ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

Применение живых вакцин. Иммунитет при КЧС обусловлен ВНА.

С 70-х гг. в арсенале средств специфической профилактики КЧС первое место занимают живые вакцины из шт. К и ЛК-ВНИИВВиМ. Лучшая из отечественных - вакцина ЛК- ВНИИВВиМ, разработанная проф. В.И.Поповым и соавт. (102), получена на основе шт. К ВКЧС, который репродуцируется в гетерологичной системе - культуре клеток тестикулярной ткани ягнят. Препарат обладает высокой иммуногенностью и полностью лишен вирусных контаминантов, патогенных для свиней. Вакцина не уступает по активности лучшим мировым аналогам - вирус вакцине GPE (Япония) и Phiverval (Франция), но и превосходит их по универсальности применения и потенциальной безвредности. Все характеристики вирус- вакцины JIK-ВНИИВВиМ соответствуют требованиям Европейской фармакопеи и общепризнанным мировым стандартам (35).

С помощью живой вирус-вакцины ЛК-ВНИИВВиМ можно создавать специфическую защиту от заболевания и гибели 100% вакцинированных свиней уже через 4В ч после 1- кратного внутримышечного введения ее в дозе 6,0 lg ИмДзо/гол.

На основе монАТ разработана тест-система, позволяющая дифференцировать вакцинные и полевые штаммы ВКЧС, и родственный вирус диареи КРС (81).

Шт. К обладает слабой реактогенностью для свиней всех возрастов, включая новорожденных поросят и супоросных свиноматок, он не передается неиммунным животным и при совместном содержании с иммунными, и не реверсирует при пассировании на свиньях (6-12 пассажей). Он также не персистирует у привитых свиней, а после экспериментального заражения последних вирулентный вирус не выделяется из организма вакцинированных животных. После 1-кратной прививки свиней старше 3-мес возраста иммунитет наступает через 3- 5

дн. В бывшем СССР в течение многих лет успешно применяли 2 сухие живые вакцины из лапинизированного шт. К, адаптированного к культуре клеток. Вакцину ЛК-ВНИИВВиМ готовили из вируса, размноженного в субкультуре клеток тестикулярной ткани ягнят (102).

Китайский штамм ВКЧС (шт. Porto Allegro) адаптирован к клеткам RK13 (почки кролика) и уже после 10 пассажей утратил исходную патогенность, сохранив высокую иммунизирующую активность (39, 54, 56). Недавно сотрудниками ВНИИВВиМ был выделен полевой изолят ВКЧС №. 187Л, обладающий низкой вирулентностью для 3-4-мес поросят, но идентичный шт. Ши-Мынь (35). В Болгарии получена лиофилизированная живая бивалентная вакцина против КЧС и болезни Ауески. Препарат оказался безвредным для поросят и овец, стимулирует стойкий иммунитет к обеим инфекциям.

Во ВНИИВВиМ разработан и испытан с положительным эффектом способ пероральной вакцинации новорожденных поросят против КЧС. Единственным и обязательным условием является вакцинация тотчас после рождения до контакта с инфицированной средой и до 1-го приема молозива. Поросят допускают к соскам матки не ранее, чем через 30 мин после вакцинации последнего поросенка. В силу строения плаценты (сендесмохориальный) ни один класс АТ, циркулирующих в организме свиноматки, не передается плоду. Поросята рождаются от иммунной свиноматки абсолютно интактными, практически стерильными и иммунологически компетентными. Вакцинировать подсосных поросят, уже получивших молозиво иммунных свиноматок, бессмысленно, так как при наличии колостральных АТ поствакци- нальный иммунитет у поросят не формируется. Вынужденная вакцинация поросят отъемного возраста чревата риском провокации инфекции, так как нейтрализуя остатки материнских АТ, вакцина лишает поросят возможности защищаться в инфицированной среде. Следовательно, вакцинировать поросят до отъема еще рано, а после отъема уже поздно. Поэтому чрезвычайно важно поросенка вакцинировать перорально до сосания, т.е. практически тотчас после рождения и до контакта его с инфицированной средой, упреждая таким образом внедрение патогенного вируса (38).

При пероральном введении вакцинный вирус проникает в организм через естественные ворота инфекции, где организм биологически подготовлен к встрече с агентом, благодаря мощным лимфоидным образованиям глоточного кольца, которые сразу же запускают иммунный процесс. Кроме того, вакцинный вирус, блокируя чувствительные рецепторы, подчиняя метаболизм клетки и ее энергетический потенциал регулирующему влиянию генома вакцинного вируса, лишает полевой вирус обязательных условий, необходимых для проникновения и репродукции. Срабатывает механизм упреждения. Таким образом, ни последующее инфицирование поросят полевым вирусом, ни массированное поступление с молозивом АТ не способны прервать или повлиять на формирование полноценного (с секреторным компонентом) иммунитета против КЧС. В.Г.Витин и соавт. установили, что 1-кратной пероральной вакцинации новорожденных поросят живой вирус-вакциной (ЛК-ВНИИВВиМ) достаточно, чтобы защитить их от заболевания в течение всего технологического цикла выращивания вплоть до сдачи на мясокомбинат (3, 55).

До настоящего времени ограничено применение рекомбинантных вакцин, полученных на основе вирусов осповакцины и псевдобешенства (94).

Получена живая вакцина для пероральной иммунизации диких кабанов против КЧС на основе шт. ЛК-К с активностью 3,0-3,8 І? БОЕ50/О,1мл. Вакцина высушена методом контактного обезвоживания, обладает хорошей сыпучестью, легко смешивается с кормом. В опыте использовано 1300 голов диких кабанов, которым дважды с интервалом в 3 дня скармливали смесь, состоящую из 2 кг зерна и 18 г вакцины в расчете на одно животное. Через месяц 69%, а через 3 мес 80-90% исследованных животных имели напряженный иммунитет (титр ВНА 1:8), который сохранялся на удовлетворительном уровне не менее 3 мес т.е. по эффективности пероральный метод не уступал парентеральному (95).

Применение инактивированных вакцин. В прошлые годы профилактика КЧС основывалась на применении кристаллвиолетвакцины, которая, несмотря на ряд недостатков, в свое время играла положительную роль в санации хозяйств от данной инфекции. С 1967 г. этот препарат в хозяйствах Российской Федерации и стран СНГ не применяется, хотя мысли

о возможности получения инактивированного и абсолютно безвредного препарата продолжают поддерживаться. Так, например, Р.Д.Устаров (25) и В.И.Жестерев и соавт. (6а) показали, что ВКЧС, выращенный любыми технологическими приемами, надежно инактивировался сернокислой медью (3-5 мМ) при 37°С в течение 98 ч с сохранением иммуногенных свойств. Использование других инактивантов (глутаральдегид, димер этиленимина, тритон Х-100) не обеспечивало получения иммуногенных препаратов в нативном виде (макси мальная доза АГ). Автором разработана инактивированная вакцина против КЧС, содержащая культуральный материал вирулентного шт. Ши-Мынь, сернокислую медь в качестве инактиванта и гидроокись алюминия. Вакцина создавала 100%-ную защиту привитых жи вотных от контрольного заражения вирулентным вирусом (1000-10000 ЛД50), в то время как аналогичные препараты из шт. ЛК обеспечивали, в общей сложности, 30%-ную защиту. Во Франции разработана инактивированная вакцина против КЧС. Культуральный вирус инактивировали глутаральдегидом (0,01-0,001%-ным при 25-35°С в течение 4-7 ч), а затем эмульгировали в масляном адъюванте. Во ВНИТИБП были получены опытные образцы инактивированной вакцины против КЧС из шт. Гудзон, выращенного в культурах клеток РК-15, ПЭКр и первичной культуре клеток почки поросенка. Вирус инактивировали этиле- нимином и эмульгировали с разными масляными адъювантами. Вакцина обеспечивала 75- 100%-ную защиту в экспериментальных условиях при контрольном заражении /10000 ЛД50 (18,19). Имеется патент на вакцину, содержащую полипептид вируса КЧС (15).

О генноинженерной вакцине против КЧС. В 1991 г. было осуществлено встраивание генов гликопротеинов ВКЧС в вектор (вирус осповакцины). Полученный рекомбинантный вирус оказался высокоиммуногенным (70). На поверхности клеток зараженных ВКЧС обнаружены гликопротеины Е0 и Е2. Устойчивыми к контрольному заражению оказались только те животные, которые были привиты рекомбинантным вирусом вакцины, экспрессирующим Е0 и(или) Е2 (51). В настоящее время получен рекомбинатный аттенуированный вирус БА, экспрессирующий %р55 (Е2) вируса КЧС. Он вызывал у свиней выраженный иммунитет против обоих вирусов. Иммунизация свиней белками Е0 и Е2, полученными в оспенно- бакуловирусных системах, также защищала свиней от летальной инфекции вирусом КЧС (48а, 48Ь, 70а, 76а).

Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Показана возможность оценки поствакцинального иммунитета по тем же тестам. Например, при помощи РДСК обнаруживали АТ в 45% случаев в сыворотке свиней, иммунизированных вакциной АСВ (на 6-7-й день после вакцинации). При иммунизации живыми вакцинами ВНА в крови появляются на 7-10-й день, достигая пика (1:128 и выше) к концу месяца, и сохраняются на высоком уровне в течение всего периода невосприимчивости. Вакцинацию можно считать успешной, если титр АТ в PH флюоресцирующих микробляшек, спустя 2-5 мес после иммунизации, составляет 1:20 и выше. Серологическое обследование поголовья свиней, вакцинированных против КЧС, позволяет оценивать эффективность проведенной вакцинации.

Оценка напряженности поствакцинального иммунитета проводится по титру АТ. Так титр АТ 1:32 и выше свидетельствует о напряженном иммунитете. У молодняка до 2-3-мес иммунитет ненапряженный и титр АТ в РНГА составлял 1:4-1:8. Через 20 дн после вакцинации поросят вирус-вакциной титр ВНА постепенно повышался до максимального уровня к 60-му дню, клеточной реакции не отмечено. В 3-х группах поросят, привитых штаммами, вызывающими хроническую чуму, ВНА не обнаружено, клеточный иммунный ответ наблюдали у 4 животных из 9. Наивысший клеточный иммунный ответ был у поросят, иммунизированных инактивированным вирусом. Несмотря на то, что иммунный ответ у поросят в разных подопытных группах был неодинаковым, после контрольного заражения вирулентным вирусом выжили все животные.

У поросят, отнятых в 7-дн возрасте от иммунных животных, пассивная защита может продолжаться свыше 2 мес. При этом уровень иммунитета будет зависеть от времени, прошедшего между вакцинацией свиноматки и родами. Так, поросята, рожденные от свиноматок, вакцинированных за 10 мес до родов, могут быть вакцинированы не ранее возраста 5 нед. Бустер-вакцинация поросят этой группы в возрасте 6 мес вызывала подъем титров АТ и устойчивость к вирусу продолжительностью до 4 лет. В ряде опытов поросят, рожденных от свиноматок, вакцинированных за 1 мес до случки, иммунизировали в возрасте 5, 7 и 9 нед. Несмотря на то, что перед вакцинацией животные имели эквивалентные титры пассивно приобретенных АТ, в последующем уровень иммунитета зависел от времени вакцинации: чем позже вакцинированы поросята, тем выше титры АТ. Наилучшие результаты получены в группе поросят, вакцинированных в возрасте 9 нед.

Установлено, что при титре ВНА в PH флюоресцирующих бляшек 1:4 и выше животные устойчивы к внутримышечному заражению эпизоотическим штаммом в дозе 104 ЛД50, при титре 1:2 - переболевают и независимо от исхода представляют опасность как вирусоноси- тели. Однако у значительного числа вакцинированных животных ВНА к ВКЧС отсутствуют. Среди поросят 30-дн возраста АТ в титре 1:16 были обнаружены лишь у 30%, у остальных их выявить не удалось. В группах доращивания серопозитивиых животных было 16%, в группах откорма через 140-200 дн после вакцинации серопозитивиые животные составляли 50%. Вакцинация поросят от невакцинированных свиноматок в возрасте 9-90 дн вызывала у них иммунный ответ, который характеризовался появлением в сыворотке крови ВНА, а также защитой от прямого заражения вирулентным шт. ВКЧС в полевых условиях на 12-18- й день после заражения. Высокий уровень АТ в сыворотке был обнаружен у поросят через 30-40 дн после вакцинации (20). Отмечено, что материнские АТ не ингибируют вакцинный вирус, благодаря чему у них и формируется достаточно напряженный вакцинальный иммунитет. Все контрольные поросята после прямого заражения пали от чумы. Следовательно, материнские АТ не обеспечивают достаточно надежную защиту против вирулентных штаммов ВКЧС. Продолжительность поствакцинального иммунитета у поросят от не привитых против чумы свиноматок продолжительнее, чем у поросят от вакцинированных свиноматок. В связи с этим поросят от вакцинированных свиноматок предпочтительнее вакцинировать в конце 1-го мес опороса, однако при неблагополучных эпизоотических ситуациях поросят можно вакцинировать после 2-нед возраста и через месяц ревакцинировать.

Вакцинация поросят, обладающих колостральным пассивным иммунитетом, вызывала появление у них различного иммунного состояния, которое зависело от количества колост- ральных АТ на момент вакцинации. Обнаружено, что иммунизация поросят аттенуированным шт. Тиверваль эффективна тогда, когда нейтрализующая активность сыворотки ниже уровня колостральной нейтрализующей активности. Это так назывемый порог эффективности вакцинации, который наступает у поросят в возрасте 30-35 дн. Авторы считают, что вакцинация поросят от иммунных свиноматок в возрасте 30-35 дн надежно защищает их от заражения вирулентным ВКЧС (20, 21). Период полураспада материнских АТ у поросят от свиноматок, иммунизированных за 9 и 5 мес или за 85 дн до опороса, составлял 10 дн; АТ у поросят обладали высокой или средней авидностью к АГ вируса и оказывали умеренный эффект на иммунный ответ у поросят после активной иммунизации. У поросят от свиноматок, иммунизированных за 55 дн до опороса, период полураспада молозивных АТ составлял 6

дн; АТ обладали слабой активностью и в значительной мере подавляли образование АТ после активной иммунизации у поросят. У поросят от свиноматок, вакцинированных до су- поросности, пассивный иммунитет сохранялся до 2 мес, а у поросят от свиноматок, вакцинированных за 10 мес до беременности, пассивный иммунитет сохранялся до 5 мес. Вакцинация в этот срок защищала более 80% поросят. Если поросят ревакцинировали в возрасте 9 нед, то прочный иммунитет у них поддерживался в течение 4 лет.

В последние годы КЧС в хозяйствах, где проводится ежегодная плановая профилактическая иммунизация животных, часто проявляется по типу персистирующей инфекции, что значительно затрудняет постановку диагноза, оценку эпизоотического статуса свинопоголо- вья и своевременность проведения противоэпизоотических мероприятий.

Для контроля эффективности профилактической иммунизации против КЧС И.Ф. Вишняков и соавт. (4,5) рекомендовали проведение серологического обследования свинопоголо- вья в РНФБ с использованием культуры клеток РК-15.

К серотерапии классической чумы свиней. При лечении поросят гипериммунными сыворотками получали разный исход в зависимости от стадии болезни в момент серотерапии. Так, лечение свиней через 8 сут после заражения не защищает их от гибели, а лечение в более ранние сроки приводит к переводу острого течения в хроническое и позволяет животным выживать в течение месяца после гибели контрольных животных. Однако у таких свиней выявляется постоянная виремия - титр вируса в лейкоцитах достигал 104ККИД 5о/млн. кл., а введение иммуномодулятора больньм животным приводило к быстрому летальному исходу в течение 1-2 сут. Все ингибиторы воспалительной реакции вполне способны ликвидировать симптомы болезни, но не ликвидировать персистенцию вируса в клетках- мишенях - макрофагах. В то же время все активаторы воспалительной реакции (ЛПС, адъюванты, некоторые медиаторы и т.п.) усиливают симптомы болезни и ускоряют гибель свиней от КЧС (сверх острое течение). Разработан способ получения гипериммунных сывороток к ВКЧС, позволяющий получать высокоактивные моноспецифические сыворотки крови с титрами ВНА 1:16-1:64 и более (36).

Химиотерапия КЧС. В.И.Чермашенцевым и соавт. (32) впервые установили эффективность нетрадиционной химиотерапии. Применение больньм животным комплекса препаратов, обладающих противовоспалительным и антибактериальным действием (фарма . комплекс Анти-КЧС) не позднее 7 сут после заражения вирулентным ВКЧС в дозе 20000 ЛД50/животное приводило в 100% случаев к клиническому выздоровлению подсвинков в течение 2-4 сут после начала лечения. После выживания поросят в критический период (7-11 сут после инфекции) уровень постинфекционных ВНА у них достигал на 14-е сут защитного титра (4 1о&) и обеспечивал напряженный и продолжительный иммунитет. Однако следует иметь в виду, что переболевшие подсвинки представляют определенную опасность как потенциальные вирусоносители и должны выбраковываться. Стоимость полного курса терапии летально инфицированных свиней указывает на вполне реальную экономическую целесообразность данного мероприятия в индивидуальном порядке.

Предложена новая концепция патогенеза КЧС, на основе которой разработаны способы обострения хронической болезни и основы патогенетической терапии летально инфицированных животных. Установлено, что использование активаторов воспалительной реакции позволяет переводит хроничекое течение болезни в острое, что может иметь диагностическое значение при КЧС. Разработан эффективный фармакомплекс “Анти-КЧС”, позволяющий добиваться лечебного эффекта в 100% случаев при применении не позднее, чем за 4 сут до гибели животных (32).

Таким образом, наиболее важными для практики по проблеме КЧС вопросами, требующими немедленной научной проработки, являются: 1) изучение иммунного статуса животных в свинохозяйствах различных типов; 2) изыскание препаратов для коррекции и стимуляции иммунного ответа у поросят на АГ КЧС в период доращивания; 3) изучение молекулярной биологии возбудителя; 4) совершенствование вирус-вакцины в направлении повышения и иммуногенной активности и сокращения сроков формирования защиты у животных, а также групповых методов иммунизации диких свиней; 5) разработка высокоэффективных инактивированных вакцин на основе культурального вируса и генноинженерных вакцин; 6) разработка высокоспецифических методов лабораторной диагностики болезни, выявления вирусоносителей и оценка напряженности поствакцинального иммунитета (16).