ДИАГНОСТИКА

В отличии от возбудителя классической чумы вирус АЧС имеет многообразие в антигенном и иммунологическом отношениях, ГАд и негемадсорбирующие штаммы, что значительно усложняет постановку диагноза. Возбудители АЧС и КЧС вариабельны и по вирулентности: в природе выделены штаммы вируса, вызывающие различные формы и течения болезни - сверхострое, острое, подострое, хроническое бессимптомное с летальностью от 10 до 100%; встречаются и природноослабленные, авирулентные штаммы. Поэтому дифференцировать АЧС на основании клинико-эпизоотологических данных и патоморфологических изменений чрезвычайно трудно, необходимо прибегать к лабораторному анализу (6,14, 75).

Методы лабораторной диагностики. Их можно разделить на 2 группы; первая включает методы выделения вируса и выявления АГ, вторая - методы выявления АТ (73, 75).

Экспресс-метод обнаружения вируса. Во Франции разработан метод определения вируса АЧС в культурах клеток и полевых пробах с помощью ДНК-зонда, меченного биотином. Данный метод позволяет обнаружить негемадсорбирующие штаммы вируса АЧС, небольшие количества его в материалах и убитые или поврежденные вирионы Полученный зонд в 10 раз чувствительнее 32Р-меченого зонда (36).

В процессе усовершенствования метода гибридизационного зонда, предложен не менее быстрый и биологически безопасный метод диагностики АЧС с помощью ПЦР с фрагментом длиной 740 тыс. п.о., полученным из консервативной части генома вируса. Идентификация амплифицированного фрагмента проводится с помощью гнездных праймеров или при использовании биотинилированных олигонуклеотидных зондов. Метод превосходит выделение вируса и ГАд (39). В нашей стране применена ПЦР для обнаружения последовательностей ДНК, специфичных для вируса АЧС. Показана возможность амплификации индивидуальных фрагментов ДНК вируса АЧС различных серотипов, а также повышение чувствительности индикации этого вируса с использованием гнездовой ПЦР и гибридизацией продуктов ПЦР с нерадиоактивным ДНК-зондом (54).

Индикация и идентификация вируса. При первичном возникновении АЧС лабораторная диагностика основана на выделении вируса в культуре клеток костного мозга или лейкоцитов крови свиней, его идентификации в реакции Г Ад или прямой ИФ и определения типовой принадлежности вируса в РЗГАд. Для выявления вируса АЧС непосредственно в жидкой пробе предложено использовать сенсибилизированные эритроциты, иммуносорбент сефарозу и суспензию клеток костного мозга для специфического концентрирования АГ вируса АЧС из объектов ветнадзора с последующим его определением 125g АТ (20а).

Выделение и индикация вируса в культурах клеток. Наиболее достоверным и надежным лабораторным методом диагностики АЧС - выделение вируса в клеточных культурах и идентификации его в РГАд. Биопроба длительна по времени и проводится в учреждениях, где имеются для этого ветеринарно-санитарные условия для работы с особо опасными экзотическими болезнями. Наиболее достоверный и надежный лабораторный метод - РГ Ад. Она состоит в том, что зараженные вирусом АЧС мононуклеарные фагоциты в ККМС (культура клеток мозга свиней) или КЛС (культура лейкоцитов свиней) приобретают способность адсорбировать на себя эритроциты крови свииьи, образуя при этом скопления в виде ягоды малины. Для получения ККМС и КЛС используют клинически здоровых подсвинков 2-4-мес возраста массой 25-30 кг из хозяйств, благополучных по инфекционным болезням. Лейкоциты получают из гепаринизированной крови подсвинков.

О размножении вируса судят по РГ Ад. Для заражения используют 2-3-сут культуру лейкоцитов или клеток костного мозга свиней. Вирус АЧС характеризуется рядом уникальных особенностей. Во-первых, популяция его гетерогенна; во-вторых, некоторые штаммы вируса способны вызывать атипичную “рыхлую” Г Ад, в отличие от типичной “многослойной” Г Ад (13). Некоторые варианты АЧС не обладают Г Ад свойствами, а вызывают только ЦПД, которое проявляется лизисом зараженных клеток. При выделении негемадсорбирующих изолятов вируса идентификацию проводят в ИФ или ставят биопробы.

Тест ауто-ГАд. Метод постановки ауто-ГАд основывается на выявлении ГАд клеток, образовавшихся в крови больного животного. Данный способ по чувствительности сравним с описанной выше РГАд в ККМС или КЛС. Однако его применение позволяет получить предварительный результат в течение 1-3 ч после отбора пробы крови без убоя животного. Реакция считается положительной, если в культуре клеток, зараженной одним из материалов, обнаружена четкая Г Ад, при отсутствии её в контроле. Результат выделения вируса отрицательный при отсутствии ГАд и ЦПД в культурах клеток в течение 3-х пассажей.

РЗГАд. Предназначена для определения типовой принадлежности Г Ад штаммов вируса АЧС и основана на способности специфических сывороток задерживать ГАд в культурах клеток КМС и ЛС, зараженных гомологичным типом вируса АЧС. РЗГАд ставят со стандартными специфическими сыворотками серотипов 1, 2, 3 и 4, полученными, на соответствующие эталонные штаммы вируса АЧС (“Лиссабон-57” -1-й тип, “Конго-73” - 2-ой тип, “Мозамбик-78” - 3-й тип, ”Португалия-бО” - 4-й тип). Материал эталонных штаммов и ти- пируемых изолятов используют с активностью 104-106 ГАЕ50/МЛ, а типоспецифические сыворотки - не менее 1:50. Зараженные и контрольные культуры клеток инкубируют при 37- 38°С. Учет результатов реакции проводят ежедневно в течение 2 сут при отсутствии неспецифической дегенерации в контроле культур клеток и сывороток, наличии ГАд в контроле.

РДП. Успешно применяется для обнаружения специфического АГ в органах павших свиней (печень, селезенка), а также для выявления специфических ПА в сыворотках и тканях хронически больных животных. РДП - относительно низкочувствительная. Она проявляется с тканями, полученными через 24 ч и после подъема температуры, перед появлением других симптомов болезни. Поскольку специфичность РДП была доказана и при европейской чуме свиней, ее предложили для дифференциации двух видов чумы свиней. Для этого используют сыворотку свиней, иммунизированных аттенуированным вариантом вируса, которая дает преципитацию с материалами от свиней и с детритом инфицированных клеток.

По отдельным отзывам, РДП при АЧС специфична и удобна в полевых условиях при остром течении болезни. В Испании сравнивали РДП с другими методами. Установили, что РДП удобна, но её чувствительность ниже, чем других. Поэтому реакцию рекомендуют для предварительной диагностики. Чувствительность РДП при выявлении вирусного АГ 50%.

Реакцию считают положительной, если между лунками со специфическим и испытуемым компонентами (АГ и сыворотками) через 12-24 ч появляются одна или две линии преципитации. Они должны быть тонкими и иметь четкие границы. При отсутствии их между указанными компонентами реакцию считают отрицательной.

ИФ. Применяют для выявления специфического АГ АЧС в мазках-отпечатках, приготовленных из проб органов больных или павших свиней, а также в культуре клеток, инфицированных вируссодержащим материалом (6).

Испытуемые материалы: пробы органов и тканей от больных и павших свиней; культура JTC или КМС, инфицированная испытуемым материалом; флюоресцирующие lg специфические по ТУ 4620-81. Контрольные материалы: пробы органов и ткаией интактных свиней; интактная культура ЛС или КМС. При сомнительных результатах дальнейшие исследования с помощью ИФ проводят в культуре ЛС и КМС, инокулированной подозреваемым в заражении вирусом АЧС материалом, через 24-72 ч после его внесения.

Модифицированный прямой метод РСК чувствителен при обнаружении антигена вируса АЧС в испытуемых тканях, взятых от свиней в период острой болезни (через день после повышения температуры). При помощи модифицированной РСК устанавливают лишь сывороточные АТ (в случаях серологической оценки постинфекционного и поствакцинального иммунитетов). КС АГ получают методом экстракции ткани смесью ацетона и эфира.

Биопроба. Ставят с разрешения Департамента ветеринарии. При первичном подозрении на АЧС её постановка обязательна. Биопробу ставят по одному из двух вариантов.

Первый вариант. Четырех из восьми подсвинков 2-4-мес возраста, иммунных к классической чуме, заражают внутримышечно вирусом КЧС, а 4-х - испытуемым материалом (кровь, суспензия органов). У всех подопытных животных ежедневно измеряют температуру. Если зараженные животные заболеют и погибнут (обычно в течение 10 дн), а все инфицированные вирусом КЧС останутся здоровыми, в испытуемом материале содержится вирус АЧС. Специфичность гибели зараженных животных должна быть подтверждена характерными для АЧС клиническими симптомами и патологоанатомическими изменениями, а также выделением от павших животных вируса и его идентификацией. Если после заражения останутся здоровыми все 8 подсвинков испытуемый материал содержит вирус КЧС.

Второй вариант. Восемь подсвинков 2-4-мес возраста массой от 25 до 40 кг (4 из них должны быть иммунны к КЧС, а 4 - не иммунны) заражают внутримышечно суспензией из испытуемого материала (или кровью). Если иммунизированные против КЧС животные останутся здоровыми, а не иммунизированные погибнут, значит, в испытуемом материале был вирус КЧС. Если же погибнут все 8 подсвинков - в испытуемом материале был вирус АЧС. В последнем случае специфичность гибели подсвинков от АЧС должна быть подтверждена, как указано выше. В случае опасности появления АЧС на территории страны диагноз на КЧС и АЧС ставят одновременно. Поэтому второй вариант иммунологической пробы предпочтительнее, так как позволяет диагностировать обе болезни одновременно. Биопроба методологически не сложна, но в санитарном отношении должна быть проведена с соблюдением мер, абсолютно исключающих вынос инфекции.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Определение АТ к вирусу АЧС имеет большое эпизоотологическое значение ввиду длительной персистенции вируса в организме свиией без проявления клинических признаков болезни. Такие животные- вирусоносители могут явиться источником инфекции. По индикации АТ можно судить о количестве хронических и субклинических случаев болезни.

НИФ. Она может с успехом применяться в лабораторной диагностике для определения специфических АТ к вирусу АЧС. Данный метод оказался ценным при установлении эпизоотической ситуации. С его помощью установлены АТ у больных свиней-хроников в 100% и у свиней-вирусоносителей в 74,5% случаев. В качестве АГ для непрямого метода ИФ используют 4-5-дн КЛС, зараженные вирусом АЧС. Через 24-48 ч после заражения культуры фиксируют в ацетоне, после чего наслаивают на 60 мин исследуемые сыворотки и еще на 30 мин ангисвиную конъюгированную сыворотку. При положительной реакции в цитоплазме наблюдают ярко-зеленое свечение вирусных включений. Для контроля используют зараженные клеточные культуры, обработанные сывороткой здоровых свиней.

В 1976 г. был разработан новый метод, основанный на выявлении специфических АТ в экстрактах тканей погибших животных. Эти АТ в НИФ были идентифицированы как IgG. АГ служила культура клеток, выращенная на покровных стеклах и зараженная адаптированным вирусом. Анти-АЧС-IgG обнаруживали в различных тканях (легких, селезенке, лимфоузлах, печени, почках, поджелудочной железе, мозге и коже) через 12-14 дн после инокуляции. Лучшие результаты получали с пробами селезенки и легких: в зависимости от клинической стадии титры АТ колебались в пределах от 1:5 до 1:5000. Исследование тканевых АТ погибших свиней - более чувствительный метод, чем обнаружение вирусного АГ. Метод прост, исследование выполняется за 2-3 ч. По данным испанских ученых у свиней, при хроническом течении болезни АТ выявляют в 100%, у свиней-вирусоносителей - в 74,5% случаев. Положительный результат указывает на АЧС, и дальнейших исследований не проводят. Метод непрямой ИФ используют при хроническом и латентном течении АЧС для выявления АТ в пробах сывороток крови или суспензий из органов.

Испытуемые материалы: суспензии из проб органов (20%) от павших, вынужденно убитых или подозреваемых в заражении АЧС и вакцинированных животных; сыворотки крови хронически больных, переболевших и вакцинированных животных.

ИФА. ИФА (ELISA) используют для обнаружения специфических АТ в сыворотках крови больных АЧС (4, 6, 54, 55, 76). Набор препаратов для непрямого метода ИФА включает: антивидовой (антисвиной) пероксидазный конъюгат (ангисвиные lg сыворотки осла, меченые пероксидазой); специфическая сыворотка свиньи, содержащая АТ к вирусу АЧС; контрольная (нормальная) сыворотка свиньи; специфический культуральный АГ для серологической диагностики АЧС; контрольный АГ из незараженной культуры клеток. Поли- стироловые пластины для ИФА сенсибилизируют специфическим и нормальным АГ, взятыми в рабочих разведениях, в течение ночи при комнатной температуре во влажной камере в 0,5 М карбонатно-бикарбонатном буферном р-ре. Учет результатов проводят через 20 мин после проявления окраски на сканирующем спектрофотометре при длине волн 492 нм или визуально. Для визуального учета необходимо остановить реакцию, внося в лунки по 25 мкл 2,5 М H2SO4. Реакцию учитывают по разности поглощения сыворотки в испытуемых разведениях против специфического и контрольного АГ. Результат считают положительным, если разница поглощения при разведении сыворотки 1:125 превышает 0,1.

Метод ингибирования твердофазного ИФА. Предназначен для выявления специфических к вирусу АЧС антител в сыворотке крови или суспензиях проб органов животных с низким их уровнем (1:5-1:25) в ранние сроки после вакцинации или заражения (3-5 сут). Преимущество его заключается в том, что он позволяет выявлять АТ в цельной пробе и проще в техническом исполнении, не уступая по чувствительности непрямому методу.

Инструментальный учет проводят после внесения субстрата и инкубирования пластин в темноте при комнатной температуре аналогично непрямому ИФА. Если интенсивность (оптическая плотность) окрашивания в лунках с испытуемыми пробами снижается на 50% и более по отношению к оптической плотности содержимого лунок с нормальной сывороткой, т.е. оптическая плотность содержимого лунок с исследуемой сывороткой в 2 раза и более ниже, то данная сыворотка считается положительной.

ВИЭОФ. Используют для выявления специфических АТ в сыворотках крови больных свиней при хроническом и латентном течении АЧС (4). В РФ предложен порядок и схема лабораторных исследований при первичном диагностировании АЧС (4.6). Патматериал из первичного эпизоотического очага направляют во ВНИИВВиМ. Предварительно диагноз ставят на основании экспресс-анализа поступившего материала при выявлении специфического АГ и АТ в прямой ИФ и непрямой ИФ с ответом через 3 ч с момента получения проб. Диагноз подтверждают выделением возбудителя в КЛС или КМС и биопробой на подсвинках. Затем вирус идентифицируют и типируют в РГА, ИФ и РЗГА, при положительных результатах ставят окончательный диагноз. АЧС исключают на основании отрицательных данных выявления АГ и АТ в ИФ, твердофазного ИФА и ВИЭОФ; выделения и идентификации вируса в культуре клеток в течение трех последовательных пассажей (15 сут) проб патматериала и сыворотки крови животных, подозреваемых в заражении.

Патологический материал из вторичных эпизоотических очагов АЧС исследуют в зональных специализированных лабораториях по особо опасным заразным болезням животных и во ВНИИВВиМ. Зональные специализированные лаборатории при наличии специфических АГ или АТ в исходных пробах через 2-3 ч ставят предварительный диагноз на АЧС и направляют материал во ВНИИВВиМ. Ретроспективную диагностику проводят выявлением антител в сыворотке крови свиней ВИЭОФ и твердофазным ИФА. Отсутствие их дает основание дать отрицательный результат на АЧС. Положительные данные ВИЭОФ или твердофазного ИФА подтверждает непрямой ИФ, после чего ставится диагноз на АЧС. Во ВНИИВВиМ на основании выделения, идентификации и типирования возбудителя в культурах КЛС или ККМС в РГА, ИФ и РЗХГА через 1-15 сут устанавливают окончательный диагноз на АЧС, вызванную Г Ад штаммами. Низковирулентный негемадсорбирующий вирус АЧС (летальность 30-50%) выявляют обнаружением специфических АТ в ИФ, выделением возбудителя в течение 1-3 пассажей (5-15 сут) в клетках КЛС и КМС и идентификацией АГ в ИФ. При необходимости проводят биопробу. Отрицательное заключение на АЧС во вторичных эпизоотических очагах дают по тем же критериям, что и в первичном.

Современная дифференциальная диагностика АЧС и КЧС обеспечивает проведение соответствующих противоэпизоотических мероприятий по локализации, ликвидации и предупреждению распространения в наиболее сжатые сроки. Разработка наборов препаратов для выявления АЧС и КЧС, оценка их эффективности на большом полевом материале позволили предложить схему лабораторной дифференциальной диагностики этих болезней. ИФ мазков-отпечатков, несмотря на низкую чувствительность широко применяют в зональных специализированных лабораториях при предварительной оценке материала для последующего направления в региональный центр. Исследуемым материалом для выделения вирусов АЧС и КЧС сразу же инокулируют культуры ККМС (КЛС) и РК-15. В течение 1-5 сут инкубирования культуры клеток 1-го пассажа контролируют РГА и ИФ на наличие вируса АЧС, исключая возможную неспецифическую ГАд или наличие негемадсорбирующего вируса. Для обнаружения вируса КЧС в культуре клеток РК-15 ИФ проводят ежедневно в течение 4 сут. При отрицательных результатах делают 3 пассажа с обязательной ИФ.

В случае выделения вируса АЧС его типируют в РЗГ А. Одновременно пробы исследуют на наличие специфических АТ в сыворотке и органах (20%-ная суспензия) унифицированной ИФ на оба вируса, методом ингибирования твердофазного ИФА возбудителя АЧС и PH флюоресцирующих микробляшек (РНФБ) вируса КЧС. Положительные результаты ИФ и РНФБ на КЧС оценивают в зависимости от сроков проведения вакцинации, а на АЧС - дают основание поставить окончательный диагноз.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

В патогенезе и иммуногенезе АЧС аллергические или аутоаллергические реакции играют существенную роль (15). При действии аттенуированных штаммов вируса на лимфоидные клетки происходит синтез неполноценных АТ, неспособных нейтрализовать вирус. Образуются комплексы антиген-антитело, которые концентрируются в тканях органов- мишеней, приводя к нарушению их функций и развитию аллергических и аутоиммунных процессов; наблюдают стимуляцию клеточного иммунитета - лизис инфицированных клеток сенсибилизированными лимфоцитами, выделение медиаторов клеточного иммунитета: лимфотоксина, фактора угнетения миграции бласттрансформации и др. Развитие этих процессов зависит от биологических свойств используемых штаммов и индивидуальных особенностей организма (состояние иммунной системы).

Определенную роль в патогенезе болезни играют взаимодействие вируса с эритроцитами и нарушение механизма свертывания крови (6). Влияние вируса на клетки лимфоидной системы и эритроциты характеризуется их разрушением или изменением функции, а также развитием аллергического и аутоиммунного процессов.

Переболевшие или привитые (инактивированным материалом или аттенуированным вирусом) животные имеют определенную степень устойчивости к гомологичному изоляту вируса (задержка гибели свиней), изменение выраженности клинических признаков болезни, выздоровление и полное отсутствие реакции на контрольное заражение). Отсутствие специфической защиты против изолятов, выделенных в других зонах, свидетельствует об их АГ и иммунологических различиях (19,21,28,29,31).

С. Anderson (48) наблюдал длительное носительство вируса и его приживление при повторном заражении у переболевших и привитых животных. Пассивный и колостральный иммунитет выражен слабо. АТ недостаточно нейтрализуют вирус (17). Причины слабой напряженности иммунитета, а также нейтрализующей активности АТ связывают с особенностями АГ структуры вируса (блокирование АГ липидами, конкуренция или маскировка про- тективных АГ видовыми АГ вируса или хозяина), а также с изменением функции лимфоидных клеток - нарушение взаимодействия вируса и АГ с макрофагами и кооперации последних с Т- и В-лифоцитами (28, 29). В пользу первого предположения свидетельствует слабый или измененный ответ на инактивированные АГ препараты как у чувствительных, так и у других видов животных. В условиях низкой активности АТ усиливаются реакции клеточного иммунитета, которые имеют существенное значение в блокировании инфекции, а также являются причиной развития гиперчувствительности замедленного типа, аллергических и аутоиммунных осложнений (28, 29).

Процесс защиты при АЧС представляется в виде динамического равновесия между этиологическими факторами (вирусом) и механизмами иммунной защиты. Он может быть преобладающим как в том, так и в другом направлении, это зависит от свойств применяемых шт. и состояния иммунной системы животного. Надежных профилактических препаратов против АЧС - нет. Получить инактивированные вакцины против АЧС классическими методами, используя современные методики, никому не удалось. Большинство привитых животных при контрольном заражении погибали и только незначительная часть их выживала после длительного переболевания. Результаты испытания инактивированной вакцины наводят на мысль, что основное значение в аномалии иммунитета при АЧС имеет структура АГ и их взаимодействие между собой, а не состояние иммунной системы макроорганизма.

Препараты из живого аттенуированного вируса были более эффективными, вызывая слабую поствакцинальную реакцию, они защищали от заражения гомологичным вирусом 50-90% вакцинированных животных. Однако, самые существенные недостатки живых вакцин - длительное вирусоносительство после прививки, развитие осложнений у части иммунных животных, приживление у вакцинированных животных вирулентного вируса без проявления клинических признаков болезни, что также опасно в практических условиях. Учи тывая эти недостатки поставлен под сомнение вопрос о применении живых аттенуирован- ных вакцин для ликвидации очагов болезни в сочетании с другими ветеринарносанитарными мероприятиями. Множественность иммунологических типов возбудителя и существование смешанных или измененных популяций вируса значительно ограничивают возможности использования таких препаратов. Однако имеются сведения о подборе эффективных средств для лечения больных свиней и снятия вирусоносительства, которые можно применять в сочетании с аттенуированными штаммами вируса (15, 24). В материалах совещания экспертов по АЧС Европейского экономического сообщества (1978-1987) и других сообщениях намечено развитие научных исследований, направленных на создание компонентных, химических и генно-инженерных вакцин. С этой целью изучают тонкую АГ структуру возбудителя АЧС и инфицированных клеток, структуру и функции генетического материала, проводят поиск протективных АГ с использованием современных методов молекулярной биологии, генетики, монАТ. Эти направления могут привести к выработке новых подходов к созданию эффективных и безвредных вакцин против АЧС.

СПИСОК .ЛИТЕРАТУРЫ

1 .Анохина Е.Г. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992 :50. 2.Бадаев Ф. А. и др. Мат. н. коиф. ВНИИВВиМ, 1992 :24. З.Бадаев Ф.А и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992. За.Балышев В.М. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :230. 4.Вишняков И. Ф. и др. Диагн. и диф. диагн. африк. и класс, чумы свиней, М, 1992. 5.Бадаев Ф.А. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992 A4. б.Вишняков И.Ф. и др. Матер, н. коиф. ВНИИВВиМ, 1992 :57. 7.3еленцов В.А. Патан, диагн. вир. бол. жив., Колос 1984 :107. 8-Каламина Т В. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992 :36. 9.Колонцов А. А. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992 :34. Ю.Малахова М.С. и др. С/х., биология. Сер. биол жив., 1991, 4 :183. И.Макаров В.В. Вопросы вирусол. 1988,2 :5. 12.Макаров В.В. и др. Докл. ВАСХНИЛ, 1991, 12 :27. 13.Макаров В.В. и др. Вопросы вирусол 1991,4 :321. 14.Никитин И.В. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992 :51. 14а.Пантюшенко М.С. и др. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :23. 14б.Панпошенко М.С. н др. Там же, :24. 14в.Панпошенко M C. и др. там же, :25. 15.Петров Ю.И. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992, -.21. 16.Петров Ю.И. и др. Ветеринария. Иммунобиол. свойства вируса АЧС (обзор). 17.Роцъко JI.H. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ,1992 :53. 18.Середа А.Д. Тез. докл. н. коиф. ВНИИВВиМ, 1990 :40. 19. Сер еда А.Д. и др. Ветеринария, 1992 :1. 20.Середа А.Д. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992, :31. 20а.Старовойгов Н.С. и др. Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, 1992 :51. 21.Сюрин В.Н. и др. Вет. вирусология. М., Агропромизд. 1991. 22.Сюрин В.Н. и др. Диагн. вир. бол. животных. М. Агропромизд, 1991.

23.Сюрин В.Н. и др. Части, вет. вирусол. М., Колос, 1979. 24.Фомина Н.В. и др. Вирусы животных, MBA, 1991. 24а.Цыбанов С.Ж. Тез. докл. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :26. 25.Чумак Р.М Мат. н. конф. ВНИИВВиМ, Покров, 1992,

41 :32. 26.Almedral I M. Symp African Swine Fever and Pig Immunol, Salamanca, 1987. 27.Barros M.F. et.al. Virology, 1986,155 :1 28.Cadallero R.G. Arch Virology, 1986, 87 :1. 29.Carrascosa AL. Symp African Swine Fever and Pig Imm, Salamanca, 1987. 30.Devan dielle G. et.al. Iridoviridae Berlin, e.a.1985 :1. 31.Dixon L.K. Rev Sd Nechn of Int Epiz, 1986, 5 :2. 32.Escribano J.M.-Symp African Swine Fever and Pig Immunol., Salamanaca, 1987. 33.Consales A. etal. Symp.African Swine Fever and Pig Immunol, Salamanca, 1987. 34.Gonzalez S. et.al. Veter Immunol Immunopat, 1990, 26, 1 :71. 35.Martins C.L. et al. Symp Afr Swine Fever and Pig Immunol, Salamanca, 1987. 36.Petit F. et.al. Ann Redi Veter, 1991, 22,2 :201. 37.Santurde G. Dep Virol Animal Madrid, 1987. 38.Sdiloer G.M. Virus Res, 1985 : 3. 39.Steiger Y. et. al. J Clin Microbiol, 1992, 30, :1. 40.Plowright W. Rev Sd Tedm of Int Epiz, 1986, 5 :2. 41.Talavera A. Centr. Biology Mollecular, Madrid, 1987. 42.Valderia M. et. al. Cienc Biol Mol and Cell Biol, 1989, 14, 3 :96.43.Vinela E Curr. Topics in Microbiol and Immunol, 1985, 116 :291. 44.Vinuela E etal. Symp African Swine Fever and Pig Immunol, Salamanca, 1987. 45.Wiard T.C. et al. Virology, 1985, 142 :2. 46.Wilkinson P. Pirbright, 1985. 47.Вишняков И.Ф. и др. Тез. Всерос. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1995 :164. 48.AndersonE.C. Rev Sd Thedm off Int Epiz, 1986, 5 :2. 49.Yamz R.J. etal. Virol, 1995, 208, 1 :249. 50.Колонцов A.A. Мол. ген. михр. и вир., 1995, 3 :34. 51.Hyngowp P.M. etal. EMBO J, 1992, 11,1 .361. 52.Pan J.C. etal. Am J Vet Res, 1985, 46, 2 :314. 53.Бадаев Ф.А. и др. Тез. докл. н. конф. ВНИВВИМ, 1990, :46. 54.Цыбанов С.Ж. и др. Тез. докл. Всерос. н.-пр. конф. ВНИИЗЖ, 1990 :26. 55.Г[етров Ю.И. и др. Мат. н. конф. ВНИВВИМ, 1992 :20. S?.Kuznar J. et.al. Virol, 1980, 101 :169. 57.Kuznar J. etal. Virol, 1981, 96 :307. 58.Palatnick J. et al. Arch ges Virusforsch, 1974, 44 :156. 59.VoldeiraM.L. et.al. Arch virol, 1990, 113 :125. бО.Колонцов А А. Мол. ген., микр., вирусол 1995, 3 :34. 61.Salas ML. etal. Biodiim., 1988, 70 :627. 62.Salas J. et.al. J Virol, 1984, 52, 1 :37. 63.Arias M.L. et.al. Med Vet, 1986, 3 :333. 64.Blasco R. etal. Virology, 1989, 168 :819. 65.Cairascosa J.L. etal. Virol, 1984, 132 :160. 66.Casals I. etal. J Virol, .1984, 52 :37. 67.McKercher P.D. etal. Can Inst Food Sd Tedmol, 1987, 20 :267. 68.Mebus C.A. Adv Vir Res, 1988, 35 :251. 69.Minguez I. et.al. Vet Pathol, 1988, 25 :193. 70.Montgomery R.E. J Comp Pathol, 1921, 34 -.159. 71.Nesser J.A. et al. Qndertepoort J Vet Res, 1986, 53 :133. 72-Pastor M.J. et.al. J Virol Methods. 1990, 26 :67. 73.Pastor M. J. etal. Can J Vet Res, 1987, 53 :105. 74.Quintero J. etal. Am J Vet Res, 1986, 47 :1125. 75.Sanchez-Viscaino J.M In Afr svine fever Ed J Beccer Boston :63. 76.Tabares E. etal. Arch Virol, 1980, 66 :107. 77.Wardley R.C. et.al. Pros Med Virol, 1987, 34 :180. 78.Coggins L. Prog Med Virol. 1974, 18 :48. 79.Malmquist W.A. et al. Am J Vet Res, 1963, 24 :450.