Турбидиметрический метод с сульфасалициловой кислотой.  

Реактивы: 3%-ный раствор сульфасалициловой кислоты;

0,9%-ный раствор натрия хлорида;

калибровочный 1 %-ный раствор альбумина.

Оборудование: фотоэлектроколориметр.

Ход определения. В2 пробирки (опытная и холостая пробы) вносят по 1,25 мл профильтрованной мочи, приливают к опытной пробе до 5 мл 3%-ного раствора сульфасалициловой кислоты, к холостой пробе — до 5 мл 0,9%-ного раствора натрия хлорида, перемешивают. Через 5 мин измеряют экстинкцию опытной пробы на ФЭКе при длине волны 590—650 нм (оранжевый или красный светофильтр) против холостой пробы в кювете с толщиной слоя 5 мм.

Расчет ведут по калибровочному графику с концентрацией белка в растворах от 0,05 до 1,0 г/л. Приготовление растворов калибровочного графика приведено в таблице 44.

Калибровочная кривая линейна до концентрации 1 г/л.

Концентрацию белка в моче можно определять биуретовым методом (см. Исследование крови).

Клиническое значение. Различают протеинурию прере- нальную, связанную с усиленным распадом белка тканей (паралитическая миоглобинурия), выраженным гемолизом (гемоспориди- озные болезни, отравления гемолитическими ядами); ренальную, обусловленную патологией почек, которая разделяется на клубочковую и канальцевую; постренальную, связанную с патологией мочевыводящих путей.

Появление в моче большого количества белка обусловлено прежде всего повышением фильтрации белков через клубочковый капиллярный фильтр, а также снижением их канальцевой реабсорбции. Протеинурия, связанная с нарушением клубочковой проницаемости (клубочковая протеинурия), наблюдается при большинстве заболеваний почек — первичных и вторичных гломерулонефритах, вторичном амилоидозе почек, диабетическом гломерулосклерозе, тромбозе почечных вен, атеросклеротическом нефросклерозе. Временная, коротко протекающая протеинурия наблюдается при лихорадочных и острых токсических поражениях почек.

Длительная протеинурия характерна для хронического гломеру- лонефрита, вторичного амилоидоза почек; может наблюдаться месяцами и годами.

Функциональная протеинурия наблюдается при беременности, большой физической нагрузке, перегревании, переохлаждении, дегидратации, стрессе. Она связана с влиянием этих факторов на почечную гемодинамику, в результате чего повышается проницаемость гломерулярных капилляров. Она исчезает после устранения причин, ее вызывающих. Канальцевая протеинурия — результат нарушения процессов реабсорбции белков первичной мочи (ультрафильтрата). Она характерна для хронических интерстициальных нефритов, вызванных отравлением солями свинца, ртути, острой почечной недостаточностью.

Смешанная протеинурия обусловлена сочетанием гломерулярных и тубулярных механизмов, имеющих место при гломеруло- нефритах, диабетической нефропатии, пиелонефрите и вторичном амилоидозе почек.

Инфраренальная (секреторная) протеинурия обусловлена повышенной секрецией разных белков клетками тубулярного эпителия, а также слизистой оболочкой и железами мочеполовых органов, наблюдаемой при пиелонефрите, интерстициальном нефрите, простатите.

Обнаружение билирубина. Для обнаружения билирубина в моче используют пробы Фуше, Розина, Готфрида, полоски Билуген-тест и др. Образцы утренней мочи оберегают от действия прямого солнечного света. Обнаружение билирубина в моче в большинстве проб основано на его превращении под действием окислителя в зеленый биливирдин или другие соединения определенного цвета.

Проба Фуше. Принцип. Метод основан на окислении билирубина железа хлоридом в биливирдин и появлении зеленова- то-синего или голубоватого окрашивания.

Реактивы: 15%-ный раствор бария хлорида;

реактив Фуше. 25 г трихлоруксусной кислоты растворяют в • 100 мл дистиллированной воды и приливают 10 мл 10%-ного раствора хлорного железа (РеС1з).

Ход определения. К 10—12 мл мочи прибавляют 5 мл 15%-ного раствора бария хлорида, смешивают, фильтруют. На вынутый из воронки и расправленный на сухой фильтровальной бумаге или в чашке Петри фильтр наносят 2—3 капли реактива Фуше. Появление на фильтре сине-зеленых пятен свидетельствует о присутствии билирубина. Если реакция мочи щелочная, то необходимо подкислить ее несколькими каплями уксусной кислоты.

Проба Розина. Реактив: 1%-ный спиртовый раствор йода.

Ход определения. В пробирку наливают 4—5 мл мочи и осторожно по стенкам пробирки наслаивают раствор йода. Появление на границе между жидкостями зеленого кольца свидетельствует о наличии билирубина.

Проба Готфрида. Принцип. Связанный с глюкороновой кислотой билирубин при соединении с диазотированной сульфаниловой кислотой (диазобензосульфоновая кислота) дает розовую окраску.

Реактивы: 10%-ный раствор хлорида бария;

диазореактив: а) диазораствор I: 5 г сульфаниловой кислоты растворяют в небольшом количестве воды, прибавляют 15 мл концентрированной НС1 и доливают до 1000 мл дистиллированной водой; б) диазораствор II: 0,5%-ный раствор натрия нитрата. Непосредственно перед определением смешивают 10 мл диазореактива I и 0,25 мл диазореактива И;

96%-ный спирт этиловый;

6%-ный раствор двузамещенного натрия фосфата.

Ход определения. К 10 мл мочи, подкисленной несколькими каплями уксусной кислоты, прибавляют 5 мл 10%-ного раствора бария хлорида, перемешивают, фильтруют через бумажный фильтр. Фильтр раскладывают на дне чашки Петри и на осадок капают 1—2 капли свежеприготовленной диазосмеси, 4 капли спирта и 1 каплю двузамещенного натрия фосфата. При наличии в моче билирубина появляется красно-фиолетовая окраска.

Примечание. Мешают обнаружению билирубина высокие концентрации в моче уробилиноидов, индикана, нитритов, аскорбиновой кислоты, фенотиозина.