ОПРЕДЕЛЕНИЕ ВИТАМИНОВ В ПОЧВЕ-С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ ДРОЖЖЕЙ КАК ИНДИКАТОРОВ

Культуры дрожжей могут быть использованы в качестве индикаторных при определении витаминов группы В, потому что среди этих организмов найдены штаммы, реагирующие на присутствие только одного определенного витамина.

Индикаторные культуры ограничены в своих потребностях в отношении других веществ и хорошо развиваются в простой синтетической среде.

Схема опыта по обнаружению витаминов группы «В» в почве с помошью дрожжевых индикаторных культур заключается в следующем В каждую из шести стерильных чашек Петри закапывают по одной капле минусовых (без одного витамина) смесей витаминов и суспензии дрожжевых культур, индикаторных на определяемые витамины. Чашки заливают расплавленной и охлажденной до 40° стерильной глюкозо-минеральной средой Ридер и тщательно перемешивают агар быстрым вращением чашки для равномерного распределения' дрожжевой суспензии. На поверхность застывшей среды накладывают четыре-пять дисков из стерильной фильтровальной бумаги, пропитанной: 1) почвенной суспензией (1—2 диска); 2) стандартным раствором определяемого витамина; 3) автолизатом дрожжей или раствором смеси всех витаминов; 4) дистиллированной водой.

Водную вытяжку из почвы готовят следующим образом. К 10 г сухой почвы (без корней) добавляют 90 мл дистиллированной воды в колбе Эрленмейера на 150 мл и выдерживают на кипящей водяной бане в течение 1 ч при постоянном взбалтывании. Уровень жидкости, отмеченный вначале, доводят до метки стерильной дистиллированной водой. После декантации жидкость центрифугируют и прозрачную почвенную вытяжку разливают в пробирки, отмечают уровень и стерилизуют в аппарате Коха, после чего восстанавливают первоначальный объем дистиллированной водой.

Стандартные растворы витаминов должны содержать их оптимальную для дрожжей концентрацию (мкг/мл): инозит — 5,0, биотин — 0,0001, пантотеновая кислота — 0,25, тиамин (витамин Bi) — 1,0, пи- ридоксин (витамин Вб) — 0,25, никотиновая кислота (витамин РР) — 0,5.

Сначала готовят исходные растворы витаминов на стерильной дистиллированной воде (10 мл) в стерильных пробирках.

Стандартные растворы витаминов готовят из исходных путем соответствующего их разбавления стерильной дистиллированной водой при соблюдении стерильных условий. Минусовые смеси витаминов готовят из исходных растворов путем смешивания отдельных объемов всех витаминов без одного определяемого (табл. 4).

Опыты по определению витаминов проводят на глюкозо-минеральной среде Ридер следующего состава (г/л): (NH4)2S04 — 3,0, MgS04 — 0,7, NaCl — 0,5, KH2P04— 1,0, КгНР04 — 0,1, глюкоза — 20,0. Если для приготовления среды используют дистиллированную воду, то в нее добавляют смесь микроэлементов. Для приготовления агаризованной среды используют водопроводную воду и агар-агар, не содержащий примесей. Глюкозу освобождают от примесей витаминов. Для этого готовят 20%-ный раствор, к которому добавляют 5% активированного^ угля и встряхивают в течение получаса. Затем фильтруют через бумажный складчатый фильтр. Среду стерилизуют при 0,25 атм 15 мин.

Рост вокруг дисков отмечают в миллиметрах ширины зоны сти-

Составление витаминных смесей

муляции. Положительным контролем является рост тест-культуры вокруг диска с дрожжевым автолизатом.

Таблица 5

Определение витаминов в почве