МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ МИКРОЭЛЕМЕНТОВ  

Для определения марганца, цинка, железа и других микроэлементов используют химические, атомно-абсорбционные, полярографические и другие методы.

Определение кобальта в крови по методу С.

Для устранения влияния других микроэлементов, реагирующих с ПААФ, их окрашенные комплексы разрушают 5 моль/л раствором серной кислоты.

Реактивы: 20%-ный раствор натрия цитрата (х. ч.);

3. моль/л раствор натрия ацетата трехводного (х. ч.). 408 г соли растворяют в бидистиллированной воде и доводят объем до 1 л;

0,3 моль/л раствор соляной кислоты. В мерную колбу на 1 л вносят 24 мл концентрированной соляной кислоты (плотность 1,19) и доливают до метки бидистиллированной водой;

0,05%-ный раствор ПААФ. 50 мг реактива растворяют в 100 мл 96%-ного этилового спирта;

азотная кислота концентрированная (х. ч.);

5 моль/л раствор серной кислоты. 266,3 мл серной кислоты (плотность 1,84) доводят бидистиллированной водой до 1 л;

хлороформ;

калибровочный раствор кобальта основной. 0,4034 г кобальта хлорида (С0СЛ2 • 6Н2О, х. ч.) растворяют в бидистиллированной воде, добавляют 5 мл концентрированной соляной кислоты и доводят объем бидистиллированной водой до 1 л. В 1 мл калибровочного раствора содержится 100 мкг кобальта;

рабочий калибровочный раствор кобальта.

20%-ный раствор соляной кислоты. 48,2 мл соляной кислоты (плотность 1,19) доводят до 100 мл бидистиллированной водой.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; фарфоровые тигли или чашки; сушильный шкаф; весы аналитические; электроплитка; муфельная печь; водяная баня; бюретка на 25 мл; пипетки измерительные на 0,2, 1, 5 и 10 мл.

Ход определения. В фарфоровый тигель (или чашку) вносят 20 мл цельной крови, ставят на электроплитку и медленно обугливают. Далее озоляют в муфельной печи в течение 4 ч при температуре 500—550 °С. В теплый тигель приливают 2 мл 50%-ной азотной кислоты, тщательно перемешивают стеклянной палочкой, смывая приставшие к ней частицы бидистиллированной водой в тигель. Упаривают досуха на электроплитке или водяной бане, не допуская разбрызгивания содержимого. Тигель ставят в муфельную печь, доводят температуру до 500 °С и выдерживают в течение

1. ч. При наличии частичек угля обработку азотной кислотой повторяют. К золе приливают 2,5 мл 20%-ного раствора соляной кислоты и 5 мл бидистиллированной воды. Тигель накрывают часовым стеклом, ставят в водяную баню и кипятят 5 мин. Содержимое тигля фильтруют в мерную колбу на 25 мл. Тигель обмывают несколько раз бидистиллированной водой и объем доводят до метки.

В делительную воронку или пробирку с притертой пробкой на 45—50 мл вносят 10 мл раствора золы, 2,5 мл 20%-ного раствора натрия цитрата, 2,5 мл 3 моль/л раствора натрия ацетата, 1 мл раствора ПААФ. Тщательно перемешивают после прибавления каждого реактива. Через 10 мин приливают 10 мл 5 моль/л раствора серной кислоты, перемешивают, добавляют 5 мл хлороформа из бюретки и встряхивают в течение 1 мин. Дают слоям жидкости хорошо разделиться, и нижний слой сливают в кювету с толщиной слоя в 1 см. При использовании пробирок с притертой пробкой нижний слой отбирают при помощи пипетки с грушей или отсасывают верхний слой при помощи водоструйного насоса.

Содержание кобальта вычисляют по калибровочному графику. В делительные воронки или пробирки с притертыми пробками вносят 0,2, 0,4, 0,8, 1,0, 1,5 и 2 мл рабочего калибровочного раствора кобальта. Объем доводят до 10 мл 0,3 моль/л соляной кислотой. Далее поступают, как и с образцом. В контроль вместо раствора кобальта вносят 0,3 моль/л раствор соляной кислоты.

По результатам измерений строят калибровочную кривую.

Расчет ведут по формуле

              AV-100

ВС '

где х — количество кобальта, мкг%; А — количество кобальта, найденное по калибровочной кривой, мкг; V — объем раствора золы, мл; В — количество крови, мл; С — количество раствора золы, взятое на анализ, мл; 100 — коэффициент для пересчета в мкг.

Источники: 49, 52.

Клиническое значение. Кобальт — составная часть витамина В12, который непосредственно участвует во многих обменных процессах в организме, в частности, он необходим для нормального кроветворения (активирует синтез протопорфирина), участвует в синтезе метионина, в процессе переноса кислорода. Кобальт необходим для жизнедеятельности микрофлоры рубца. Он ак- тивирующе влияет на щелочную фосфатазу костной ткани. Поэтому его недостаток приводит к нарушению гемопоэза, усвоения питательных веществ корма, задержке роста и развития, снижению продуктивности и воспроизводительной функции, появлению ги- покобальтоза, остеодистрофии, анемии, стеатозу печени и другим болезням.

Содержание кобальта в крови колеблется от 2,5 до 5,0 мкг% (0,43—0,85 мкмоль/л), в плазме крови 0,5—0,7 мкг% (0,085— 0,12 мкмоль/л), в молоке 1—4 мкг% (0,17—0,68 мкмоль/л). Снижение уровня кобальта в крови отмечают при его недостаточном поступлении с кормом и водой, плохом усвоении вследствие расстройства деятельности желудочно-кишечного тракта. Низкий уровень кобальта наблюдается при гипокобальтозе, гиповитаминозе В12, алиментарной и экзотической остеодистрофиях, уровс- кой болезни.