МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА
Объектом исследования служили разные по устойчивости к регуляторным гербицидам сорта льна-долгунца: устойчивые Светоч и 1288/12 н чувствительные Л-1120 и Вайжгантас. Анализу подвергались различные части прорастающих семян.
Семена проращивали в чашках Петри на фильтровальной бумаге, смоченной растворами 2М-4Х и 2,4-Д в концентрациях 10“4 и 10“5%. После суточного выдерживания в термостате при температуре 24—25° готовили срезы на замораживающем микротоме по 5—10 срезов у каждого семени. Толщина срезов 60 мк. В каждом варианте анализировалось по 5 семян.Содержание и распределение триптофана определяли реакцией Ромье [25]. Контрольные срезы обрабатывали по Пирсу
- с целью блокирования концевых групп белков. Содержание ИУК изучали по методу Сальковского в модификации Бояркина
- . Смесь концентрированной Нг304 и аммиачных квасцов брали в отношении 1:1. Контрольные препараты промывали водой в течение 6 час. или 1 н. НС1 в течение 3 час. [28].
Для определения нуклеиновых кислот срезы из нефиксированного материала окрашивали смесью метилового зеленого с пиронином в течение 6 мин., промывали дистиллированной водой, просушивали и проводили последовательно через ацетон, ацетон — ксилол (10:1), ацетон — ксилол (1:1) и ксилол [29]. Краситель готовили по прописи Тревана и Шаррока [30] с использованием пиронина Ш. Метиловый зеленый и ппронин предварительно промывали хлороформом для удаления примесей. ДНК определяли с помощью реакции Фельгена [26]. Фуксин- сернистую кислоту готовили по способу Томази, и срезы инкубировали в течение 1,5 час. с предварительным 6-мшгутным гидролизом в 1 н. НС1. Нуклеиновые кислоты в клетках определяли по Конареву [31], сочетая обработку срезов рибонуклеазой и
- и. НС1. Рибонуклеазу готовили по Роскину и Левинсону [25].
Перокспдазу определяли действием основного бензидина п перекиси водорода [32], а полифенолы — реакцией ГеС1з+ + К3[Ре(С1\')б] (смесь равных объемов 1%-ных водных растворов) и ванилиновым реактивом [33].
Содержание определяемых веществ оценивалось визуально по пятибалльной системе: 0 — отсутствие, 1—следы, 1-—небольшое количество, 3 — среднее количество, 4 — большое количество и 5 — очень большое количество. В случае ДНК учитывали не только интенсивность окраски и размер ядер, но и число последних на единицу площади. На рисунках приведены средние данные по различным частям прорастающих семян.
Еще по теме МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА:
- МАТЕРИАЛ И МЕТОДИКА
- Глава II МЕТОДИКА
- Методика гальванизации.
- МАТЕРИАЛ И МЕТОД
- Методика проведения процедур
- Методика обработки траекторий.
- 6.7. Основы методики изучения структуры популяций
- Методика отлова и содержания молодняка сайгаков
- МЕТОДИКА ОЦЕНКИ ВЛИЯНИЯ ГИДРОМЕЛИОРАЦИИНА СУХОДОЛЬНЫЕ НАСАЖДЕНИЯ
- МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ
- МЕТОДИКА ИССЛЕДОВАНИЯ ПОЛОВЫХ ОРГАНОВ
- Фиксация растительного материала
- МАТЕРИАЛ И МЕТОД
- методика экспериментальных исследований АГРЕГАЦИИ ПОЧВЕННЫХ ЧАСТИЦ
- МАТЕРИАЛ И МЕТОД
- МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ЛЕЧЕБНЫХ ПРОЦЕДУР ПРИ СИМПТОМАТИЧЕСКОМ БЕСПЛОДИИ
- МЕТОДИКА ПРОВЕДЕНИЯ ЛЕЧЕБНЫХ ПРОЦЕДУР ПРИ СИМПТОМАТИЧЕСКОМ БЕСПЛОДИИ
- 3.5.5. Биологическое значение хромосомного уровня организации наследственного материала
- Изучение культуральных свойств выделенного патологического материала.