ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗЕРВНОЙ ЩЕЛОЧНОСТИ КРОВИ ДИФФУЗНЫМ МЕТОДОМ ПО И. П. КОНДРАХИНУ
Реактивы: 0,1 н. (0,05 моль/л) раствор серной кислоты (готовят из фиксанала);
0,02 н. (0,01 моль/л) (точно) раствор серной кислоты (готовят из 0,1 н. раствора серной кислоты); 0,1 н. (0,1 моль/л) раствор натрия гидроксида;
0,02 н. (0,02 моль/л) раствор натрия гидроксида (готовят из 0,1 н. раствора натрия гидроксида). Титр этого раствора проверяют перед анализом и доводят до нужной величины;
Рис. 1
Прибор для определения резервной щелочности крови
5 %-ный раствор серной кислоты;
1 %-ный спиртовой раствор фенолфталеина.
Оборудование: сдвоенные колбы с резиновыми пробками (рис. 1). Они должны быть хорошо вымыты без следов щелочи и кислоты; микробюретки на 2 и 5 мл; центрифужные пробирки.
Ход определения. В чистые сухие центрифужные пробирки вносят 0,5—1,0 мл вазелинового масла, 1—2 капли 1%-ного раствора гепарина.
Кровь берут из яремной вены в подготовленную пробирку под слой вазелиновогомасла, закрывают пробкой, осто-
рожно перемешивают. В лаборатории центрифугируют ее при
холодильнике при температуре 4 °С. Анализ проводят в течение 8—12 ч после взятия образца крови.
По количеству проб крови с учетом параллельных исследований подбирают сдвоенные колбы и три сдвоенные колбы оставляют для контроля. Точность результатов всей серии исследований полностью зависит от точности титрования раствора натрия гидроксида в контрольных колбах. Все колбы закрывают резиновыми пробками.
Анализы проводят серийно. В одну из каждой пары сдвоенных колб, поочередно открывая, вносят с помощью пипетки и шприца или резиновой груши по 2 мл 0,02 н. раствора натрия гидроксида и плотно закрывают пробкой. В смежную колбу, кроме контрольных, опять поочередно открывая и закрывая, вносят 0,5 мл плазмы крови, находящейся под вазелиновым маслом. После этого в колбы с плазмой (контрольные без плазмы), также поочередно открывая, вносят из пипетки (не выдувая) по 1 мл 5%-ного раствора серной кислоты и быстро плотно закрывают пробкой. Проверяют, хорошо ли закрыты колбы, осторожно вращательными движениями перемешивают плазму крови с кислотой и оставляют стоять в течение 4 ч. Перемешивают плазму с кислотой не менее 3 раз.
Через 4 ч приступают к титрованию. Для этого поочередно открывают колбу, где находится раствор натрия гидроксида, вносят туда 1—2 капли раствора фенолфталеина и титруют из микробюретки на 2 мл 0,02 н. раствором серной кислоты до полного обес
цвечивания раствора. Опытные и контрольные пробы титруют с одинаковой скоростью.
Расчет. По разнице результатов титрования в контрольных и опытных образцах определяют количество мл 0,02 н. раствора натрия гидроксида, связанного с углекислым газом, вытесненным из бикарбонатов плазмы.
Расчет ведут по формуле
(V _ V 1 0 448 х I кп gt; V ° = Ю0, или (Ук - Уп) ¦ 89,6,
где х — количество ССgt;2, об.%; Ук — количество 0,02 н.
раствора серной кислоты, пошедшего на титрование контроля, мл; Уп — количество 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование исследуемого образца, мл; Упл — количество плазмы крови, мл (в методике принято равным 0,5 мл); 0,448 — коэффициент пересчета 0,02 н. раствора натрия гидроксида на СО2 в условиях данной реакции; 100 — коэффициент для пересчета результатов анализа на 100 мл плазмы крови.В конечном счете разницу количества (мл) 0,02 н. раствора серной кислоты, пошедшего на титрование контрольного и опытного образцов, умножают на коэффициент 89,6 и получают конечный результат в об.% СО2. Ошибка метода составляет ±3 %.
Источники: 29, 34.
Нормативы величины резервной щелочности плазмы крови животных представлены в приложениях 5 и 6.
Снижение резервной щелочности крови свидетельствует о сдвиге кислотно-щелочного равновесия в сторону ацидоза, повышение — в сторону алкалоза.
Метаболический ацидоз отмечают при однотипном высоко- концентратном или силосо-жомовом кормлении, кетозе, вторичной остеодистрофии, ацидозе рубца, сахарном диабете, расстройствах желудочно-кишечного тракта, особенно при диарее молодняка, сердечной недостаточности, миоглобинурии, гипоксии, нефрите, почечной недостаточности, септических процессах и т. д. Респираторный ацидоз бывает вследствие замедления процесса отдачи углекислоты легкими. Такое явление наблюдается при расстройстве сердечной деятельности, отеке легких, тяжелой пневмонии, угнетении дыхательного центра, нахождении животных в среде с высокой концентрацией углекислоты в воздухе.
Состояние метаболического алкалоза у животных бывает при алкалозе рубца, введении в организм больших доз пищевой соды. Респираторный алкалоз наблюдается при усиленной гипервентиляции легких, вследствие выведения из организма большого количества углекислого газа, а также при содержании животных на большой высоте.
Еще по теме ОПРЕДЕЛЕНИЕ РЕЗЕРВНОЙ ЩЕЛОЧНОСТИ КРОВИ ДИФФУЗНЫМ МЕТОДОМ ПО И. П. КОНДРАХИНУ :
- Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови по гидролизу р-глицерофосфата (метод Бодански).
- Определение активности а-амилазы в сыворотке крови, моче, дуоденальном содержимом амилоклассическим методом со стойким крахмальным субстратом (метод Каравея).
- Метод неферментативного определения лактата и пирувата в одной пробе крови.
- Флуориметрический метод определения общего тиамина в крови и печени (по Г. Д. Елисеевой).
- Определение марганца в крови перйодатным методом.
- Определение общего белка в сыворотке крови рефрактометрическим методом.
- Определение кетоноиых тел в крови йодометрическим методом.
- Определение белковых фракций в сыворотке крови турбидимет- рическим (нефелометрическим) методом.
- Определение свободного аминного азота в сыворотке крови по методу Г. А. Узбекова в модификации 3. С. Чулковой.
- Определение токоферолов в тканях и сыворотке крови методом колоночной хроматографии.
- Определение билирубина в сыворотке крови животных по методу Ендрассика—Клеггорна—Грофа в модификации В. И. Левченко и В. В. Влизло.
- Определение билирубина в сыворотке крови по диазореакции (метод Ендрассика—Клеггорна—Грофа).