1.5.1. Видовая идентификация и биологические особенности грибов рода Malassezia

Для видовой идентификации представителей рода Malassezia было предложено несколько алгоритмов, в основе которых лежат физиологические особенности разных видов. Метод, рекомендуемый S.

Данный метод идентификации применялся в частности в исследованиях М. Crespo [58]. D. Senczek [158] помимо твин-40 и твин-80, использовал тесты на ассимиляцию твина —20 и твина-60.

По мнению J. Faergmann [73], более практичен алгоритм, при котором учитываются наличие роста на среде Сабуро, каталазная активность, ассимиляция Cremofor EL (содержит касторовое масло, главным компонентом которого является рициновая кислота), гидролиз эскулина, рост при 38°С. Алгоритм идентификации выглядит следующим образом: 1а Есть рост на среде Сабуро —»М. pachydermatis 16 Нет роста на среде Сабуро —> 2 2а Каталазная активность положительная —> 3

26 Каталазная активность отрицательная —> М. restricta За Ассимилирует Кремофор EL —> М. furfur 36 Не ассимилирует Кремофор EL —> 4 4а Гидролизует эскулин —> 6 46 Не гидролизует эскулин —> 5

5 а Есть рост на среде Диксона при 38°С —»М. sloofiae 56 Нет роста на среде Диксона при 38°С —> М.

P. Mayser [123] описал феномен образования темно-коричневого пигмента в присутствии триптофана некоторыми видами рода Malassezia. Предложенная авторами пигмент-индуцирующая среда с триптофаном очевидно

может быть использована в качестве дополнительного идентификационного теста.

При идентификации, помимо физиологических особенностей, также имеют значение морфологические и цитоморфологические свойства гриба: цвет, форма, рельеф колоний, форма клетки, ее размер, размер дочерней клетки по отношению к материнской, наличие в культуре мицелиальной формы гриба [19].

С. Aspiroz [22] успешно идентифицировал изоляты Malassezia spp. на основе микроскопических, культуральных и биохимических характеристик (каталазная активность, гидролиз эскулина, липазная активность).

Т. Kaneko [165] предложил схему идентификации Malassezia spp. на основе ранее предложенной ими хромогенной среды LN-CHROMagar. Критерии идентификации включали образование зоны преципитации на этой среде, каталазную реакцию и наличие роста на специфических средах - агар Сабуро, Кремофор-ЕЬ-агар, Твин 60-эскулиновый агар. Эффективность предложенного алгоритма идентификации подтверждена молекулярными анализами.

По мнению К. Hammer [92], существенным идентификационным критерием для Malassezia spp. является образование зоны преципитации на агаре Диксона. По данным авторов, виды М. sympodialis, М globosa положительные по этому признаку, виды М. furfur, М. obtusa, М. slooffiae - отрицательные.

Примечательно, что коммерческие тест-системы, предназначенные для видовой идентификации дрожжей (API 20С, Flow Uni-Yeast-Tek), непригодны для идентификации грибов рода Malassezia [116].

В ряде случаев авторы сталкиваются с затруднениями при идентификации грибов рода Malassezia на основе общепринятых критериев.

ную активность и образование пигмента в присутствии триптофана. С помощью молекулярных методов удалось идентифицировать изолят от коровы, как липид-зависимый вариант М. pachydermatis, а изолят от собаки — как атипичный вариант М. furfur.

В большинстве методик ключевым этапом в идентификации Malassezia spp. является определение липидной зависимости изолята, т.к. единственный зоофильный вид М. pachydermatis в отличии от остальных видов этого рода, способен расти на питательной среде, не содержащей липидов. Для определения липидной зависимости первичные изоляты дрожжей с лпид- содержащей среды пересевают на среду Сабуро. Это позволяет диагностировать вид М. pachydermatis, наиболее распространенный возбудитель малассе- зиозов животных. Если изолят не способен к росту на этой среде, тогда возникает необходимость в проведении дополнительных идентификационных тестов. Очевидно, в повседневной ветеринарной практике будет целесообразно ограничиться только определением липидной зависимости клинического изолята Malassezia spp, а липид-зависимые изоляты при необходимости направлять для видовой идентификации в специализированные микологические лаборатории.