ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

При парентеральной вакцинации КРС противоящурной вакциной уровень местного иммунитета в большей степени, чем гуморального, зависит от концентрации иммунизирующего антигена вируса и количества адъюванта в прививной дозе. Ревакцинация животных даже меньшим, чем прививаемая доза, объемом вакцины способствует усилению местного иммунитета, в то время как уровень ВНА остается неизменным.

У животных-реконвалесцентов в отличие от привитых инактивированной вакциной отсутствуют АТ к вирусиндуцированной полимеразе.

Иммунитет обьино длится около года и даже дольше. Он еще сохраняется после исчезновения ВНА и зависит от свойств инфицирующего штамма вируса, а также от реактивности животного и всегда направлен против гомологичного типа вируса.

Доказана возможность пассивной передачи поствакцинального клеточного иммунитета. Показано участие цитотоксических лимфоцитов в ранние сроки формирования противо- ящурного иммунитета. Клеточный иммунитет связан с функционированием лимфоцитов, рецепторного аппарата и соединения их с антигеном. За клеточный иммунитет отвечают Т- клетки (50, 58, 73, 74).

В Российской Федерации и странах СНГ для специфической профилактики ящура применяют гидроокисьалюминиевую вакцину, которую готовят из инактивированного вируса, культивируемого в переживающей ткани слизистой оболочки языка не иммунного к ящуру КРС (метод Френкеля), а также из вируса, полученного в суспензионной культуре клеток ВНК-21/13. Вакцины содержат инактивированный формалином вирус и сообщают иммунитет взрослым животным до 4 мес.

Вирус в производственных условиях концентрируют ультрафильтрацией, полиэтиленг- ликолем или полиэтиленоксидом, что дает возможность повысить концентрацию антигена в десятки и сотни раз (44).

Первая инактивированная вакцина была предложена Вальдманом и Кобе в 1938 г. В дальнейшем эта вакцина была модифицирована в различных вариантах (81). В настоящее время для крупного и мелкого рогатого скота, как правило, применяют сорбированные, а для свиней - эмульгированные вакцины. Трехвалентная ГОА-формолвакцина из ВЯ типа А №550, О №1618 и С №564 авирулентна, безвредна, стерильна и отличается выраженной иммуногенной активностью (74, 75, 76).

Выраженный иммунитет у привитых животных наступает на 10-14-й день и достигает максимума через 3-4 нед. Иммунитет у взрослых животных длится 6-12 мес. КРС обьино ревакцинируют 1 раз, свиней - 2 раза в год. ВНА в сыворотке крови появляются уже к концу 1-й нед, достигают максимального титра в 3-5 нед, затем их концентрация постепенно снижается. При систематической иммунизации взрослых животных против ящура инактивированными моновакцинами у них поддерживается стабильный уровень АТ не ниже 4,5 log2 на протяжении 6 мес. В течение последующих 3 мес идет медленное снижение тнтров АТ до 3,5-

3,7 log2 к концу 6-го мес, что может служить основанием для уточнения схемы вакцинации молодняка этого возраста (56).

Колостральный иммунитет хорошо выражен, однако телята, не получавшие молозиво, не имеют сывороточных АТ, несмотря на то, что коровы были иммунизированы. После приема молозива титр АТ в сыворотке телят больше, чем в сыворотке матерей. АТ у телят сохраняются в течение 5 мес (39), хотя пассивная защита продолжается до 3-х мес (16). Продолжительность колострального иммунитета также зависит от типа вируса. Материнские АТ могут мешать образованию иммунитета у потомства.

Механизм протективного иммунитета к ВЯ in vivo отличается от механизма нейтрализации вируса in vitro (38). Образование ВНА у животных-реконвалесцентов вызывают только полные вирионы, (МОБ-частицы), а не их компоненты. На этом основании об иммуно- генности инактивированных вакцин можно судить по концентрации 140S антигена (32).

Опубликован ряд сообщений по усовершенствованию препаратов для профилактики ящура. Разработаны методы оценки производственных штаммов ВЯ для инактивированных вакцин. Примененный принцип оценки штаммов и метод их отбора рекомендован авторами для штаммов любого назначения при условии корректировки критериев оценки и коэффициентов их значимости (21).

Замена традиционных моновалентных инактивированных вакцин на би- и трехвалентные вакцины, приготовленные из очищенного концентрированного и инактивированного вируса типов А22, 01 и Азия1, формирует у привитых животных напряженный и продолжительный иммунитет более 12 мес после однократной прививки, в т.

Универсальная эмульсионная вакцина создает достаточно, напряженный иммунитет у супоросных свиноматок и обеспечивает их защиту от экспериментального ящура в первые дни после опороса при двукратной прививке. Поросята, родившиеся от 2-кратио привитых свиноматок, в большинстве своем не заболевали и оставались живы при контакте с зараженными матками. Введение таким поросятам инактивированной вакцины в 3-дневном возрасте сопровождается накоплением активных противоящурных АТ (20).

Молодняк, родившийся от иммунных животных, получает пассивно антитела с молозивом. Молодняк, полученный от многократно вакцинированных коров, имеет достаточно напряженный иммунитет в течение 4 мес.

В настоящее время вакцинология переживает этап своего бурного развития. Так, для борьбы с ящуром на смену традиционным инактивированным вакцинам, отличающимся высокой профилактической эффективностью при их систематическом и массовом применении, разрабатываются новые препараты. Главная проблема при этом состоит в том, что современная технология изготовления вакцин не обеспечивает иммунного ответа адекватного по напряженности с иммунным ответом при естественной ящурной инфекции (9).

Быстрая защита от ящура супоросных и подсосных свиноматок обеспечивается препаратом из культурального ВЯ, инактивированного димером ЭИ, очищенного и концентрированного ПЭГ. Стерильный антиген вводили животным внутримышечно за ухом. Контрольное заражение проводили свиным афтозным вирусом в дозе 104 ИД50/0,2 мл под слизистую языка или венчик (59).

В настоящее время в качестве инактивантов используют ацетилэтиленимин (АЭИ) и бинарный этиленимин (Б ЭИ, диэтиленимин), поскольку они в отличие от формалина позволяют готовить более авирулентные вакцины, а АЭИ менее токсичен, чем БЭИ.

Кроме обычно применяемых методов инактивации ВЯ формальдегидом, предложен оригинальный метод инактивации его собственной эндонуклеазой. Для этого вирусную суспензию смешивают с 0,5М и 0,1М трис-буферным р-ром, pH смеси доводят до 8,5, после чего ее фильтруют через мембранный фильтр (0,45 мкм) и инкубируют при температуре 26 или 37°С.

Для свиней применяют инактивированные вакцины. Естественный иммунодефицит у свиней удалось преодолеть благодаря применению масляных адъювантов. Напряженный и продолжительный иммунитет у свиней наступал после 2-кратной вакцинации. Свиней прививают начиная с 2-мес возраста и ревакцинируют спустя 4 мес. Колостральные АТ подавляют вакцинальный иммунитет, особенно если поросят прививают в первые 30 дн жизни. Вакцины с масляным адъювантом создавали и у телят более выраженный и продолжительный иммунитет, чем ГОА-вакцина (46, 47, 47а). Оказалась возможной одновременная вакцинация КРС против ящура и чумы. Если инактивированную поливалентную ГОА-вакцину против ящура и живую - против чумы вводить одновременно подкожно в область шеи с разных сторон, то образуется такой же иммунитет, как и при раздельной вакцинации против каждого заболевания (36). Живые вакцины против ящура не разработаны. Многочисленные попытки в этой области не дали положительных результатов. Аттенуированные штаммы, как правило, оказывались или слабоиммуногенными или же реверсибельньми.

Разработан метод оценки активности противоящурной вакцины по уровню ВНА. Установлена зависимость от активности вакцины уровня ВНА которая выражена графически. На основании этой зависимости составлены вспомогательные таблицы, позволяющие по установленному уровню ВНА определить иммуногенную активность вакцины (57, 57а, 58).

Генно-инженерные и синтетические вакцины. Сконструирован гибридный белок, содержащий две АГ детерминанты структурного белка VP1 ВЯ, встроенный белок pho Е, экспонированный на наружной мембране E. coli. Иммунизация морских свинок таким белком индуцировала высокий уровень антител и полностью защищала их от вирулентного вируса (24). Эти белки инициируют образование ВНА и обеспечивают защиту животных (15).

Находит реальное воплощение идея создания синтетической противоящурной вакцины.

Об этом свидетельствуют результаты поисков последних лет. Так, синтезирован пептид VP1-(142-158)-MAP (Multiple Antigen Peptide Sistem) состоящий из 2-х частей - лизиновой матрицы, включающей три уровня остатков лизина , следующих друг за другом, и 8 фрагментов последовательности аминокислот VP1-(142-158) ВЯ А22550. Введение морским свинкам 20 мкг пептида с адъювантом Фрейнда защищало их от заболевания ящуром при заражении гомологичным вирусом в дозе 500 ИД50. Овец иммунизировали 1-кратно в дозе 1 мг. Прн 2-кратном введении пептида КРС в дозе 1,5 мг с неполным адъювантом на основе синтетического масла индуцировался высокий уровень ВНА. Как после первой (титр ВНА 5,3-11,0 log2 НД50/0Л мл), так и после второй иммунизации (титр ВНА 10,2-11,0 log2 НДго/одМл) заражение гомологичным вирусом не вызывало заболевания животных (6).

Изучены АГ свойства более 40 синтетических пептидов и на основании проведенных исследований для разработки противоящурной вакцины рекомендованы пептиды - 142-155 и 136-159. Разработаны критерии выбора синтетических антигенов-аналогов аминокислотных последовательностей различных фрагментов VP1 ВЯ А22, предложена схема оценки их иммуногенных свойств (10). Описано конструирование рекомбинантных плазмид, в которых единичные или тандемные, АГ детерминанты ВЯ соединены с С-концевым фрагментом фактора некроза опухолей человека (69).

Оценка поствакцинального иммунитета. Максимальные титры (в PH) поствакцинальных АТ обычно отмечаются на 28-й день после вакцинации; их уровень не зависит от разведения вакцины (в диапазоне 1:1-1:16) и прямо коррелирует со специфическим протек- тнвным иммунитетом (35).

На модели морских свинок показано, что нммуногенность противоящурной вакцины может быть оценена в реакции сероредукции бляшек без контрольного заражения животных. Эта оценка позволяет определить необходимую дозу испытуемой вакцины для обеспечения гарантированного иммунитета (3).

Показана коррелятивная связь между первичным иммунным ответом на клеточном уровне (тест бласттрансформации) и степенью развития гуморальной иммунной реакции (тесты иммуноферментной сероредукции) (13). Реакция гиперчувствительности замедленного типа позволяет изучить in vivo развитие противоящурного иммунитета в ранний период после вакцинации (68). Показано, что у взрослого КРС в зоне высокого радиоактивного заражения после иммунизации концентрированной противоящурной вакциной образуются специфические АТ, однако иммунитет при этом менее напряженный и более короткий по сравнению с необлученными животными (4).

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

І.Архипов Н.И. Патологоанат. диагн. вир. бол. жив. М, Колос,1984. 2.Быкова Л.А. н др. Матер, н. конф. ВНИВВИМ, Покров,1992 :177. 2а.Глобенко Л.А. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, Владимир,1995. З.Гневашев В.М. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :73. 4.ДороговцевА.А. и др. Мат. н. конф. ВНИВВИМ, 1995, 4, 2 :357. 5.Дудников Е.К. и др. Мат. н. конф.ВНИВВИМ,1992 :186. б.Луговский A.A. н др. Биоорганическая химия, 1992,18, 7 :942. 7.Мшценко В.А. и др. Вопр. вирусол., 1991, 36,4 :341. 8.Мшценко В.А. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, 1995 :152. 9.Михалшпин В.В. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ 1995 :217. Ю.Мудрак Н.С. Автореф. канд. днсс., ВНИИЗЖ, 1993. 11 .Перевозчиков В.А. н др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :3. 12.Пономарев А.П. и др. Автореф. кавд. дисс., ВНИИВВиМ, Покров, 1994. ІЗ.Рахмангулов М.Т. н др. Матер, н. конф., Покров, 1992 :182. 14.Рахмангулов МТ. и др. Сб. н. тр., ВНИИЗЖ, 1995 .11. 15.Сатина Т.А и др. Сб. н. тр., ВНИИЗЖ, 1995 :52. 16.Сергеев В.А. Вирусные вакцины, Киев, Урожай.1993. 17.Сюрин В.Н. н др. Метод, лаб. диагн., М., Агропромиздат, 1986. 18.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. жив., М. ВО Агропромиздат, 1991. Х9.Сюрин В.Н. и др. Часта, вет. вирусол. М, Колос, 1979. 20.Толокнов АС. н др. Труды ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :69. 21.Черняев Ю.А и др. Сб. н. тр., ВНИИЗЖ, 1995 .236. 22.Щажко Ж.А. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, 1995 :94. 23.Шажко ЖА идр. Сб. н. труд. ВНИИЗЖ, 1995 :100. 24.Akterberg М. et.al. Vaccine, 1990, 8, 5 :438. 25.Armstroiig R.M et.al. J Virol Meth, 1991, 34, 2 :181. 26.Bauer K.et.al. Berl munch tierar Wscfar, 1985, 98 :247. 27.Baxt et.al. J Virol, 1984, 51 -.298. 28.BlackL.et.al. Res in Veter Sc, 1986, 40 :303. 29.Cahon D. Me. Arch of Virol, 1981, 69 :23. 29a.Cheung A. et.al. J Virol, 1983, 48 :451. 30.Choudhuru B. et.al. Med J anim Health, 1990, 29, 2 :175. 31.Crowtter J.R. et.al. Session Bresta, Staly, 1984 :26. 31.Giubman M.J. et.al. Virology, 1987,158 :133. 32.Fleming P. J Gen Virol, 1971, 13 :385. 33. Feifelstock D. et.al. J Gen Virol, 1992, 73, 12 :3307. 34.Franco R. et.al. Int J Biochem, 1992, 24, 2 :325. 34a.Gebaner F. et.al. J Virol, 1988, 62 :20. 35.Gugin L.et.al. Lucr Inst cer vet si bioprepr Posteuer, 1991, 19 :13. 36.Hedger R.S. et.al. Trop Anim Heath and Prod, 1986, 18 :21. 37.Hamblin C. et.al. Veter Microb, 1984, 9, 5 :435. 38.Kitsm J.D. et.al. Virology, 1990, 179 :26. 38a.Krebs et.al. Arch Virol, 1991, 120 :135. 39.Lauemandie B. et.al. Buoffise int epizoot, 1975, 83 :337. 40.Mateim M. et.al. Virology, 1988, 167: 113. 41.Mongeot H. et.al. Bull Office int epizoot, 1979, 91 :3. 42.Meyer RF. et.al. J Virol Meth, 1991, 34, 2 :161. 42a.Muihammer D. Biotechnol., Progr., 1990, 6, 5 :391. 43.0nldridge E. et.al. J Biol Standardiz, 1984,12 :4. 44.0ostrum J. et.al. J Virol, 1985, 56, 439. 45.Paranjape S. ?tal. Curr Sd, 1987, 56 :23. 46.Parry N. etal. Nature, 1990, 347, 6293, 569. 47,Raul C.O. Bull Off int epizoot, 1978, 89 :1015. 47a.Rawlands D et.al. Nature, 1983, 306,59,44 :694. 48.Saiz J.C. et.al. Virus Res, 1989,13 :45. 49.Smitsaart E.N. etal. Vet hnmun and Immunp?thoL, 1990, 26 :251. 50.Stave J.W. et.al. J Cell Biochem, 1986, 10D :229. 51.Suryanarayanaav. J Indian Inst Sd, 1993, 1 :151. 52.Curry Stechen etal. J Med Biol, 1992, 228, 4 :1263. 53.Пономарев А.П. и др. Тез. докл Всерос. н.-пр, конф., Владимир, 1995 -.137. 54.Пономарев АП. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995. 55.Рахмантгулов МТ. и др. Сб. н. тр. ВНИИЗЖ, 1995 :77. 56.Байбиков Т.З. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф., Владимир, 1995 :112. 57.Салажов Е Л. и др. Там же, 1995 .115. 57а.Салажов Е.Л. и др. Труды ВГНКИ, 1990 :49. 58.Толокнов А.С. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :118. 59.Улупов Н.Д. и др. Там же. 1995 :135. 60.Крученков Б.А. и др. -«-:111. 61.Сухарев О.И и др.-«-: 161. 6 2. Щербаков AB. н др. -«- :3. 63.Van Lier op М. J.C. etal. J Virol, 1995, 69, 7 :4511. бЗ.Кругликов Б.А н др. Тез. докл н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, Владимир, 1995 :186. 64.Ломакина Н.Ф. и др. Там же. :29. 65.Щербаков AB. и др. Там же. :28. бб.Захаров В.М. и др. Там же. :231. 67.Байбиков Т.З. и др. Там же. :160. 68.Толокнов АС. и др. Там же. :114. 69.Андреев В.Г. и др. Веста. РАСХН 1995, 3 :55. 70.Мамков Н.С. и др. Авт. св. 1743027, Опубл 27.11.95. 71.Кругликов Б.А. и др. Ветеринария.,1991, 10 :38. 72,Кругликов Б.А. и др. Ветеринария., 1993 :56. 73.Самуйленко А.Я. и др. Ветеринария, 1982, 1 :40. 74.Самуйленко А.Я. Ветеринария, 1983, 5 :46. 75.Самуйленко АЯ. Ветеринария, 1987, 3 :52. 76.Самуйленко АЯ. и др. Тез. докл конф. ВНИЯИ, 1986 :108. 77.Бурдов АН. и др. Ящур. М. 1990. 78.Бурдов А.Н. и др. Ящур. Владимир. Часть 1 :5. 79.Mever R. Et.al. J Virol Meth, 1991,34, 2:161. 80.Loeffler F., Frosch P., Ublemhut P. Dtsdimed Wschr. 1898. 81.Frenkel H.S., BoiE. Bull Off Int Epiz, 1947,28, 1-2 -.155. 82.Бойко AA. и др. Матер, к 100-лет. биопромышл., Курск, 1996. 83.Бойко АА и др. Ветеринария, 1994. 5 :11. 84.Дрыгин В.В. и др. Ветеринария., 1995, 4 :31. 85.Drygin V.V. et.al. Europ Commiss FMD, ViennaAustria, Rome, 1995, :45; 61.