Определение активности липоксигеназы

Активность липоксигеназы определяли спектрофотометрическим методом, используя в качестве субстрата линолевую кислоту по методике [2] в нашей модификации. Растительную навеску (1,5-2 г) растирали в ступке с 0,05М К-фосфатным буфером рН 7,0, содержащим 1% поливинилпирролидон, 1% Тритон Х-100 и 0,04% метабисульфит натрия, фильтровали и центрифугировали (15 мин, 8000 об/мин).

Полученный супернатант использовали для определения активности фермента. Для этого готовили стандартный раствор субстрата, содержащий 0,03 мл 99% линолевой кислоты и 0,1 мл Твин-20 в 20 мл 0,05 М К-фосфатного буфера (рН 7,0). Для определения активности фермента смешивали 1 мл стандартного раствора и 2 мл К-фосфатного буфера (рН 7,0), вносили пробу объемом 0,1 мл и определяли изменение оптической плотности при 234 нм. Активность фермента рассчитывали с использованием коэффициента экстинкции (s = 25000 М ^-1 ■ см ^-1). Активность липоксигеназы пересчитывали на мг белка, содержание которого определяли по Lowry. При определении активности фермента в клеточных компартментах (митохондриях,

хлоропластах и цитоплазме) использовали ту же методику, при этом в среду инкубации вносили по 0,1 мл полученной фракции клеточных компартментов.

Все процедуры по выделению ферментов проводили при 4⁰С.

Еще по теме Определение активности липоксигеназы:

1.   Определение активности а-амилазы.  
2.   Определение активности пероксидазы (КФ 1.11.1.7) в крови. 
3.   Определение активности глутатионредуктазы (КФ 1.6.4.2) в крови. 
4.   Определение активности катал азы (КФ 1.11.1.6) в крови. 
5.   ЭКСПРЕСС-МЕТОДЫ ОПРЕДЕЛЕНИЯ ФУНКЦИОНАЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ МИКРОФЛОРЫ РУБЦА  
6.   Определение антиокислительной активности (АОА) плазмы крови.  
7.   Определение активности холинэстеразы в сыворотке крови по гидролизу ацетилхолинхлорида. 
8.   ОПРЕДЕЛЕНИЕ АКТИВНОСТИ УРЕАЗЫ В ЖМЫХАХ И ШРОТАХ (ГОСТ 13979.9-69)[3]  
9.   Определение активности у-глутамилтранспептидазы (у-глута- милтрансферазы) в сыворотке крови с помощью набора реактивов.  
10.   Определение активности щелочной фосфатазы в сыворотке крови по гидролизу р-глицерофосфата (метод Бодански).  
11.   Определение активности креатинкииазы (КК) в сыворотке (плазме) крови с использованием креатинфосфата в качестве субстрата. 
12.   Определение активности сорбитолдещдрогеназы (СДГ) в сыворотке крови по реакции с резорцином (метод Севела—Товарека). 
13.   Определение активности а-амилазы в сыворотке крови, моче, дуоденальном содержимом амилоклассическим методом со стойким крахмальным субстратом (метод Каравея).  
14. МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПОЧВ
15. 2. Принцип активности
16. Микробиологическая диагностика и биологическая активность почв