Определение молочной кислоты по реакции с параоксидифени- лом. 

Реактивы: концентрированная серная кислота, выдерживающая пробу Саваля (х. ч., плотность 1,84), от ее качества зависит возможность выполнения анализа, иногда качество кислоты можно улучшить, нагревая ее и по каплям добавляя в нагретую кислоту пероксид водорода;

смесь из 3 г меди сульфата (СаБ04 • 5НгО, ч. д. а., х. ч.) и 9 мл орфтофосфорной кислоты (Н3РО4, ч. д. а., х. ч.), через некоторое время должен образоваться гомогенный раствор;

5. %-ный раствор параоксидифенила (С6Н5С6Н4ОН) в диме- тилформамиде. Растворяют 15 мг параоксидифенила в 1 мл диме- тилформамиде;

5. %-ная трихлоруксусная кислота (0,3 н.).

Ход определения. 0,02 мл крови вносят в 1 мл 5 %-ной трихлоруксусной кислоты. Через несколько минут центрифугируют 15 мин при 3000 мин *. К 0,2 мл центрифугата прибавляют 0,1 мл смеси медного купороса и ортофосфорной (фосфорной) кислоты и 2,5 мл концентрированной серной кислоты. Энергично встряхивают и точно через 3 мин ставят ровно на 3 мин в кипящую водяную баню, затем еще 3 мин охлаждают в ледяной воде. Добавляют 1 каплю раствора параоксидифенила в диметилформамиде, капля должна сразу попасть в центр пробирки. Встряхивают и оставляют стоять 10 мин при комнатной температуре. После этого нагревают на кипящей водяной бане 1,5 мин, охлаждают в воде и фотометрируют при длине волны 565 нм.

Одновременно ставят холостой опыт, в котором вместо безбел- кового фильтрата применяют 5%-ный раствор трихлоруксусной кислоты, и калибровочные пробы, в которые берут растворы ТХУ, содержащие в 0,2 мл 2—20 нмоль молочной кислоты или молочнокислого лития. Их обрабатывают так же, как опытные.

Источник: 43.

Примечание. Метод определения молочной кислоты по Баркеру и Саммерсону изложен в книге «Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии»: Справочник / И. П. Кондрахин, Н. В. Курилов, А. Г. Малахов и др. — М.: Агропромиздат, 1985. — С. 88—90.

Клиническое значение. Молочная кислота образуется при распаде гликогена и глюкозы, ее источником также служит пирувит. В норме содержание молочной кислоты у животных колеблется в пределах 0,295—0,760 ммоль/л (см. приложение 5).

Повышение содержания молочной кислоты (гиперлактатемия) отмечается при ацидозе рубца, поедании животными большого количества свеклы, зеленой массы кукурузы молочно-восковой спелости, зерновых злаковых, содержащих много крахмала. Бывает при миоглобинурии, диабете, эндемической остеодистрофии бычков, интенсивном их выращивании и откорме, когда болезнь сопровождается ацидозом рубца и всасыванием в кровь большого количества молочной кислоты. Повышение концентрации лактата в крови может быть обусловлено поражением печени, кислородной недостаточностью (гипоксия), чрезмерной физической нагрузкой, местным нарушением кровообращения.