ЭПИЗООТОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ

Спектр патогенности в естественных условиях. Большинство выделяемых полевых шт. вируса оспы кур патогенны для птиц этого вида. Однако в экспериментальных условиях некоторые шт. могут вызвать заражение норок, уток, ястребов и канареек. Встречаются так называемые бипатогенные и трипатогенные шт. оспы кур; они заражают кур и голубей или кур, голубей и индеек. Шт. Никано и Хоккей обладают широким спектром патогенной активности; вызывают оспенную реакцию у цыплят, голубей и кроликов. По спектру патогенности ВОП могут быть расположены в таком порядке: голуби, индейки, куры и канарейки. Вирус оспы перепелов (шт. QP-241) вызывает гибель перепелов-цыплят. При кожном заражении у голубей развивается слабовыраженная фолликулярная реакция. Вирус оспы выделен из бородавкоподобных поражений у 3-х видов австралийских диких птиц: сороки Gymnorhina tibicen, белоглазки Zosterops laterales и сорочьего жаворонка Grallina cyanoleuca. Все 3 вируса не вызывали ЦПД в культуре фибробластов КЭ. В PH, РДП показана АГ близость этих вирусов с вирусами оспы кур и голубей, но они не давали антигенных перекрестов с вирусом осповакцины.

ДИАГНОСТИКА i

Диагноз на ОП ставят на основании эпизоотологических данных, результатов клинического обследования птиц, вирусологических и серологических исследований. Если имеются типичные оспенные поражения кожи, гребня, сережек и лицевой части головы, диагноз поставить не трудно. Если же поражения локализуются только в роговой и носовой полостях, диагностировать болезнь значительно труднее.

Выделение вируса

Выделение вируса на КЭ. Из 10%-ной суспензии, свободной от микрофлоры, готовят разведения 10'2 и 10'3 на физиологическом р-ре. Каждым разведением (по 0,2 мл) заражают на ХАО по 4 10-12-дн КЭ, которые инкубируют в течение 6 дн. КЭ, погибшие на 3-и сут и позже, а также оставшиеся живыми на 6-е сут после заражения охлаждают и вскрывают. В положительных случаях на ХАО обнаруживают отдельно расположенные или слившиеся оспины. Под влиянием вируса оспы голубей возникают наиболее крупные, толстые, компактные, с выпуклой серединой очаги оспенных поражений диаметром 5-6 мм, не имеющие признаков некроза. При высокой заражающей дозе наблюдается значительное утолщение и железообразный отек всей оболочки (вид медузы).

От вируса оспы кур появляются более мелкие (3-5 мм в диаметре) плоские поражения, иногда с неровными краями. При большой заражающей дозе наблюдаются обширные утолщения оболочки, которая имеет беловатую окраску. Вирус оспы индеек дает беловатые слабо выраженные очаги поражения диаметром 2-3 мм, часто окруженные кольцеобразной зоной. Вирус оспы канареек образует дифференцированные очаги. Первичные очаги средней величины, разлитые и напоминают поражения, вызываемые оспой голубей. Вторичные очаги имеют вид мелких беловатых точек. От вируса осповакцины появляются хорошо видимые очаги уже на 3-й дн после инфицирования. Они плоские, диаметром 2-3 мм, с отчетливо видимым центральным некрозом в первичных очагах. Из оспенных поражений ХАО делают тонкие мазки или отпечатки на предметных стеклах и окрашивают до Морозову или Пашену для выявления элементарных оспенных телец (’вирионов). Выделение вируса на КЭ проводят до 3-х пассажей.

Биопроба. Биопробу проводят на неиммунных к вирусу оспы цыплятах 3-4-мес возраста. Для этого используют 10%-ную суспензию материала, полученного от естественно больной птицы, или суспензию ХАО зараженных КЭ. В том и другом случаях испытуемый материал осторожно втирают стеклянной палочкой или зубной щеткой в скарифицированную поверхность гребня, бородок, а также в освобожденные от перьев фоллцкулы голени. При наличии в материале вируса оспы на месте втирания на 5-6-й дн развиваются оспенные поражения: припухание и покраснение фолликулов, появление на поверхности их гнойных пробочек, затем струпьев, которые в дальнейшем, сливаясь, дают общий струп коричневого цвета. Специфичность оспенных поражений у экспериментально зараженной птицы в каждом случае может быть подтверждена при помощи вирусоскопии мазков. У кур, зараженных вирусом оспы голубей в перьевые фолликулы, развивается доброкачественный фолликулит (без некроза), который к 10-12-му дню исчезает. Вирус оспы кур после нескольких пассажей на индейках может вызывать оспенный процесс у голубей, а после нескольких пассажей через них ослабить свою вирулентность по отношению к курам и индейкам.

Индикация вируса

Вирусоскопия. Готовят мазки из воспаленных фолликулов голени экспериментально зараженных кур или голубей или из свежих оспенных бородавок естественно больной птицы. Окрашивают их методом серебрения по Морозову, на присутствие элементарных телец можно окрашивать также по методу Герцберга илн Пашена. При иммерсионной микроскопии элементарные тельца Борреля просматриваются в виде мелких (200-300 нм) округлых образований темно-коричневого или черного цвета, расположенных поодиночке, парами, короткими цепочками, в виде скоплений. Присутствие оспенного вируса считается подтверждением только при обнаружении характерных телец в массовом количестве. Достоинством метода вирусоскопии следует считать быстроту ответа (0,5-1 ч после доставки материала в лабораторию), простоту и доступность. Однако есть и некоторые недостатки: наиболее четкие результаты при вирусоскопии можно получить при использовании срезов от свежих везикул (до нагноения) или везикулярной жидкости; при исследовании пустулезной жидкости, особенно корок, возможность обнаружения элементарных телец и достоверность полученных результатов значительно снижаются. Вирусоскопические исследования могут быть проведены также с использованием техники фазовоконтрастной микроскопии.

ЭМ. В эпителии оспин можно найти вирус ЭМ методом после адсорбции на коллодие- вую пленку. При этом выявляются как незрелые пузырьковидные вирусные частицы размером от 60 до 200 нм, так и типичные кирпичеобразные и овальные зрелые вирионы. При негативном контрастировании видны филаментозные структуры вирионов. Диагноз считают установленным при наличии в препаратах одиночных или расположенных группами оспенных вирионов (Рис. 108). Метод позволяет определить не только размеры исследуемых вирусов, но и форму и структуру их (7, 8,9).

Обнаружение телец-включений. В цитоплазме инфицированных клеток обнаруживают 2 типа телец-включений (телец Боллингера): первые представляют собой волокнистый материал, соответствующий зрелым вирионам (тельца -включения типа В), вторые - зрелые вирионы (тельца-включения типа А), имеют структуру, идентичную структуре других штаммов вируса оспы кур.

Быстрый и простой метод гистологических исследований (18) позволяет в течение нескольких часов обнаружить цитоплазматические тельца-включения и дифференцировать оспенную инфекцию от ИЛТ кур.

Серологическая идентификация

РДП. При оспенной форме болезни для приготовления АГ ex tempore используют кусочки гребешка или кожи с оспенными поражениями, легкие, печень, а при дифтеритиче- ской форме - гортань, трахею, легкие и инфицированные вирусом ХАО КЭ. Преципити- рующие линии из суспензии легкого и печени довольно четкие, но они в 2-3 раза слабее, чем из суспензии гребешка и кожи. Положительная РДП подтверждает диагноз на оспу, а отрицательная не дает права исключать ее.

Помимо РДП для исследования сывороток используют тест встречного ИЭФ. В сыворотках бройлеров с помощью РДП АТ выявляются позже, чем в тесте ВИЭФ. Последний имеет преимущества в отношении выявления ранних преципитинов. Тест прост и быстро воспроизводится. Для проведения ВИЭФ требуется всего лишь 45 мин в условиях комнатной температуры. Линии преципитации видны без окрашивания (16).

ИФ. Для индикации вируса используют метод простого флюорохромирования акридиновым оранжевым, а также метод флюоресцирующих АТ. Последний является экспресс- методом диагностики ОП при исследовании препаратов -отпечатков из оспеиных поражений больной птицы, зараженной культуры клеток КЭ и т. д. Результаты исследования материала можно иметь через 5-7 ч после поступления его в лабораторию.

Серодиагностика и ретроспективная диагностика. Разработана методика постановки РНГА для диагностики оспы кур с использованием как нативных, так и формалинизирован- ных бараньих эритроцитов. В диагностических лабораториях применяется РДП в агаровом геле. Антигеном служат ХАО, собранные на 4-5-й день после заражения КЭ. Преципити- рующую сыворотку получают от естественно больной и переболевшей птицы. С помощью РДП с заведомо “активным” эмбриональным вирусом оспы кур можно выявить присутствие специфических АТ у кур, не имеющих видимых клинических признаков заболевания. РДП ставят по методу Джордани и Чабб (1962), модифицированному Г.А.Лежава (ВГНКИ вет- препаратов, 1964). При этом надо учитывать, что ПА в сыворотке крови обычно появляются между 11 - 36 дн после заболевания кур оспой. Сыворотка крови птицы, зараженной сильно вирулентным шт. вируса оспы, обычно дает более выраженную РДП. Однако преципити- рующая сыворотка реконвалесцентов часто оказывается слабоактивной, а у 15% больных оспой кур ПА не удается выделить совсем.

Разработан ELISA для определения АТ к вирусу ОП.

Дифференциальная диагностика. ОП следует дифференцировать от авитаминоза А, ИЛТ, ИБК, пастереллеза, парши, аспергиллеза и респираторного микоплазмоза.

ИММУНИТЕТ И СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

Куры, переболевшие оспой в естественных условиях, приобретают иммунитет на 2-3 г.. Поствакцинальный иммунитет менее продолжителен и зависит от характера вакцины. Для специфической профилактики ОП применяют живые вакцины 2-х типов: приготовленные из иммуногенных и ареактогенных шт. гетерологичного вируса оспы голубей илн из аттенуированного или природою ослабленного ВОП 27-АШ. В СНГ применяют сухую вирусвакцину из вируса оспы голубей (шт. НД). Вирусвакцину из голубиного вируса (Рис. 108) оспы рекомендуют для цыплят 1-1,5-мес возраста. Иммунитет у привитой птицы наступает через 3 нед и сохраняется около 3 мес у цыплят и до 10 мес у кур. При использовании вакцины из вируса оспы голубей напряженность и длительность создаваемого иммунитета во многом зависит от числа воспалившихся после вакцинации перьевых фолликулов. Считают, что для создания напряженного иммунитета у птицы голубиной вакциной каждая доза последней должна иметь титр не менее 105 ЭИД 50, а у птицы, привитой вакциной в рабочем разведении, должно быть не менее 15 воспалившихся фолликулов. Проведены успешные опыты аэрозольного применения вирус-вакцины из голубиного штамма оспы Нью-Джерси. При таком методе вакцинации иммунитет у цыплят формируется к 11 сут и сохраняется не менее 190 дн. Ф.Б. Ширинов (10) выделил природою ослабленный ВОП и, всесторонне изучив его, рекомендовал для широкого применения в качестве живой вакцины с профилактической целью. 5-летний срок использования этой вакцины дал основания оценить ее положительно. Однако в настоящее время в РФ применяется сухая вакцина из шт. ВГНКИ из куриного вируса. Ее готовят на основе аттенуированного культурального шт. К. Птицу иммунизируют методом укола в перепонку крыла. Реакция на введение вакцины наступает на 5-8-й дн и характеризуется образованием на наружной и внутренней поверхностях перепонки крыла оспин, которые исчезают через 28-30 дн. По эффективности и иммунобиологичским показателям, технологии изготовления и применения эта вакцина превосходит все предыдущие (3).

В Австралии проводят вакцинацию цыплят путем добавления в корм коммерческого препарата. По данным авторов, вакцинация per os с кормом дешевле аэрозольной вакцинации, поскольку требует гораздо меньшего количества вируссодержащего материала при одинаковом индуцировании АТ (15).

Серологическая оценка поствакцинального иммунитета не разработана.

СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ

1.Апатенко В.М. Ветеринария., 1964, 4:32. 2.Борисович Ю.Ф. Вет. препар., ВГНКИ, 1981.

З.Гуненков В.В. и др. Ветеринария, 1991, 6:22. 4.Дугко Ю.С. и др. Ветеринария, 1980, 5 .38. 5.Сергеев В.А. и др. Стукт. и биология вирусов животных, МД983. 6.Сюрин В.Н. Оспа птиц, М, Сельхозиздат,1954. 7.Сюрин В.Н. и др. Диагностика вир. бол. жив., М, Агропром- издат,1991. 8.СюринВ.Н., Фомина Н.В. Част. Вет. вирусол. М, Колос, 1979. 9.ФоминаН.В. и др. Вирусы животных, MBA, 1991. М.Ширинов Ф.Б. Ветер., 1983, 10 :37. ll.Annuar В.О. et.al. Arch Virol, 1983, 76, 3 :217. lla.Boyle D.B. et.al. Imm and Cell Biol, 1993, 71, 5 :391. 12.Dales S. et.al. Biol of Poxviruses, Springer Verb,1981. 13,Fernen de Z.D. An Fac vet, Leon,1978, 24, 1 :79. 14.Fukuda T. et.al. Nat Inst Anim Health Qurt 1979, 19, 3 :104. 15.

Jieynan J. et.al. J Vet Med B, 1992, 39, 5 :388. 16.Kataria J.M. et.al. Indian J Poultry SC,1989, 24, 2 :139. 17.Mockett A.P. et.al. Avian Pathol, 1987, 16 :407, 493. 18.Sevoian M. Avian Dis,1960, 4 :474. 19.Thiele J. Arch virol, 1979, 62, 1 :77.