Определение диеновых конъюгатов и кетодиенов полиненасы- щениых жирных кислот в крови.
Реактивы: экстрагирующая смесь: гептан-изопропиловый спирт 1 : 1 (об/об.); спирт этиловый 96%-ный.
Оборудование: спектрофотометр; водяная баня; центрифуга с охлаждением; баллон с газообразным азотом; пробирки химические и центрифужные; пипетки на 1,5 и 10 мл.
Ход определения.
В центрифужные пробирки вносят по 1 мл гепаринизированной крови, приливают по 7 мл экстрагирующей смеси, закрывают корковыми (не резиновыми!) Пробками и интенсивно встряхивают в течение 2 мин. Затем пробирки (пробы) центрифугируют в течение 15 мин при 3000 мин-1 при температуре 0—4 °С. 2 мл верхнего гептанового слоя переносят в чистые химические пробирки и выпаривают в токе азота на водяной бане при 40—50 °С. К сухому остатку пробы приливают 3 мл этилового спирта, пробирки интенсивно встряхивают, оставляют на 10—15 мин при комнатной температуре и перед измерением еще раз встряхивают.Относительную плотность опытных проб измеряют на спектрофотометре при 232 и 273 нм против контрольной пробы (этилового спирта) в кюветах с ходом луча 10 мм.
В этих же пробах определяют содержание общих липидов суль- фованилиновым методом.
Расчет содержания диеновых конъюгатов (ДК) и кетодиенов (КД) ведут по формуле
^ _ ^4232(4273) ьдк(кд) ^ gt;
где Сдк(вд) — содержание диеновых (кетодиеновых) конъюгатов в единицах оптическом плотности на 1 мг липидов; ?4232(4273) — оптическая плотность пробы для диеновых (кетодиеновых) конъюгатов; А — содержание общих липидов в пробе.
Примечание. Гепаринизированную кровь исследуют не позднее
- ч после взятия и хранении при температуре не выше 10 °С.
Клиническое значение.
Повышение концентрации в крови (плазме и эритроцитах) диеновых конъюгатов (ДК) и кетодиенов (КД) полиненасыщенных жирных кислот свидетельствует об усилении в организме процессов ПОЛ, вызываемых как эндогенными [острые и хронические воспаления, сепсис, снижение антиокислительной активности (АОА) липидов и естественных антиоксидантов в организме — витаминов Е, С, К, каротина, фосфолипидов, селена и др.], так и экзогенными (лучевое поражение, эмоциональные, болевые и технологические стрессы и др.) факторами. Постепенное снижение концентраций ДК и КД до оптимального уровня свидетельствует об успешном лечении и благоприятном прогнозе. Резкое падение (ниже среднего уровня) концентраций указанных продуктов ПОЛ, как правило, свидетельствует о глубоких необратимых деструктивных процессах биологических мембран. Концентрация ДК у животных колеблется от 0,100 до 0,300 ед. опт. пл/мг липидов.Источники: 11, 57.
Еще по теме Определение диеновых конъюгатов и кетодиенов полиненасы- щениых жирных кислот в крови. :
- Определение содержания неэтерифицированных жирных кислот (НЭЖК) в сыворотке (плазме) крови (по Лауреллу и Тибблингу).
- ОПРЕДЕЛЕНИЕ ОБЩЕГО КОЛИЧЕСТВА ЛЕТУЧИХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ (ЛЖК)
- Определение сиаловых кислот в сыворотке крови по реакции с резорцином.
- Определение мочевой кислоты в сыворотке крови по реакции с фосфорно-вольфрамовым реактивом.
- Определение мочевой кислоты в сыворотке крови животных с использованием заводского набора реактивов.
- ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЛЕТУЧИХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ
- Определение витамина Е в сыворотке крови (см. с. 195). Определение церулоплазмина в сыворотке крови.
- Определение молочной кислоты по реакции с параоксидифени- лом.
- Определение пировиноградной кислоты по модифицированному методу Фреедмана и Хаугена.
- Определение растворимых углеводов фотометрически с пикриновой кислотой