Глава II МЕТОДИКА

Поэтому при разработке методики исследования перед нами стояла задача таким образом подобрать питательные среды и способы посева, чтобы по возможности создать благоприятные условия для различных физиологических групп микроорганизмов, специфических для данного субстрата.

В качестве основного исходного материала мы применили питательные среды из самой древесины и её компонентов: целлюлозы и лигнина, а также продуктов распада древесины в разных стадиях разложения. Вместе с тем был использован и ряд общепринятых в микробиологической практике сред — для выявления различных физиологических групп бактерий.

Поскольку древесина в конечном итоге превращается в составную часть почвы, были приняты во внимание физиологические группы микроорганизмов, характерные для почвенной микрофлоры.

В основном, кроме древесины и ее дериватов, применялись среды двух типов:элективные — для специфических групп бактерий, преимущественно синтетические по составу, и среды из естественных субстратов, каковы сусло и мясо-пептонный агар и бульон.

Преимущество синтетических сред в том, что они дают возможность выделять микроорганизмы, строго приспособленные к определенным источникам питания, недостаток их—отсутствие в них целого ряда веществ биологического происхождения, как-то: ферментов, витаминов и т. д., что ограничивает рост некоторых видов. Для ряда гетеротрофных микроорганизмов наиболее благоприятны питательные среды из сложных органических субстратов, как мясо,сусло и т.

Мы пользовались для посева тремя различными типами сред: из изучаемого субстрата (древесина и её дериваты), элективными и из естественных природных материалов (мясной агар, сусло- агар).

Засев материала производился двумя способами: эмульсией и кусочками. Последний способ позволяет выявить микроорганизмы, рост

которых при посеве эмульсией заглушается быстро растущими формами. Этот метод, как элективный, применяется при выделении миксо- бактерий, целлюлозо-разрушающих бактерий, * азотобактера, Вас. mycoides.

Чтобы получить посевной материал в виде кусочков, образцы древесины раскалывали вдоль и из внутренней части стерильно вырезали небольшие частички, которыми и пользовались для посева. Из рыхлой древесины кусочки легко отщеплялись с помощью пинцета.

Посев эмульсией производился в тех случаях, когда образцы древесины могли быть растерты в ступке в порошок.

Исходная эмульсия готовилась на дистиллированной воде и содержала от 1 до 5 г сухого вещества ( в зависимости от удельного веса материала) в 100 см3 стерильной воды. В последующем исходную эмульсию разводили в убывающем порядке в отношении 1:10. Засевались первое, второе, третье и четвертое разведения.

Среды из древесины и ее дериватов

Для приготовления этих сред применялась: древесина свежевыпавшего дерева, древесина в стадии бурой гнили (из колод, зараженных Fomes pinicola Ске.), древесина в стадии красной гнили.

Материал растирали в ступке или пропускали через ручную мельницу. Полученный порошок взбалтывали в дистиллированной воде или в растворе питательных солей и уплотняли агар-агаром (количество древесных опилок или порошка из бурой и красной гнили составляло 1«/о).

Состав стандартных растворов, применявшихся для этой цели, следующий:

Раствор № 1, pH = 4,5 — 5,0

Калий фосфорнокислый однозамещенный .

Магний сернокислый              0,5 „

Амоний сернокислый              1,5 „

Железо сернокислое              •              следы

Марганец сернокислый              следы

Воды дистиллированной              1000 ем?

Раствор № 2, pH = 7,0 — 7,2

Калий фосфорнокислый двухзамещенный ...              1,0 г

Магний сернокислый              0,5 „

Калий азотнокислый              4,0 и

Натрий хлористый              0,5 „

Железо сернокислое              следы

Марганец сернокислый              следы

Воды дистиллированной              1000 сМ3

Рвствор № 3, pH = 6,0

Калий фосфорнокислый однозамещенный ...              1,0 г

Магний сернокислый              0,5 „

Пептон              2,5 *

Железо сернокислое              следы

Марганец сернокислый              следы

Воды дистиллированной              1000 слг Зак. 1280

Рецепты показывают, что применявшиеся растворы отличались как по концентрации водородных ионов, так и по характеру источников азота.

Всего были подготовлены три типа растворов:              №1 — источник

азота в форме (NH4)sS04 (среда физиологически кислая), № 2 — источник азота в форме KNO3 (среда физиологически щелочная), № 3 — азот в форме пептона. Эти же растворы в дальнейшем применялись для приготовления среды с фильтровальной бумагой, целлюлозой и лигнином.

Среды из древесины и ее дериватов, приготовленные на воде и на солевых растворах и уплотненные агар-агаром, засевали эмульсией и кусочками и выдерживали при комнатной температуре довольно длительное время (до 1 месяца)., так как рост на них был замедленный по сравнению с суслом.