МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ГЕРБИЦИДОВ ГРУППЫ 2,4-Д  

ные свидетельствуют о их применении для обработки лугов и пастбищ, где выпасали животных, или растений, которые после обработки скармливали животным. Остатки гербицидов определяют в виде кислоты 2,4-Д методами ТСХ и ГЖХ (В. В. Ермаков, А. И. Назаренко, В. И. Плешаков, 1987).

Принцип. Методы основаны на извлечении кислоты 2,4-Д из кормов или патологического материала (печень, почки) смесью хлороформа и диэтилового эфира, реэкстракции соединения раствором натрия гидрокарбоната, переэкстракции диэтиловым эфиром, очистке экстрактов калия перманганатом и определении посредством ТСХ или ГЖХ.

Реактивы: диметилсульфат (ч. д. а.), 5%-ный раствор в перегнанном абсолютном ацетоне. В коническую колбу на 250 мл заливают 95 мл абсолютного ацетона, туда же вливают 5 мл диметил- сульфоксида и вносят 10 г безводного калия карбоната;

калия карбонат (ч. д. а.). Соль растирают в порошок, высушивают 6 ч при 100 °С и хранят в эксикаторе над безводным кальция хлоридом;

калия перманганат, 5%-ный водный раствор; кислота хлористоводородная концентрированная (х.

4. М растворы;

м-крезоловый пурпуровый (ч. д. а.);

натрия гидрокарбонат (х. ч.), 0,3%-ный и 3%-ный растворы; проявляющий реактив: 200 мг серебра нитрата вносят в колбу на 100 мл, растворяют в 10 мл бидистиллированной воды, добавляют в колбу 34 мл ацетона, вносят 10 мг м-крезолового пурпурового, помещают колбу на водяную баню температурой 80 °С на 15 мин. Хранят во флаконе из темного стекла в течение 1 нед; серебра нитрата (ч. д. а.);

смесь 3%-ного водного раствора натрия гидрокарбоната и этанола 9:1 по объему;

стандартный раствор 2,4-Д кислоты в ацетоне концентрацией 10, 100, 1000 мкг/мл.

Оборудование: газовый хроматограф с детектором электронного захвата серии «Цвет», ЛХМ-2000, «Кристалл» или аналогичный прибор; пластинки для хроматографии «Силуфол» производства Чехии; «Армсорб» на фольге или стекле; «Плазмохром» на полимере; камера для опрыскивания пластинок; пульверизаторы стеклянные; колба Эрленмейера на 250 мл; микрошприцы на 10 и 100 мкл; колонки стеклянные для анализа метиловых эфиров 2,4-Д с помощью ГЖХ 1500 х 3 мм, заполненные смесью 5%-ного метил- силоксана (8Е-30 5 %) и 1 %-ного полифенилметилсилоксана (ПФМС-4), нанесенные на силанизированный хроматон; ПФМС-4 растворяют в хлороформе и наносят на готовую фазу БЕ-ЗО методом испарения.

Ход определения.25г измельченного и растертого или гомогенизированного образца тканей животных вносят в колбу Эр- ленмейера на 250 мл, добавляют 5 мл концентрированной кислоты хлористоводородной, перемешивают, дополнительно вносят 50 мл смеси хлороформа и диэтилового эфира (2:1) и встряхивают в течение 20 мин. Затем в колбу всыпают 25 г безводного натрия сульфата. Содержимое колбы перемешивают; отстоявшийся растворитель сливают в колбу на 100 мл, пробу промывают 25 мл смеси растворителей. Экстракты объединяют, фильтруют через вату, промытую 5 мл хлороформа в колбу на 500 мл, добавляют 75 мл смеси 3%-ного раствора натрия бикарбоната и этанола (3:1) и встряхивают в течение 30 мин. Содержимое колбы переносят в делительную воронку на 250 мл.

После окончания реакции выделения диоксида углерода кислый раствор (pH 2) переносят в делительную воронку, в которую добавляют 50 мл эфира. Воронку энергично встряхивают в течение 5 мин. Экстракт фильтруют через ватный тампон и слой (1 см) безводного натрия сульфата в фарфоровую выпарительную чашку или колбу вакуум-ротационного испарителя. Экстракцию повторяют 25 мл эфира, который фильтруют в ту же чашку или колбу. Фильтр промывают 10 мл эфира. Эфир упаривают в токе воздуха, а затем на водяной бане при 60 °С или с помощью вакуум-ротационного испарителя досуха.

При анализе 2,4-Д с помощью ТСХ сухой остаток после упаривания экстракта растворяют в 0,2—0,3 мл хлороформа и наносят с помощью микропипетки или микрошприца на старт хроматографической пластинки с параллельным нанесением на линию старта

5. и 10 мкг (5 и 10 мкл) 2,4-Д кислоты концентрации 10 мкг/мл. В качестве подвижной фазы используют систему циклогексан-ук- сусная кислота-бензол в соотношении 4:2:1. После разделения пластинку нагревают в течение 10 мин при температуре 130 °С, а затем опрыскивают проявляющим реактивом, после чего еще раз помещают в сушильный шкаф. 2,4-Д проявляется в виде малиновых пятен на желтом фоне с величиной ЯҐ 0,54. Через 12 ч при хранении пластинок на свету пятна становятся темно-коричневыми. Количественную оценку содержания гербицида в пробе проводят путем сравнения величины и интенсивности окраски пятен, полученных из экстракта и стандартного раствора.

При определении 2,4-Д посредством ГЖХ предварительно проводят метилирование гербицида, содержащегося в сухом остатке. Для этого в колбу с сухим остатком приливают 3 мл 5%-ного раствора диметилсульфата в абсолютном метиловом спирте, тщательно ополаскивают стенки колбы, вносят в колбу 1 г безводного натрия сульфата, присоединяют к колбе обратный холодильник и помещают на водяную баню температурой 55 °С на 10 мин.

Одновременно готовят стандартный раствор кислоты 2,4-Д. Для этого в колбы вакуум-ротационного испарителя вносят 1, 5 и 10 мг (0,1, 0,5 и 1,0 мл) стандартного раствора 2,4-Д концентрацией 10 мкг/мл. Растворитель упаривают досуха, а пестицид метилируют так же, как и в экстрактах из проб.

Клиническое значение. Обнаружение остатков гербицидов группы 2,4-Д в кормах и содержимом кишечника на уровне, превышающем 50 мг/кг, и в печени более 5 мг/кг служит основанием для постановки диагноза на отравление. Окончательный диагноз на отравление гербицидами этой группы ставят в случае подтверждения данных лабораторного исследования анамнестическими сведениями, клиническими признаками интоксикации (угнетение, отсутствие аппетита, учащенное дыхание, тимпания и скрежет зубами у крупного рогатого скота), а также результатами патологоанатомического вскрытия павших животных (зернистая и жировая дегенерация печени и почек, гиперемия и кровоизлияния во внутренних органах).