ХРОМАТОГРАФИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ЛЕТУЧИХ ЖИРНЫХ КИСЛОТ  

Реактивы: стандарты летучих жирных кислот (уксусной, про- пионовой, масляной, изомасляной, валериановой и др.) со степенью чистоты не менее 99 %;

сорбент хромосорб-101.

Оборудование: разовый хроматограф «Хром-5»; генератор водорода «Водень-1»; компрессор; баллон с азотом; стеклянная колонка длиной 1,5 м, заполненная хромосорбом-101; самописец; рулон бумаги с миллиметровыми отметками; карандаш для записи показателей; микрошприц; лабораторные весы ВЛР-200; навески не менее 2-го класса точности.

Ход определения. Перед исследованием готовят стандарты: смесь ЛЖК в таком соотношении, чтобы оно приблизительно соответствовало средним показателям содержания летучих жирных кислот, которые находятся в содержимом рубца. Прибор «Хром-5» перед работой прогревают в течение 1,5—2 ч. Показатель готовности прибора к работе — четкая нулевая линия на самописце. Исходные данные прибора: скорость движения азота 40 мл/мин (определяют пеноизмерителем); скорость движения водорода 40 мл/мин, воздуха — 400 мл/мин. Рабочая температура камеры введения исследуемой пробы составляет 170 °С, камеры с колонкой и детектором 210 °С.

Порядок включения и работы прибора. Открывают баллон с азотом. Включают «Хром-5», генератор водорода и компрессор. После этого выставляют на приборе необходимые параметры работы: скорость движения азота, водорода и воздуха. Выставляют температурный режим: камера введения пробы 170 “С, камера с колонкой и детектором 210 °С, поджигают водород и включают кнопку «Нагрев».

На протяжении всей работы прибора необходимо контролировать температурный режим.

Подсчет полученных результатов. С помощью миллиметровой линейки рассчитывают площадь каждой кислоты в отдельно взятой пробе и в стандартной смеси. Для этого измеряют высоту пика и умножают на ширину пика на середине высоты. Полученные результаты по каждой кислоте суммируют и подсчитывают общую площадь каждой пробы. Например, высота пика уксусной кислоты 40 мм, ширина на середине высоты 6 мм, площадь в этом случае составит 40 • 6 — 240 мм . Таким образом подсчитывают площадь всех имеющихся кислот.

Расчет. Сумма площадей всех кислот 100 %, а площадь отдельно взятой кислоты х. После проведения необходимых математических расчетов получают процентное содержание отдельно взятой кислоты. Например, общая площадь всех кислот 560 мм2, а площадь уксусной кислоты 240 мм2. Составляем пропорцию:

560 мм2 — 100%

240 мм2 — х,

Умножив полученный результат на поправочный коэффициент для уксусной кислоты, который равен 1,125, узнаем относительное содержание уксусной кислоты: 42,85 • 1,125 = 48,2 %.

Определение поправочных коэффициентов. С помощью микрошприца вводят 3 мкл стандарта в камеру ввода и записывают показатели на самописце. Подсчитывают полученные результаты и определяют поправочный коэффициент.

Например, в стандартной смеси содержится уксусной кислоты 60%, пропионовой 20, масляной 15, изовалериановой 2 и валериановой кислоты 3 %. Проведя подсчеты хроматограмм, получают следующие показатели: уксусной кислоты 52 %, пропионовой 18, масляной 23, изовалериановой 2,9 и валериановой кислоты 4,1 %.

Подсчитывают поправочный коэффициент для уксусной кислоты (60 : 52 = 1,153) и таким же способом для всех других кислот: пропионовой (20 : 18 = 1,1), масляной (15 : 23 = 0,652), изовалериановой (2 : 2,3 = 0,689) и валериановой (3 : 3,1 = 9,731).

Примечание.

Клиническое значение. Конечный продукт ферментации углеводов — ЛЖК. Среди них содержание уксусной, пропионовой и масляной кислот составляет около 95 %. Остальное количество приходится на валериановую, изовалериановую, изомасля- ную и капроновую кислоты. По данным А. В. Чуба (2002), в содержимом рубца клинически здоровых высокопродуктивных коров содержится 45—55 % (52 ± 1,3) уксусной, 20—30 (27 ± 1,12) пропионовой, 15—20% (22 ± 1,33) масляной, 2,0 ± 0,4 % изовалериановой и 2,8 ± 0,6 % валериановой кислот. В. В. Влизло (1998) выявлял в содержимом рубца незначительное количество изомасля- ной кислоты.

Увеличение в рационе жвачных клетчатки приводит к возрастанию синтеза уксусной кислоты, крахмала — пропионовой, сахара — молочной, затем пропионовой кислоты. Уменьшается концентрация уксусной кислоты при низком содержании сена в рационе, а также у больных кетозом, гепатодистрофией коров и при смещении сычуга. Относительно увеличивается количество масляной кислоты при кетозе (в 1,4 раза), поэтому соотношение между про- пионовой и масляной кислотами уменьшается у больных до 1,04 ± ± 0,08 по сравнению с 1,37 ± 0,09 у здоровых (А. В. Чуб, 2002).

При вторичной дистонии рубца увеличивается содержание изо- валериановой и валериановой кислот. Особенно возрастает их концентрация при смещении сычуга (4,2 ± 0,1 и 7,2 ± 0,9 % соответственно). Вероятно, это объясняется тем, что при снижении в рационе клетчатки бактерии рубца потребуют для своего роста добавки валериановой, изовалериановой и изомасляной кислот (В. Г. Янович, JI. И. Сологуб, 2000).