Определение билирубина в сыворотке крови животных по методу Ендрассика—Клеггорна—Грофа в модификации В. И. Левченко и В. В. Влизло. 

Ход определения. В4 пробирки вносят по 0,5 мл разведенной в 2 раза сыворотки крови.

18. Схема постановки реакции для определения билирубина

Из показателя оптической плотности проб общего и связанного билирубина вычитают показатель оптической плотности контрольных проб и по калибровочному графику определяют содержание общего и связанного билирубина в мг/100 мл сыворотки крови или в мкмоль/л, а по разнице между ними — содержание свободного (неконъюгированного) билирубина.

Источник: 20.

Клиническое значение.

В сыворотке крови животных содержится билирубин, связанный с глюкуроновой кислотой, или прямореагирующий, и конъюгированный свободный непрямореагирующий билирубин.

Повышение содержания билирубина в сыворотке крови (гиперби- лирубинемия, желтуха) отмечается при гепатите, циррозе печени, острой токсической гепатодистрофии, опухолях печени. При этих болезнях увеличивается уровень в крови как несвязанного (свободного), так и связанного (конъюгированного) билирубина. При гемолитической желтухе, обусловленной гемолитическими ядами или кровопаразитами (протозоо), концентрация билирубина в крови повышается в основном за счет свободного (несвязанного) билирубина. В последнее время разделению билирубина на фракции в клинике не придают особого значения, оценивают в основном количество общего билирубина.

Коллоидно-осадочные пробы. Для оценки белковосинтетизиру- ющей функции печени, диагностики и прогнозирования бронхопневмонии и других патологических состояний широко используют осадочные пробы. Применение их основано на изменениях коллоидной устойчивости белков в сыворотке крови.

У здоровых животных белки в сыворотке крови находятся в коллоидном состоянии и отличаются высокой устойчивостью. При многих заболеваниях изменяется белковый спектр сыворотки крови, наступает диспротеинемия — снижение содержания альбуминов и повышение количества глобулинов, вследствие чего коллоидная устойчивость белков сыворотки крови снижается, под действием определенных веществ наступает преципитация, приводящая к помутнению.

Предложено много осадочных проб с применением реакции Токата (пробы Токата, Гросса, сулемовая); тимоловая проба; кофе- ин-холестериновая проба; цинк-сульфатная проба; реакция Валь- тмана; золото-коллоидная проба; проба с сульфатом меди и др.

Хотя осадочные пробы не специфические, однако позволяют устанавливать степень нарушения соотношений между альбуминами и глобулинами сыворотки крови.

Осадочные пробы в сочетании с данными клинического состояния животных, наличием признаков заболевания печени, легких или других органов — ценные диагностические тесты.

Сулемовая проба. Принцип. Сулема в присутствии мелкодисперсных коллоидов (белков) образует коллоидный раствор солей ртути. Нарушение дисперсности белковых фракций сыворотки крови вызывает осаждение грубодисперсных частиц.

Реактивы: при исследовании сыворотки крови крупного рогатого скота 100 мг двухлористой ртути растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл (100 мг%-ный). При исследовании сыворотки крови кур и лошадей берут 600 мг сулемы, растворяют в воде в мерной колбе вместимостью 100 мл (600 мг%-ный);

натрия хлорид, 154 ммоль/л (0,9%-ный). 9 г соли растворяют дистиллированной водой в мерной колбе вместимостью 1 л.

Оборудование: микробюретка на 2 или 5 мл с оттянутым носиком; стаканчики на 50 мл.

Ход определения. В стаканчик вносят 1 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида и 0,5 мл сыворотки крови, перемешивают. Из микробюретки (или пипетки) медленно, по каплям с интервалом 20—30 с титруют до стойкого помутнения, при котором через вертикальный слой жидкости нельзя прочитать газетный текст. Результат выражают в мл раствора сулемы, пошедшего на титрование.

Источник: 43.

Примечание. Концентрация раствора сулемы для сыворотки крови крупного рогатого скота, лошадей и кур нами (И. П. Кондрахин) подобрана опытным путем.

Клиническое значение. В норме показатель сулемовой пробы у взрослого крупного рогатого скота 1,6—2,6 мл 100 мг% раствора сулемы, у кур и лошадей 1,6—2,6 мл 600 мг% раствора сулемы. При гепатите, циррозе печени, гепатодистрофии показатель сулемовой пробы ниже 1,6 мл, доходит до 0,9—0,7 мл. Чем тяжелее процесс в печени, тем выраженнее диспротеинемия, тем меньше показатель сулемовой пробы. Высокий показатель сулемовой пробы указывает на нарушение коллоидной устойчивости белков сыворотки крови. Такое явление отмечается при снижении содержания общего белка в сыворотке крови. Между уровнем общего белка в сыворотке крови и показателем сулемовой пробы нами установлена отрицательная корреляция, т. е., чем больше белка в сыворотке крови, тем меньше показатель сулемовой пробы. Но эта связь не сильно выражена, бывают случаи, когда при невысокой концентрации общего белка в сыворотке крови сулемовая проба оказывается положительной.