Флуориметрический метод определения селена с 2,3-диаминона- фталином. 

Разложение образца проводится смесью азотной и хлорной кислот, перевод шестивалентного селена в четырехвалентный реакционноспособный селенит-ион достигается нагреванием раствора с концентрированной соляной кислотой.

Четырехвалентный селен в форме селенит-иона (БеО^ ) взаимодействует с 2,3-ДАН с образованием комплексного соединения 4,5-бензопиазоселенола, флуоресцирующего под действием ультрафиолетовых лучей.

0,1 моль/л раствор соляной кислоты из стандарт-титра; аммиак, водный раствор 1:10; хлорная кислота (х. ч.), 57%-ный раствор; комплексон III (динатриевая соль этилендиаминтетрауксусной кислоты, трилот Б), 2%-ный раствор; аммония персульфат [(ИЩ^гОз, х. ч.]; селен металлический (х. ч.); н-гексан или циклогексан, перегнанные;

0,1%-ный водный раствор 2,3-диаминонафталина. 0,1 г реактива заливают 100 мл 0,1 моль/л соляной кислоты, перемешивают до растворения навески и очищают экстракцией гексаном. Для этого солянокислый раствор 2,3-ДАН вносят в делительную воронку, добавляют 15 мл гексана и встряхивают 1 мин. После разделения фаз солянокислый раствор 2,3-ДАН переливают в другую делительную воронку, а органическую фазу выбрасывают. Добавляют к раствору 2,3-ДАН еще 10 мл гексана и очистку повторяют.

3. 4 дней;

калибровочные растворы селена, содержащие 100, 10,0,1 мкг/мл. Раствор А. Навеску массой 0,1 г металлического селена растворяют в 10 мл концентрированной азотной кислоты сначала на холоде при помешивании, затем при нагревании. Раствор упаривают на водяной бане до влажной массы. Полученную селенистую кислоту (Н28е03) растворяют в воде, раствор переносят в мерную колбу на

1. л, прибавляют 10 мл концентрированной соляной кислоты и доводят до метки дистиллированной водой. Раствор А содержит 100 мкг селена в 1 мл.

Более разведенные растворы селена, содержащие 10 мкг в 1 мл (раствор Б) и 0,1 мкг селена в 1 мл (раствор В) готовят последовательным разбавлением водой раствора А. Калибровочный раствор В готовят перед использованием;

набор индикаторной универсальной бумаги; фильтры бумажные обеззоленные, белая лента. Оборудование: флуориметр ЭФ-ЗМА с ртутнокварцевой лампой, набором кювет и светофильтров; электроплитка мощностью

800 Вт с несколькими степенями накаливания; водяная баня; делительные воронки на 100 и 250 мл; стаканы термостойкие на 50 и 100 мл.

Ход определения. Для анализа берут 1 г почвы, 50—500 мг кормов, 1 г волос, 1 мл цельной крови, 10 мл молока. Измельченный образец (почва, корма, волосы) или необходимый объем крови (молока) помещают в стаканчик на 50 или 100 мл, добавляют 5 мл концентрированной Н1ЧОз и 0,1 г аммония персульфата. Стакан закрывают часовым стеклом и осторожно нагревают на электроплитке. После упаривания воды и частичного разложения материала добавляют 5 мл концентрированной азотной кислоты, 3 мл концентрированной хлорной кислоты и нагревают до появления белых паров хлорной кислоты. Если раствор при этом остался темным или желтым, продолжают сильное нагревание раствора, добавляя осторожно по каплям в дымящую хлорную кислоту концентрированную азотную кислоту до полного обесцвечивания раствора.

Чтобы восстановить шестивалентный селен до четырехвалентного, к остатку после разложения добавляют 1 мл концентрированной соляной кислоты и нагревают раствор 10 мин на кипящей водяной бане. Затем раствор разбавляют водой до 20 мл.

Устанавливают pH 1 по универсальной индикаторной бумаге, вводя соответственно соляную кислоту или аммиак. Добавляют

2. мл 2%-ного раствора комплексона III, 2 мл раствора 2,3-ДАН и нагревают 5 мин на водяной бане. После охлаждения в течение 10—20 мин раствор переносят в делительную воронку, добавляют

10. мл перегнанного н-гексана и экстрагируют 1 мин. После разделения фаз нижний слой (водный) отбрасывают, а экстракт сливают в пробирку и используют для флуориметрического определения селена. После окончания экстрагирования серии образцов измеряют флуоресценцию органических растворов на флуориметре ЭФ-ЗМА со светофильтрами ФК-1 (первичный) и В2-2 (вторичный). Количество селена в пробе, выраженное в мкг, определяют по калибровочному графику.

Для построения калибровочного графика из стандартных растворов Б и В готовят разведения с содержанием 0,01, 0,02, 0,05, 0,1 и 0,2 мкг/мл селена. Затем в стаканчики на 50 мл вносят по 1 мл раствора селена, доводят объем до 20 мл 0,1 моль/л раствором соляной кислоты, устанавливают pH 1 и далее ведут анализ, как описано выше.

В каждой серии готовят холостую пробу, учитывают ее значение при расчете содержания селена.

Формул

где х — количество селена в образце, мкг/г (мкг/мл); С — содержание селена в образце, мкг; Р — масса навески, г (мл).

Содержание селена в процентах вычисляют путем умножения найденного количества селена в мкг/г на 0,0001. Например, в образце содержание селена составило 0,25 мкг/г, это соответствует 0,25 • 0,0001 = 0,000025 % или 2,5 • 10*5 %.

Источники: 14, 54.

Клиническое значение. Селен участвует во многих окислительно-восстановительных процессах, обладает антиоксидант- ным действием в составе активного центра глутатионпероксидазы. Этот фермент разрушает токсические пероксиды в тканях, благодаря чему предотвращается жировая дистрофия печени, беломышечная болезнь и др. Данных о нормативах содержания селена в почве, кормах, крови, молоке и других биологических материалах с учетом зональных особенностей недостаточно. Содержание его в кормах колеблется, по данным различных авторов, от 0,01 до 20 мг на 1 кг сухого вещества корма, в цельной крови — от 5 до 18 мкг%, в сыворотке (плазме) — 0,036—0,068 мкг%, в печени — 0,3—

2. ч/млн, в волосах — 0,5—0,7 ч/млн.

Считают, что при содержании в кормах селена менее 0,01 мг/кг развивается беломышечная болезнь, возникает дистрофия печени, задержание последа, снижается продуктивность, замедляется рост и развитие. О недостатке в организме селена свидетельствуют низкие показатели этого элемента в крови, молоке, волосах, печени и мышцах.