Количественная обработка результатов ПЦР

  Как уже было отмечено, метод ПЦР отличаются высокой чувствительностью и специфичностью, однако количественная оценка продуктов амплификации с помощью обычного ПЦР и его вариантов, особенно, если

88 необходимо измерить исходное содержание ДНК-матрицы в анализируемом образце, является достаточно сложной задачей.

Выход продукта, образующегося в процессе полимеразной реакции, зависит не только от количества введенной в пробу ДНК, но и от состава образца. Кроме того, после определенного цикла амплификации накопление ее продукта постепенно замедляется. Таким образом, при детекции продуктов ПЦР после амплификации практически невозможно учесть все факторы, оказывающие влияние на ход реакции и с точностью оценить количество ДНК-мишени.
Простым и распространенным, но не слишком надежным способом полуколичественного ПЦР-анализа, является использование внутреннего стандарта, который анализируют одновременно с образцом определяемой ДНК. Внутренними стандартами служат фрагмент ДНК (так называемая конкурентная ДНК-competitor DNA), который, как и фрагмент определяемой ДНК содержит участки отжига праймеров, но при одновременной амплификации дает продукт иного размера, чем целевой ампликон, или фрагменты «генов домашнего хозяйства», для которых используют специфичные к ним праймеры. После проведения несколько реакций с различными разведениями внутреннего стандарта, результаты оценивают с помощью электрофореза или гибридизации с ДНК-зондами..
Для более точной количественной оценки разработан подход, позволяющий отслеживать кинетику накопления продуктов амплификации и измерять их количество во время реакции. Этот подход лежит в основе метода ПЦР в реальном времени. 

Еще по теме Количественная обработка результатов ПЦР:

1. 2.1.16. Статистическая обработка результатов исследований.
2. ОЦЕНКА СОСТАВА МЕТАНОГЕННЫХ АРХЕЙ В ТОРФЯНЫХ ПОЧВАХС ПОМОЩЬЮ ПЦР-ДГГЭ ТЕХНОЛОГИИ А.              К. Кизилова, М. В. Чистотин, И. К. Кравченко
3. ДЕСОРБЦИЯ МИКРООРГАНИЗМОВПРИ ИХ КОЛИЧЕСТВЕННОМ УЧЕТЕ В ПОЧВЕ
4. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ КЛАССОВ ЛИПИДОВ ХИМИЧЕСКИМИ МЕТОДАМИ  
5. Количественный метод копрооволарвоскопии и подсчет количества яиц и личинок гельминтов в г фекалий
6.   Количественное определение афлатоксинов В( и G( в кормах. Метод разработан Н. А. Соболевой.  
7. ОПЫТ количественной оценки динамических СОСТОЯНИЙ И УСТОЙЧИВОСТИ СОСНОВЫХ НАСАЖДЕНИЙ НАОБЪЕКТАХ ГИДРОМЕЛИОРАЦИИ
8. ИЗМЕНЕНИЕ КОЛИЧЕСТВЕННОГО СОДЕРЖАНИЯ РНК И ДНК В КОРНЯХ И ЛИСТЬЯХ ВИНОГРАДА, ПОРАЖЕННЫХ ФИЛЛОКСЕРОЙ
9. ОБРАБОТКА ПОЧВЫ
10. РЕЗУЛЬТАТЫ ОПЫТОВ
11. ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ
12. ЗАДАЧИ ОБРАБОТКИ ПОЧВ
13. ОБРАБОТКА ПОЧВЫ
14. Публикации результатов исследований.
15. Результаты опытов других научных учреждений