Получение трансгенных растений без маркерных генов

  Экспрессия маркерных селективных генов в конечных продуктах транс- геноза в ряде случаев нежелательна по причине того, что существует вероятность переноса генов устойчивости к антибиотикам в геном патогенных для человека и животных микроорганизмов.

Кроме того, продукты маркерных генов могут быть аллергенами, т. е. они могут оказаться фактором загрязнения окружающей среды.
Одним из возможных путей получения трансгенных растений без маркеров устойчивости к антибиотикам является котрансформация смесью двух векторных систем: одна из них содержит ген селективного маркера, а другая содержит целевой ген. Часть полученных таким образов трансформантов содержит обе вставки, что позволяет отобрать трансформанты. Большая часть таких клеток содержит вставки в разных сайтах генома. Это позволяет в дальнейшем удалить маркерный ген из трансгенного растения путем обычного скрещивания. Таким образом, маркерный селективный ген может быть использован для отбора трансформантов, а затем удален из полученного трансгенного растения.

Наиболее узким местом в технологии трансгенеза является регенерация целых растений из трансформантов. Регенерация легче происходит из многоклеточных структур. Наиболее распространенным методом является метод листовых дисков. Кружочки листовой ткани, высеченные стандартным пробойником, инкубируют в суспензии клеток агробактерий, в плазмиде которой имеется вставка с целевым геном. Затем кусочки переносятся на селективную среду регенерации, содержащую антибиотики, блокирующие рост агробактерии (карбеинциллин), а также антибиотики, ингибирующие рост нетрансформированных тканей (канамицин, неомицин, хлорамфени- кол, метатрекстат). Селективная среда позволяет отобрать только те ткани листа, которые содержат маркерные гены, т. е. трансформированные Т-ДНК ткани. Наличие целевого гена далее проверяется с помощью генетического и молекулярного анализа. 

Еще по теме Получение трансгенных растений без маркерных генов:

1. 3.6.5. Характеристика генотипа как сбалансированной по дозам системы взаимодействующих генов 3.6.5.1. Значение сохранения дозового баланса генов в генотипе для формирования нормального фенотипа
2. 3.6.6.3. Регуляция экспрессии генов у прокариот
3. Проблема внутрихромосомной локализации генов
4. МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ СПЕРМЫ
5. Регуляция активности генов и белков
6. МЕТОДЫ ПОЛУЧЕНИЯ СПЕРМЫ
7. Искусственное получение апомиктов
8. 6.3.1.3. Наследование признаков, обусловленных взаимодействием неаллельных генов
9. Электричество без проводов
10. 13. Дарвин без Мальтуса
11. 12. Дарвинизм без отбора
12. 3.6.6. Регуляция экспрессии генов на геномном уровне организации наследственного материала
13. 11.5. ГЕНЕТИКО-АВТОМАТИЧЕСКИЕ ПРОЦЕССЫ (ДРЕЙФ ГЕНОВ)
14. 5-15* С Платоном или без?
15. САМОЗАЩИТА С ОРУЖИЕМ И БЕЗ
16. 5. Ученики Четверикова: мутации без отбора
17. Оценка полученных результатов
18. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ
19. 2. ЭЛЕКТРОЭФФЛЮВИАЛЬНЫЙ МЕТОД ПОЛУЧЕНИЯ УНИПОЛЯРНЫХ АЭРОИОНОВ
20. 1** С историей или без? Каверзные ответы