2.1.14. Определение чувствительности культур грибов к антифунгальным препаратам.

Определение чувствительности культур грибов к антифунгальным препаратам проводили диско-диффузионным методом. Использовали диски, импрегнированные антифунгальными препаратами производства HiMedia (Индия): амфотерицин-В (100 U/диск), нистатин (100 U/диск), клот- римазол (10 мкг/диск), флуконазол (10 мкг/диск), кетоконазол (10 мкг/диск).

Для посева на определение чувствительности готовили взвеси культур

(л

грибов в физиологическом растворе с содержанием 500x10 клеток в 1 см по оптическому стандарту мутности (без пересчета на размер клетки гриба).

2.1.15. Лиофилизация культур грибов рода Malassezia.

Работы по лиофилизации культур грибов проводились совместно с зав. Отделом лиофилизации ФГУ ВГНКИ Ю.Г. Опариным.

Подготовка взвеси дрожжевых клеток для последующей лиофилизации включала: выращивание культур грибов на питательных средах в матровых колбах в течение 7 сут. при 36°С; съем грибных культур с поверхности питательной среды шпателем или скребком; приготовление взвеси грибных культур в дистиллированной воде; смешивание взвеси грибных культур с защитной средой.

Использованные защитные среды: защитная среда №4ВГНКИ (состав: пептон - 5%, сорбит - 5%, желатин 1,3%); защитная среда для дрожжевых грибов (состав: молоко, инозит -5%).

Взвеси грибных культур смешивали с защитной средой в соотношении 1:1, после чего шприцами фасовали в ампулы (широкие типа ШПВ-6 (ИЛТ) или узкие типа ШПВ-3 (ИББ) в объеме 1 см .

Контроль лиофилизированных культур грибов включал: определение наличия вакуума в ампуле на аппарате «Искра»; определение остаточной доли влаги в ампуле по ГОСТ 24061-89; определение наличия посторонних микроорганизмов методом посева ресуспензированных лиофилизированных культур на питательные среды МПА, МПБ, Китт-Тароцци, среду Чапека, среду Сабуро, сусло-агар; определение общей концентрации грибных клеток в ампуле методом подсчета грибных клеток в камере Горяева; определение концентрации жизнеспособных грибных клеток в ампуле при посеве ресуспензированных лиофилизированных культур на питательные среды в чашках Петри методом серийных разведений с последующим учетом выросших колоний грибов; определение изменчивости культуральных и морфологических свойств грибов до и после лиофилизации.