Микроинъекции

После решения чисто технической задачи фиксирования протопластов на стекле с помощью полилизина стало возможным введение препаратов чужеродных ДНК в клетки через микроиглы с внешним диаметром около 2 мкм.

Эффективность трансформации при этом колеблется в пределах 10-20 %. Поскольку видовые ограничения для этого метода пока не известны, то его вполне можно считать универсальным.
Гены-маркеры для отбора трансформантов
Поскольку частота трансформации, как правило, невелика, то в гибридные плазмиды вводят гены-маркеры для удобства отбора трансформантов на селективных средах. В качестве селективных маркерных генов используются гены устойчивости к антибиотикам из Е. coli (канамицину, хлорамфениколу и т. д.), к которым чувствительны растительные клетки. Помимо генов устойчивости в качестве маркерных генов используются также репортерные гены, позволяющие выявлять трансформированные клетки в интактных растительных тканях. Примером репортерных генов являются гены, кодирующие биосинтез фермента люциферазы, выделенного из некоторых бактерий и светлячков рода. В этом случае трансформанты выделяются на общем фоне способностью к свечению. Удобным репортерным маркером является также ген бактериальной p-D-глюкуронидазы (GUS-ген), который позволяет идентифицировать трансформанты по специфическому окрашиванию селективных сред.
Для экспрессии бактериальных генов-маркеров в клетки растений вводятся соответствующие сигнальные последовательности для начала и окончания процесса транскрипции этих генов. В качестве таких регуляторных элементов используются следующие: 358-промотор вируса мозаики цветной капусты (ВМЦК); промоторы опиновых генов pTi-плазмиды; промотор гена малой субъединицы фермента рибулозодифосфаткар-
боксилазы; промотор гена белка, связывающего хлорофилл и др. 

Еще по теме Микроинъекции:

1. Портал "ПЛАНЕТА ЖИВОТНЫХ". Кто ты, собака?, 2010
2. Любопытное доказательство того, что собаки очень давно одомашнены, приводит советский ученый-языковед академик Н. Я. Марр...
3. Антропологи изучают кости и скелеты людей очень далекого прошлого, изучают их близких и отдаленных родственников — ископаемых и современных обезьян,— чтоб восстановить путь, который прошел человек в своем развитии.
4. Находки, проливающие свет на происхождение собак, имеют возраст 8—10 тысяч лет...
5. Значит, собака пришла сюда вместе с человеком?..
6. Находка Савенкова произвела сенсацию...
7. КАК ЭТО МОГЛО СЛУЧИТЬСЯ!
8. Люди не очень опасались волков, волки же не очень боялись людей и нередко подходили к стоянкам первобытного человека достаточно близко.
9. Видимо, много, очень много лет жили люди и волки на расстоянии, очень медленно сближались и очень трудно понимали выгодность сближения...
10. Среди ученых нет единого мнения, ради чего была приручена собака...
11. Но могло быть и иначе.
12. Волки жили стаями...
13. Cуществует еще одна гипотеза, объясняющая появление волков среди людей...
14. ПОЧЕМУ ЭТО МОГЛО СЛУЧИТЬСЯ!
15. Как относились к животным наши далекие предки?..
16. "УМОМ СОБАКИ ДЕРЖИТСЯ МИР"