ДИАГНОСТИКА

Идентификация вируса

РСК. Специфический АГ обнаруживали в печени. При широком серологическом обследовании оказалось, что от 70% до 100% клинически здоровых щенков были серопозитивными в РСК с этим АГ, что указывает на широкое распространение ИГСоб среди взрослых собак.

РДП. Простота постановки реакции, высокая чувствительность и строгая специфичность позволяют поставить диагноз в течение 24-48 ч, а также установить АГ родство различных штаммов. Реакция может быть применена для лабораторной диагностики в случаях остро протекающей болезни, поскольку преципитирующий АГ обнаруживается у больных животных в различных органах и тканях на 2-3-й день после заражения. Для постановки РДП требуется тестирующая система, состоящая из АГ вируса ИГСоб, специфической гипериммунной сыворотки против вирусного гепатита, контрольного положительного АГ, контрольного отрицательного АГ. В качестве испытуемого АГ используют 10%-ную суспензию печени больных животных. Специфическую гипериммунную сыворотку получают путем иммунизации собак или используют иммунную сыворотку реконвалесцентов. Реакция проходит при температуре 37°С в течение 48-72 ч. Сыворотку в лунки агара добавляют дробно, через каадые 12 ч. Реакция считается положительной, если между испытуемым АГ и гипериммунной сывороткой в агаре появляется полоска молочного цвета, по интенсивности выявления равная известному АГ и гипериммунной контрольной сыворотке. Меязду нормальной сывороткой и АГ полосок не должно быть. Нечетко выраженные (расплывчатые) полоски преципитата расцениваются как сомнительная реакция, а образование зон вокруг лунок является неспецифической реакцией.

В нашей стране широко используют набор для реакции диффузионной преципитации в ПААГ при диагностике ВГС (10).

ИФ. С успехом используют для обнаружения вирусного АГ в культуре клеток, срезах, мазках, отпечатках из различного патологического материала. Метод ИФ применяют как в прямом, так и непрямом вариантах.

При диагностике ИГСоб применяется метод неспецифической ИФ. С этой целью на нативный препарат под покровное стекло наносят каплю акридина оранжевого. Препарат немедленно просматривают, внутриядерные включения окрашиваются на фоне зелено-желтых ядер и оранжево-красиой протоплазмы.

ИФА. С помощью ИФА удавалось обнаружить АГ вируса чумы и гепатита собак в цитоплазме и ядрах клеток.

Гистологические исследования. Метод основан на выявлении специфических телец- включений. При вскрытии животных отдельно из разных долей печени берут несколько кусочков толщиной не более 1 см, фиксируют их в 10%-ном нейтральном формалине не менее 2-3 дн. После фиксации из кусочков вырезают пластинки толщиной 4-5 мм, тщательно отмывают проточной водой и на замораживающем микротоме делают гистологические срезы толщиной 6-7 мкм. Окрашивают их гематоксилин-эозином по общепринятой методике. Сформированные тельца Рубарта располагаются чаще всего в центре печеночных клеток и имеют размер 0,5-0,75 мкм. В начале они оксифильные, рыхлые с четко очерченными краями. Чаще всего включения встречаются в печёночных клетках Купфера, в эндотелии сосудов, ретикулярных клетках всех органов, особенно селезёнки, почек и лимфоузлов. В большинстве случаев внутриядерные тельца могут быть эозинофильными или окрашенными в нейтральный цвет. Форма их круглая и овальная. Структура телец гомогенная. Между включением и ядерной оболочкой, как правило, имеется оптически пустая зона, в которой у отдельных клеток хорошо видны тонкие хроматинные тяжи. Наиболее характерный морфологический признак ИГСоб - крупные внутриядерные включения в печёночных купферов- ских клетках. При аденовирозе выявляют ацидофильные аморфные внутриядерные включения в эпителиальных клетках бронхов и альвеолярных клетках (1,11).

Идентификация вируса

Проводят в культуре клеток почек телят с позитивной сывороткой против ИГС.

PH в культуре клеток щенков. ВНА в разведении до 1:20 у песцов появлялись на 7-й дн и через 2 нед выявлялись у 50% зверей, достигая максимума (до 1:640) через 3 нед после заражения.

РЗГА. Используют как надёжный метод серодиагностики ИГСоб. Для этого вначале ставят РГА с эритроцитами петуха, но более постоянно с эритроцитами белых крыс и человека группы 0. Для этой реакции более подходят эритроциты морской свинки.

РСК. Для её постановки не требуется высокая степень концентрации и чистоты АГ препаратов. Однако около 20% сывороток крови собак обладают антикомплементарными свойствами и непригодны для исследования в РСК.

РДП. В качестве заведомо положительного АГ используют суспензию печени щенков лисиц, экспериментально заражённых вирусом ИГСоб. С 1965 г. используют культуральные АГ, которые концентрируют различными методами. РДП - единственная реакция, которая широко используется в лабораторной диагностике ИГСоб (для идентификации вируса и АТ).

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Основана на обнаружении специфических АТ в РДП. С успехом используется для выявления перенесённой ранее болезни, так как АТ у переболевших собак могут сохранятся несколько лет.