МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ СИНТЕТИЧЕСКИХ ПИРЕТРОИДОВ  

Принцип. Методы основаны на экстракции пестицидов из измельченной пробы тканей животных, содержимого желудочно-кишечного тракта, кормов с помощью органического растворителя, на очистке экстрактов в системе жидкость—жидкость, дополнительной очистке на колонках с адсорбентами, их концентрировании и определении пестицидов с помощью ТСХ или ГЖХ. Реактивы: ацетон (ч.); гексан (ч. д. а.); эфир диэтиловый (х. ч); натрия сульфат безводный; хлороформ (ч.); ацетонитрил (ч.); бензол (ч. д. а.); кальция хлорид (х. ч.);

алюминия оксид для хроматографии II степени активности; натрия хлорид (ч.);

25%-ный водный раствор аммиака (ч.); серебра нитрат;

кислота фосформолибденовая (ч. д. а.); спирт этиловый 96%-ный;

проявляющий реагент для ТСХ: 1) 0,5 г серебра нитрата помещают в колбу на 100 мл, растворяют в 5 мл дистиллированной воды, добавляют 7 мл 25%-ного раствора аммиака и доводят объем в колбе до 100 мл ацетоном. 2) 10%-ная фосформолибденовая кислота в этиловом спирте;

реагент для ГЖХ: неподвижные фазы — 5%-ный БЕ-ЗО на хро- матоне 1У-А\?НОМС (0,16—0,20 мм); 3%-ный ОУ-1 на хроматоне 1Ч-А\? (0,125—0,160 мм); азот особой чистоты; основной стандартный раствор пиретроидов в гексане 500 мкг/мл.

Оборудование: колбы конические вместимостью 50 и 250 мл; колбы круглодонные со шлифом для отгонки растворителей; делительные воронки на 50, 100 и 250 мл; воронки; колбы мерные; колонки для адсорбционной хроматографии; аппарат для встряхивания колб; вакуум-ротационный испаритель И-1; камера хроматографическая; микропипетки на 0,1, 0,2 мл; хроматоскоп (хемоскоп); пульверизатор стеклянный; микрошприцы на 10 мкл; газовый хроматограф «Цвет», «Кристалл», ЛХМ-2000 с детектором по захвату электронов.

Ход определения. 25 г измельченной ткани (мышцы, печень, почки) или содержимого желудочно-кишечного тракта помещают в коническую колбу, заливают 50 мл ацетона и встряхивают в течение 1 ч на шуттель-аппарате. Фильтруют через бумажный фильтр в другую коническую колбу. Вносят в колбу 50 мл холодной дистиллированной воды и ставят на 1 ч в бытовой холодильник. Затем фильтруют через бумажный фильтр в коническую колбу, добавляют в колбу 30 мл гексана и встряхивают на шуттель-аппарате в течение 30 мин. Смесь переносят в делительную воронку. Гекса- новый слой отделяют и переносят в колбу вакуум-ротационного испарителя. Водно-ацетоновый слой дважды промывают 10 мл гексана, который сливают в ту же колбу. Экстракт упаривают досуха. Сухой остаток смывают 3—5 мл гексана, который переносят в мерную пробирку на 10 мл. Колбу еще раз промывают 3 мл гексана и переносят его в ту же пробирку. Сухой остаток растворяют в 200 мкл гексана при анализе посредством ТСХ и в 5 мл при использовании ГЖХ.

При анализе методом ТСХ весь объем экстракта наносят на старт хроматографической пластинки, подсушивая под феном пластинку в точке нанесения экстракта. Пластинку помещают в хроматографическую камеру и проводят развитие в системе гек- сан-ацетон (4:1). После развития пластинку подсушивают на воздухе, а затем опрыскивают раствором серебра нитрата или фос- формолибденовой кислоты.

Расчет количественного содержания проводят по формуле

„ _ А ¦ 1000 Р '

где х — содержание остатков пестицида в пробе, мг/кг; А — количество пестицида, найденное в пробе, мкг; 1000 — коэффициент для пересчета на килограммы; Р — масса навески анализируемой пробы, г.

При анализе методом ГЖХ 5 мкл конечного экстракта вводят с помощью микрошприца в газовый хроматограф и проводят анализ при следующих условиях: газовый хроматограф с детектором электронного захвата (ДЭЗ) или постоянной скоростью рекомбинаций; колонка стеклянная 1500 х 4,0 мм, заполненная фазой 3 %-ным ОУ-1 или 5%-ным БЕ-ЗО на хроматоне; газ-носитель — азот со скоростью 60 мл/мин; температура термостата колонки, испарителя и детектора соответственно 240, 260 и 260 °С. Время элюирования перметрина 2 мин 13 с, циперметрина — 2 мин 56 с, фенвалерата —

3. мин 20 с. Количественную оценку проводят путем сравнения площадей или высот пиков при хроматографировании стандартных образцов и экстрактов из пробы.

Расчет содержания пестицида проводят по формуле

с= СстК2-У

где С — количество препарата в пробе, мг/кг; Сст — количество пестицида во введенном в хроматограф стандартном растворе, мкг; — объем анализируемого экстракта после упаривания, мл; 5 — площадь пика исследуемого раствора, мм2; ¦^СТ. — площадь пика стандартного раствора пиретроида, введенного в хроматограф, мм2; К| — объем экстракта, введенного в хроматограф, мл; Р — масса навески анализируемой пробы, г.

Клиническое значение. Обнаружение в патологическом материале (печень, почки) синтетических пиретроидов дает основание предполагать возможную интоксикацию животных препаратами из этой группы химических веществ. Однако окончательный диагноз может быть поставлен на основании анализа данных о применении синтетических пиретроидов в качестве средств защиты растений или животных, клинических признаков интоксикации и результатов патологоанатомического исследования.