Определение растворимых углеводов фотометрически с пикриновой кислотой

пропорциональна количеству углеводов в реакции, поэтому возможно их колориметрическое определение.

Используют реакцию восстановления пикриновой кислоты (2,4,6-тринитрофенола) в пикрамииовую.

Таким методом можно определять глюкозу, фруктозу, маннозу, галактозу, ксилозу, арабинозу. Дисахариды * сахароза, целлобиоза, лактоза, мальтоза - определяются после кислотного гидролиза; определение крахмала и некоторых других полисахаридов можно проводить после слабого кислотного гидролиза. Ход работы. Для экстракции растворимых углеводов взять навеску 0.1- 5+0.0001 г воздушно-сухого растительного материала. Перенести в стакан емкостью 100 мл и залить 50 мл дистиллированной воды. Содержимое стакана тщательно перемешать стеклянной лапочкой и поставить в водяную баню. Если материал не содержит крахмапа, то экстракцию углеводов ведут в течение 30 мин при 70°С. При наличии крахмала (зерно, клубни) экстракцию ведут при 40 - 50°С в течение 1 часа. После экстракции углеводов провести в растворе осаждение белков. Полного осаждения белков для определения углеводов не требуется, но необходимо, чтобы раствор не содержал опалисцируюших компонентов. Для этого при анализе зерна и зеленых частей растений в стакан с экстрактом углеводов прилить 0.7 мл 10 %- го уксуснокислого свинца, при анализе корнеклубнеплодов - 0.3 - 0.4 мл 10%-го уксуснокислого свинца, тщательно перемешать и оставить на 20 мин. для созревания осадка. Профильтровать раствор через сухой фильтр средней плотности в мерную колбу на 100 мл, можно фильтровать в колбы на 200 мл, если ожидается высокое содержание углеводов.

Определение моносахаридов.

Холостое определение проводят одновременно. В стакан на 100 мл приливают 50 мл дистиллированной воды, добавляют в него 0.7 мл уксуснокислого свинца. Содержимое стакана переносят в мерную колбу на 100 мл, доводят до метки. Из колбы берут 3 мл раствора в пробирку, прибавляют 3 мл пикриновой кислоты и 3 мл 20%-го раствора соды, перемешивают, выдерживают 30 мин в кипящей водяной бане. Охлаждают и переносят в мерную колбу на 50 мл.

Раствор, полученный таким образом, используют как раствор сравнения при колор им етрировани и. Расчет.

Содержание моносахаридов

где: С - количество глюкозы по графику, мг; Р - разведение (100/3); Н - навеска воздушно-сухого материала, г. Определение суммы сахаров. В сухие пробирки микропипеткой взять по 1 мл фильтрата и прибавить 0.5 мл 10 %-го раствора НС1. Поставить штативы в кипящую водяную баню на 5 мин. для гидролиза дисахаров. После гидролиза содержимое пробирок охладить, прибавить 5 мл 20 %-го раствора соды для нейтрализации соляной кислоты.

Добавить в пробирку 3 мп пикриновой кислоты, перемешать, прилить 3 мл 20 %-го раствора соды, тщательно перемешать.

Сумма сахаров рассчитывается по формуле приведенной

выше.

Количество дисахаров определяется по разнице: дисахара % = (% сахаров -% моносахаров) • 0.95 (0.95 - коэффициент пересчета глюкозы в дисахара). Приготовление шкалы стандартных растворов

1 г просушенной в течении 2 часов при температуре 60-70° С глюкозы растворяем в 1 л дистиллированной воды. Для построения графика набирают в пробирки 0.2; 0.4; 0.6; 0.8; 1.0; 1.2; 1.4; 1.6; 1.8; 2.0; 2.2; 2.4; 2.6 мл стандартного раствора, доводят до 3 мл водой и далее поступают так же, как и в случае определения моносахаридов. При построении графика и при определении углеводов сравнение ведут по раствору, содержащему все реактивы, прибавляемые к 3 мл воды. type="1"> Приготовление реактивов. Насыщенный раствор пикриновой кислоты: 20-30 г пикриновой кислоты заливают примерно 500 мл воды. Тщательно перемешивают в течение 5-10 мин. Для работы из этого объема отфильтровывают необходимое количество надосадочной жидкости, а в исходный раствор периодически доливают воды до тех пор, пока на дне есть осадок. Раствор в склянке из темного стекла может храниться неопределенно долго. 20 %-ный раствор соды (NajCO}). После растворения соды раствор необходимо профильтровать. 200 г соды растворяют в 800 мл дистиллированной воды.

3.10 %-ный раствор ПС/. 236.8 мл конц. НС/ (плотность - 1.19) вливают в 1 л мерную колбу, предварительно налив туда 500 мл воды, доводят до метки.