные различия между структурными белками полных и неполных частиц.

Устойчивость. АВ овец термостабильны. Венгерские штаммы их выдерживали 30-мин прогревание при 56°С, но заметно снижали при этом инфекционную активность. АВ овец (как и другие АВ) устойчивы к эфиру, хлороформу, фреону-ИЗ, трипсину, а также к изменению pH от 3,0 до 9,0 (19, 5, 23), чувствительны к 5%-ному р-ру фенола, 1%-ному р-ру хлорамина, 3%-ной перекиси водорода, этиловый спирт и формалин их инактивируют. Устойчивость АВ к физическим и химическим факторам способствует длительному сохранению их во внешней среде, а это увеличивает степень риска инфицирования животных и человека (19).

АГ структура. Принципиальных отличий в АГ структуре АВ овец и КРС нет.

АГ активность. У овец-реконвалесцентов выявлены 3 основных класса Ig: G, M, А (17, 37, 48). АТ классов IgA и IgG играют важную роль в защите организма овец от АВ, проникающих в организм воздушно-капельным путем через слизистые оболочки. ВНА образуются при иммунизации животных как препаратами очищенного вируса, так и некоторыми кап- сидными белками. У овец установлены закономерности формирования гуморального иммунитета при изучении распределения специфических АТ у ягнят разных возрастных групп и взрослых овец. Так, у 3-мес ягнят на 5-й дн после заражения уровень IgA снижался, а содержание IgG повышалось. На 7-й дн после заражения в сыворотке крови ягнят АТ обнаруживались в титре 3-4 log2, к 21-му дн титр АТ возрастал до 7 log2. Между тем, если до заражения уровень IgA в носовых секретах составлял 0,38 мг/мл, то на 7-й дн после заражения он возрастал до 0,46 мг/мл; на 12-й дн - до 0,58 мг/мл. На 6-10 сут после заражения ягнят аденовирусом (М-15) были выявлены КСА в титрах 1:5 - 1:20 (12). Важное значение имеет выявление динамики формирования колострального постинфекционного иммунитета у ягнят. Поэтому сыворотки крови животных автор исследовал в РТГА на АТ к ПГ-3 и РНГ А к АВ овец (19). ВНА (в титре 1:8) впервые были обнаружены в крови ягнят, убитых на 7-й день после заражения. В сыворотке, собранной позднее, титр их составлял 1:32 - 1:128. Тот же титр был обнаружен и с 100 ТСД50 шт. Het/3 или бычьего АВ типа 2.

АГ вариабельность и родство. Род Mastadenovirus включает 6 серотипов АВ овец и 1 серотип АВ коз. Как уже указывалось, в 1962 г. в Сев. Ирландии впервые были выделены изоляты АВ от овец, которые позднее, в 1971 г., (в PH) были подразделены на 3 серотипа. В последующем, в Шотландии выделили АВ, не относящийся к этим 3-м прототипным штаммам (19). Венгерский изолят проявлял близкое родство с АВ КРС серотипа 2 (25, 28), а изоляты, выделенные в Шотландии и Турции, были обозначены как АВ овец серотипов 4 и 5 (21). Далее, АВ удавалось выделить от овец в Новой Зеландии (22). Один из иих был обозначен как серотип 6 АВ овец. Изоляты, выделенные в США, при исследовании оказались родственными серотипам 5 и 6 АВ овец. Венгерские шт. Het/3 и ORT/111, изолированные из носовых секретов 1,5-2-мес мериносовых ягнят в период заболевания пневмонией, отличались от других серотипов АВ овец, о чем сообщили турецкие ученые.

При вирусологическом исследовании соскобов слизистой оболочки толстого кишечника 2-

х коз, павших от чумы КРС в Нигерии, было выделено 2 изолята АВ - Ниг 75/1-445 и Ниг 75/2-840. Оии были отнесены к различным серотипам. В 1988 г. в штате Луизиана, установлена широкая циркуляция АВ среди овец, где были выделены шт. PTS-151 и PTS-42 в ассоциации с вирусом парагриппа-3 и респираторно-синтициальным вирусом. В АГ отношении штаммы оказались сходными с изолированными из носовых секретов и фекалий овец в Австралии, Венгрии, Новой Зеландии, Болгарии, Турции и Египте. Шт. АХ-2 и АХ-4 АВ изолировали в Монголии от ягнят с хроническими пневмониями. В Австралии шт. Р/11537 оказался идентичным новозеландскому шт. WV-757 и был родственен АВ КРС серотипа 7. В Индии были выделены шт. Д16 и А31 от больных ягнят с признаками пневмонии, которые отнесены к АВ серотипа 1. В Египте при исследовании парных проб сывороток крови овец в PH выявляли серопозитивных животных к АВ 1-ой подгруппы, 1-го серотипа. Титры сывороток составляли 1.4 и 1:16. Среди больных пневмонией овец, завезенных из Франции и Англии, болгарские ученые установили наличие ВНА к АВ в тигре 1:2 и 1:32. Французские ученые выявляли специфические АТ к АВ в сыворотке крови овец, находившихся в агональном состоянии, у которых ранее отмечалась алиментарная дистрофия, миопатия, гельминтозы и пневмония. Таким образом, АВ овец были выделены не только во многих странах мира, ио, что самое главное, они оказались не идентичны в АГ отношении.

По сообщению D.H. Davies и Humphreys в Северной Ирландии авторы изучали 9 серотипов АВ КРС, 5 - овец, 4 - поросят и 28 из 32 серотипов АВ человека в перекрестной PH, проводившейся с целью изучения их АГ родства. Авторы показали, что все исследованные ими вирусы относятся к различным серотипам. Подобный результат был получен авторами в Новой Зеландии при сравнении 2-х шт. WV 419/75 и WV 757/75, выделенных от ягнят. Среди овечьих АВ несколько особняком оказался шт.7769, выделенный от овец в Северной Ирландии в 1974 г. Помимо АГ отличия от 6 известных серотипов АВ овец указанный штамм медленно распространяется среди овец (36,37).

Таким образом, в настоящее время общепризнано, что АВ овец имеют 6 серотипов, причем вирусы типов 1, 2 и 3 имеют общий КС АГ, который отличается от АГ типов 4, 5 и 6, на основании чего АВ овец делятся иа 2 группы (3,5,21,25,34,35,47).

В РДП и РСК было четко показано, что все овечьи штаммы содержат общий для АВ млекопитающих АГ, а ИФ подтвердила это положение. Пробы сывороток, полученные от овец при массовых обследованиях, содержали ПА, которые реагировали исключительно с АГ бычьего АВ подгруппы 2. Это подтверждает и существование подгруппы 2 среди овечьих АВ. В PH и РЗГ А в равной степени установлена близкая АГ связь между определенными овечьими изолятами и бычьим АВ типа 2. Из этого, видимо, следует, что для определения типа выделенного изолята необходимо учитывать ие только принадлежность вируса к виду хозяина, но также и его принадлежность к роду Mastadenovirus.

Степень родства между АГ АВ овец, КРС и человека изучали не только в серологических реакциях, но и сравнением их ДНК. Выделение последней проводили ультрацентрифугированием, фрагментировали методом рестрикации ферментами BAM-HV, SAL-V и ЕСО- RV. Полученные при этом фрагменты ДНК разделяли путем агарозно-гелевого электрофореза (25, 26, 28, 29, 31). В итоге исследователи показали, что мол.м. геномов аденовирусов овец и КРС меньше генома АВ человека. Различия также были обнаружены и между структурными белками полных и неполных вирусных частиц (28, 29).

ГА свойства. Овечьи АВ тестированы по ГА активности для того, чтобы определить все ли они обладают таким свойством, и если да, то сходна ли их Г A-активность с активностью близкородственных АВ КРС. Среди испытанных эритроцитов крыс, обезьян, человека (нулевой (0) группы), КРС, овец и кур, только эритроциты крыс агглютинировались всеми овечьими АВ. При тестировании бычьих штаммов результаты оказались аналогичными.

Интересно, что овечьи штаммы ие вызывали АГ эритроцитов овец, в то время как бычий прототипный штамм типа 2 вызывал незначительную АГ эритроцитов этих животных. Было также отмечено, что штаммы АВ ие вызывают агглютинацию эритроцитов телят, в то время как бычий штамм типа 2 вызывал. Овечий и бычий штаммы АВ в равной степени ие вызывают АГ эритроцитов макаки резус (Macacus rhesus), кур и человека.

На основе РГА с эритроцитами крыс РЗГ А оказалась типоспецифической и её результаты коррелировали с результатами PH. Шт. 14-15 АВ овец агглютинировал эритроциты белых мышей (титр 1:2) и белых крыс (титр 1:32) (12).

Таким образом, исследование ГА-свойств дало возможность дифференцировать серологические близкородственные овечьи и бычьи штаммы, что может быть использовано как наиболее простой и подходящий внутритиповой дифференцирующий маркер овечьих и бычьих штаммов.

Экспериментальная инфекция. Поздеева Р.Д. и др.(11) экспериментально воспроизвели АВИ на ягнятах романовской породы 1-мес возраста, предварительно исследованных на отсутствие специфических АТ к ПГ-3, АВ и хламидиям в РТГА и РДСК. Помимо этого, подобные результаты были получены многими авторами (10, 15, 16, 25, 26, 44, 45, 46, 47). Все исследования однозначно свидетельствуют о том, что АВ вероятные возбудители синдрома слабости молодняка, что подтверждалось и патологоанатомическими изменениями внутренних органов (27,30). Ягнят, выращенных без молозива, заражали в нос и трахею 2- мя штаммами овечьего АВ типа 5 прототипным шт. SAV и РА/8 изолированном при эпизоотии острого пневмоэнтерита. Ягнята, заражённые шт. SAV, не имели характерных признаков болезни, кроме ринита и интерстициальной пневмонии. У ягнят, заражённых шт. РА/8, отмечали яркую клиническую картину болезни с поражением дыхательных путей, с выраженными патологоанатомическими изменениями. Шт. РА/8 вызывал поражение почек (повреждение клубочков - fyбyлoнeфpoз) и печени (гепатит). Аналогичная патогенность была установлена и у венгерского шт. АВ овец - Het/З. Помимо гиперемии и поражения респираторного тракта, указанный штамм у опытных ягнят вызывал дисфункцию кишечника и проявлял выраженную контагиозность. Как видно, 2 овечьих шт. АВ, изолированные из носовых истечений ягнят с респираторными симптомами или из кала при латентной инфекции клиничеки здоровых овец, чётко различались по патогенности (26).

Интересны в научном и ценны в практическом отношении исследования по экспериментальному воспроизведению заболевания у молозивных ягнят, заражённых аденовирусом и Pasteurella haemolytica. При смешивании вирусно-бактериальной инфекции симптомы болезни со стороны респираторного тракта были более продолжительными (9 дн) и интенсивными. Аналогичные опыты проводились в Новой Зеландии (36,52).

Признание близкой связи между определёнными овечьими изолятами и бычьим АВ типа 2 наводит на мысль, что инфицирование ягнят и телят происходит овечьим изолятом. Бычий АВ типа 2, подобный овечьему изоляту (шт. Het/З), также вызывал экспериментальную инфекцию у ягнят н телят (55). У животных симптомы болезни были сходны. В этом свете превалирующая концепция относительно абсолютной хозяйской специфичности АВ нуждается в пересмотре.

Культивирование. АВ овец размножаются в первичной культуре различных тканях человека н животных, перевиваемых линиях эпителиальных клеток, опухолевых и нормальных тканей людей, животных, в том числе птиц (2). Большая часть репродуцируемого АВ содержится в цитоплазме инфицированных клеток. ЦПИ обычно наблюдаются по периферии эпителиального пласта, клетки набухают и увеличиваются. При заражении однослойной культуры клеток обычно уже через 24 ч инкубации в ядрах заражённых клеток появляются вакуоли, набухают ядра и выявляются внутриядерные тельца-включения (19, 29). Сроки наступления ЦПЭ зависят от вида культуры, штамма вируса и множественности заражения.

АВ овец (шт. ORT/111 и Gy/14) вызывал ЦПИ на 16-й дн. Все штаммы АВ овец, кроме ORT/111, реплицировались при температуре 40°С (25, 26). Два индийских изолята АВ овец (Д16 и Д16/31), выделенные от ягнят, вызывали ЦПЭ в культурах клеток почек и лёгких эмбрионов овец и коз, а также в культурах тестикулов ягнят и козлят. Максимальный титр вируса в инфицированной культуре сохранялся до 60 ч после заражения (1, 11. 38, 39, 40).

По мнению венгерского исследователя Belak (31), характеристика ЦПЭ не связана с сероти- пом АВ, а скорее всего со штаммом, который в опытах вызывал агрегацию клеток в виде гроздей, в то время как другие штаммы индуцировали диффузное округление и набухание клеток.

При сравнении циклов репликации разных штаммов в стационарных и роллерных культурах было подтверждено различие между овечьими штаммами АВ. Установлено различие овечьих шт. ОРТ/111 и Gy/14 в сроках репродукции, что, по мнению автора, имеет значение в производстве вакцины. Для цикла репликации АВ овец не имеет особого значения возраст (0-7 дн) используемой культуры клеток почки эмбриона овец. Наибольшая скорость репликации каждого из них проходила при 40°С.

ЦПЭ автор изучал как в нативных и окрашенных препаратах под световым микроскопом, так и в ультратонких - под ЭМ. Кроме того, репликацию этого вируса изучали методом непрямой ИФ. Используя этот метод, Belak показал, что в заражённой культуре вирусный АГ появлялся в ядрах клеток через 8 ч после заражения, и к 16 ч уже около 90% клеток обладали внутриклеточной флюоресценцией. Данный тест оказался пригодным для постановки быстрого диагноза на пневмоэнтериты АВ этиологии у ягнят (25).

Особенности внутриклеточной репродукции. Принципиальных отличий в особенностях репродукции овечьих и бычьих АВ нет. На основании морфологических свойств изолятов WV 419/75 и WV 757/75 пришли к заключению о полном сходстве овечьих АВ с известными АВ КРС.