Определение активности а-амилазы в сыворотке крови, моче, дуоденальном содержимом амилоклассическим методом со стойким крахмальным субстратом (метод Каравея).  

Реактивы: бензойная кислота (ч.

натрия фосфат двузамещенный безводный (NaHPO^ ч. д. а.);

крахмал растворимый для нефелометрии или крахмал по Lintner. Крахмал по Lintner выпускают зарубежные фирмы специально для использования в качестве субстрата при определении а-амилазы;

154 ммоль/л раствор натрия хлорида;

субстратно-буферный раствор pH 7. 13,3 г безводного двузаме- щенного натрия фосфата и 2,0 г бензойной кислоты растворяют в 250 мл 154 ммоль/л раствора натрия хлорида и доводят до кипения. Суспендируют 0,2 г растворимого крахмала (крахмал для колориметрии) в небольшом количестве холодной воды и вводят в кипящий буферный раствор. Кипятят 1 мин, охлаждают и доводят объем дистиллированной водой до 500 мл. Стабилен при комнатной температуре в течение 10—12 дней. Субстратно-буферный раствор должен быть прозрачным;

калия йодид (ч. д. а. или х. ч.);

калия фторид (ч. д. а.);

калий йодноватокислый (ч. д. а., х. ч.);

кислота хлористоводородная (НС1) концентрированная (х. ч.);

0,01 н. раствор йода. 0,036 г калия йодноватокислого и 0,45 г калия йодида растворяют в 40 мл воды и медленно при помешивании добавляют 0,09 мл концентрированной НС1. 5 г калия фторида растворяют в 50 мл воды, фильтруют в мерную колбу, приливают 40 мл раствора йода и доливают водой до 100 мл. Хранят в посуде из темного стекла. Годен в течение 1 мес. Если в рабочий раствор йода не добавляют калия фторид, то его необходимо готовить ежедневно.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; термостат; пробирки, пипетки; мерные колбы; секундомер.

Материал для исследования: светлая сыворотка или плазма крови; моча; дуоденальное содержимое, предварительно разбавленное 154 ммоль/л раствором натрия хлорида.

Ход определения.

Холостую пробу ставят так же, как опытную, но биологическую жидкость добавляют после инкубации вместе с 0,1 н. раствором йода. Измеряют при тех же условиях, что и опытную пробу, против воды.

Расчет активности а-амилазы выражают в мг или г крахмала, гидролизованного 1 л биологической жидкости за 1 с инкубации при 37 °С.

Расчет ведут по формулам

х=ёфакш»

Е\

х = Е11Е1 ¦ 160 • К,

Е\

где х — активность а-амилазы, мг/с • л; Е\ — экстинкция холостой пробы; — экстинкция опытной пробы; С — количество крахмала, введенного в опытную и холостую пробы (2 мг); / (160) — коэффициент пересчета на 1 с инкубации; К — коэффициент пересчета на 1 л биологической жидкости с учетом разведения.

Источник: 43.

Клиническое значение. Фермент амилаза (диастаза) осуществляет гидролитическое расщепление полисахаридов до декстринов и мальтозы. Богаты амилазой сок поджелудочной железы и слюна. В кровь фермент поступает главным образом из поджелудочной железы, поэтому активность амилазы в крови и моче повышается обычно при заболевании поджелудочной железы. При остром панкреатите она повышается в 10 раз и более. Кроме того, амилазная активность возрастает при перитоните, язвенной болезни свиней, собак и других животных, при заболеваниях почек. Повышение активности амилазы крови, как правило, сопровождается адекватным увеличением ее активности в моче. Однако при нефрозах, гломерулонефритах активность амилазы сыворотки крови увеличена, а в моче снижена.

Снижение активности амилазы в крови и моче наблюдается при гепатитах, дистрофиях печени, сахарном диабете, гипотиреозе, токсической диспепсии.

Нормативы активности а-амилазы в сыворотке крови, моче и других биологических субстратах целесообразно находить на здоровых животных-аналогах.

Примечание: Для получения плазмы крови используют только гепарин. Амилаза стабильна в сыворотке и плазме в течение 1 нед при комнатной температуре или при 2—8 °С, при минус 20 °С — 1 год.