Определение цинка в крови с дитизоном по Н. А. Чеботаревой. 

Пр и н ц и п. Цинк с дитизоном образует комплексное соединение, дающее окраску, интенсивность которой зависит от концентрации элемента.

Реактивы: основной раствор дитизона (ч.

2. 3 мин. Удаляют слой четыреххлористого углерода. Промывают оставшийся оранжевый раствор дитизона 10 мл четыреххлористого углерода. Промывку повторяют 2 раза, сливая каждый раз четыреххлористый углерод. В конце этой процедуры прибавляют 2,5 мл разведенной серной кислоты (1:5). Появляются черные хлопья. Перемешивают, добавляют 100 мл четыреххлористого углерода и встряхивают 1 мин. После разделения фаз раствор дитизона в четыреххлористом углероде сливают в чистую делительную воронку, добавляют 50 мл бидистиллированной воды и встряхивают в течение 1 мин для удаления серной кислоты. Промывку водой повторяют еще 2 раза. Раствор дитизона переливают в сухую склянку темного стекла с притертой пробкой. Хранят в холодильнике до 1 мес. Качество реактива проверяют так: в делительную воронку вносят 5 мл раствора дитизона и 25 мл 0,01 н. раствора аммиака (0,7 мл 25%-ного раствора аммиака на 1 л дистиллированной воды), встряхивают 2—3 мин. Органический слой должен быть бесцветным. Если он окрашен в бурый цвет, то раствор дитизона для анализа не пригоден;

рабочий раствор дитизона. Готовят перед анализом. В сухую мерную колбу на 100 мл вносят 6 мл основного раствора дитизона и доводят объем до метки четыреххлористым углеродом. Хорошо перемешивают;

ацетатный буферный раствор, pH 5. 272 г натрия ацетата трехводного (х. ч.) вносят в мерную колбу на 1 л, растворяют в небольшом количестве бидистиллированной воды, прибавляют 58 мл ледяной уксусной кислоты и доводят объем бидистиллированной водой до метки.

20%-ный раствор соляной кислоты (х. ч.);

0,3 моль/л раствор соляной кислоты;

калибровочный раствор цинка основной. В мерную колбу на

1. л вносят 100 мг металлического цинка, добавляют небольшое количество бидистиллированной воды и 10 мл 20%-ной соляной кислоты. После полного растворения цинка доводят объем бидистиллированной водой до метки. В 1 мл содержится 100 мкг цинка. При отсутствии металлического цинка можно использовать сернокислый цинк (х. ч.). С этой целью 0,4396 г реактива (гп804 • 7 Н20) растворяют в 1 л бидистиллированной воды, предварительно подкисленной 5 мл серной кислоты. 1 мл основного раствора содержит 100 мкг цинка;

рабочий калибровочный раствор цинка. В мерную колбу на 100 мл вносят 1 мл основного калибровочного раствора и доводят до метки 0,3 моль/л раствором соляной кислоты. В 1 мл содержится 1 мкг цинка. Готовят в день проведения анализов;

очистка четыреххлористого углерода. К 500 мл реактива добавляют 10 г активированного угля, встряхивают 5 мин и фильтруют через складчатый бумажный фильтр. Очистку повторяют 2—3 раза с новой порцией угля. После этого четыреххлористый углерод перегоняют в стеклянном аппарате на шлифах. Четыреххлористый углерод марки х. ч. и ос. ч. можно использовать без очистки;

50%-ный раствор натрия тиосульфата (х. ч.). 50 г вещества растворяют в 50 мл бидистиллированной воды; серная кислота (х. ч.), разведенная 1:5; аммиак водный, 25%-ный раствор; активированный уголь.

Оборудование: фотоэлектроколориметр; муфельная печь; электроплитка; перегонный аппарат стеклянный; тигли фарфоровые; делительные воронки на 250 и 500 мл; бюретки на 50 мл.

Ход определения. В фарфоровый тигель вносят 5 мл цельной крови (сыворотки, плазмы) и обугливают на электроплитке, постепенно повышая температуру до 200—250 °С.

В тигель приливают 2,5 мл 20%-ного раствора соляной кислоты, 5 мл дистиллированной воды и нагревают на плитке до растворения золы. Смесь охлаждают, переносят в пробирки с меткой на 25 мл (желательно с притертой пробкой) или в мерные колбы на 25 мл, смывая остатки из тигеля бидистиллированной водой, доводят объем до метки и перемешивают.

В делительную воронку или пробирку с притертой пробкой на 40—50 мл вносят 5 мл раствора золы, прибавляют 10 мл ацетатного буфера и перемешивают. Приливают из бюретки 10 мл рабочего раствора дитизона, встряхивают делительную воронку в течение

1. мин. После разделения фаз органический слой сливают в кювету с толщиной слоя 1 см и фотометрируют на ФЭКе при длине волны 538 нм (зеленый светофильтр) против контроля. При использовании пробирок верхний водный слой отсасывают при помощи водоструйного насоса или шприца или отбирают сразу нижний слой пипеткой с грушей. При хорошем качестве реактивов цвет не должен изменяться в течение суток.

Содержание цинка в образце находят по калибровочной кривой. Для построения ее в делительные воронки или пробирки с притертыми пробками вносят 1, 2, 3, 4 и 5 мл рабочего калибровочного раствора цинка. Объем до 5 мл доводят 0,3 моль/л раствором соляной кислоты. Далее поступают так же, как и с образцами.

Расчет ведут по формуле

АУ-100 ВС ’

где х — количество цинка в пробах, мкг%; А — количество цинка по калибровочной кривой, мкг; V — объем раствора золы, мл; В — количество крови, мл; С — количество раствора золы, взятого для анализа, мл; 100 — коэффициент для пересчета в мкг%.

Примечание.

2. нед, при —20 °С — до 1 года.

Источники: 52, 73.

Клиническое значение. Влияние цинка на организм проявляется через действие многочисленных ферментов (карбок- сипептидазы, карбоангидразы, щелочной фосфатазы, малатдегид- рогеназы, аргиназы, уриназы и др.), для которых он является необходимым компонентом или активатором. При недостатке цинка в организме задерживаются рост, развитие, костеобразование, у поросят появляется паракератоз, у самцов снижается спермопро- дукция. Нормативы цинка в цельной крови, мкг%: крупный рогатый скот 300—500, свиньи — 400—420; в сыворотке крови: крупный рогатый скот 100—150, овцы 100—200, свиньи 100—160.

Содержание цинка чаще определяют в сыворотке крови. Для этого используют химические, полярографические и другие методы. Цинк, марганец, кобальт, железо в кормах и других объектах определяют на атомно-абсорбционном спектрофотометре (С-115 М-1).