ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ КАРОТИНА (ГОСТ 13496.17-95)  

эфир петролейный, фракция с температурой кипения 40—70 или 70—100 °С, бензин авиационный марки Б-70 или нефрас-С 50/170;

вода дистиллированная.

Оборудование: измельчитель проб растений ИПР-2; мельница лабораторная марки МРП-2; фотоэлектроколориметр с синим светофильтром и максимумом светопропускания 440—450 нм или спектрофотометр; весы лабораторные 2-го класса точности с пределом взвешивания 200 г; весы лабораторные 3-го и 4-го классов точности с пределом взвешивания 500 г; термостат, обеспечивающий поддержание температуры (35 ± 3)°С; ступка фарфоровая с пестиком; колбы мерные; бюретки; цилиндр мерный; карандаш восковой для стекла; банки бытовые вместимостью 200 см или колбы вместимостью 150—200 см3; крышки полиэтиленовые для банок или пробки для колб.

Допускается применение импортной лабораторной посуды по классу точности и реактивов по качеству не ниже перечисленных.

Все работы с петролейным эфиром и бензином проводят в вытяжном шкафу.

Подготовка реактивов к испытанию: приготовление окиси алюминия 10%-ной влажности. К 900 г безводного алюминия оксида добавляют 100 см3 дистиллированной воды и тщательно перемешивают. Реактив хранят в герметически закрытом сосуде с притертой пробкой и используют для анализа на следующий день;

приготовление кальция оксида безводного. Готовят путем растирания кальция оксида в фарфоровой ступке до порошкообразного состояния. Реактивы хранят в герметически закрытой банке;

калибровка бытовых банок.

приготовление основного (стандартного) раствора калия бихромата. 0,720 г калия бихромата, взвешенного с погрешностью не более 0,001 г, растворяют в дистиллированной воде в мерной колбе вместимостью 1000 см3 и затем объем раствора доводят до метки и тщательно перемешивают. Оптическая плотность полученного раствора равна оптической плотности раствора каротина концентрацией 0,00416 мг/ см3. Раствор хранят в течение одного года после его приготовления;

приготовление растворов сравнения. В мерную колбу вместимостью 100 см3 из бюретки приливают каждый раз от нуля 10, 20, 30, 40, 50 см3 основного раствора калия бихромата и доводят объем раствора до метки дистиллированной водой, тщательно перемешивают. Срок хранения раствора сравнения не более 3 мес.

Фотометрирование растворов сравнения проводят в кювете с толщиной просвечиваемого слоя 5, 10 или 20 мл при длине волны 450 нм. Оптическую плотность растворов калия бихромата измеряют относительно дистиллированной воды.

Для подсчета градуировочного графика на миллиметровой бумаге по горизонтальной оси наносят значения объемов основного раствора калия бихромата, взятых для приготовления растворов хранения, на вертикальной оси — соответствующую оптическую плотность растворов. Градуировочный график строят для каждой кюветы. Проверку градуировочного графика выполняют в день проведения испытаний по второму и пятому растворами сравнения. При нестабильной работе прибора фотометрируют все растворы сравнения и строят график.

Подготовка проб к анализу:

пробу зеленой массы травянистых культур, силоса, сенажа измельчают на ИПР-2 или ножницами до отрезков длиной 1—3 см. Измельченную пробу корма тщательно перемешивают на полиэтиленовой пленке и методом квартования выделяют часть пробы массой 100—200 г, которую размалывают на мельнице в течение 2—4 мин.

пробу сена (измельченную на ИПР-2 или ножницами до отрезков длиной 1—3 см), травяной муки или витаминной муки из древесной зелени, гранул или брикетов тщательно перемешивают на полиэтиленовой пленке и методом квартования выделяют часть пробы массой 100—200 г, которую размалывают на мельнице. Травяную муку размером частиц 1—2 мм анализируют без предварительного размола.

Ход определения. Из подготовленной измельченной пробы травянистых культур, силоса, сенажа после тщательного ее перемешивания из разных мест берут навеску корма массой 1—5 г с погрешностью не более 0,05 г. Массу навески определяют в зависимости от ожидаемого содержания каротина. Навеску зеленой массы, силоса, сенажа переносят в фарфоровую ступку, добавляют 5 г песка или мелко измельченного стекла, 15 г натрия сульфата (при навеске 4—5 г добавляют до 20—25 г). В навеску силоса и сенажа, кроме того, добавляют на кончике ножа натрий гидрокарбонат. Смесь тщательно растирают не менее 3—4 мин.

Хорошо растертый и обезвоженный корм без потерь переносят в бытовую банку или колбу вместимостью 200 см, приливают 100 см петролейного эфира или бензина; обмывают ступку и пестик его минимальным количеством. Добавляют в банку 10 г алюминия оксида 10%-ной влажности и 0,5 г растертого до порошкообразного состояния кальция оксида, перемешивают стеклянной палочкой, плотно закрывают банку полиэтиленовой крышкой, а колбу пробкой.

Из измельченной и хорошо перемешанной пробы сена, травяной муки, брикетов или гранул из разных мест берут навеску массой около 1—3 г, для сена до 5 г и переносят в бытовую банку или колбу вместимостью 200 см3. Добавляют 5 г безводного натрия сульфата, тщательно перемешивают стеклянной палочкой, вносят 10 г алюминия оксида 10%-ной влажности, 0,5 г кальция оксида и 100 см петролейного эфира или бензина и снова перемешивают.

Измельчение анализируемой пробы можно проводить и на гомогенизаторе. В этом случае после измельчения пробы сена, силоса, сенажа или зеленой массы травянистых культур на ИПР-2 или ножницами ее тщательно перемешивают и из разных мест берут навеску массой 1—5 г, переносят в стакан гомогенизатора, на дно которого насыпано 15 г натрия сульфата (в навеску силоса и сенажа добавляют натрия гидрокарбонат), приливают 50—60 см3 экстрагента

и гомогенизируют 2 мин при частоте вращения 5000 мин-1. Затем навеску переносят в бытовую банку (колбу), тщательно обмывая стакан гомогенизатора минимальным количеством экстрагента. Добавляют в банку 10 г алюминия оксида 10%-ной влажности и 0,5 г кальция оксида, доводят экстрагентом до метки и перемешивают.

Плотно закрытые банки или колбы оставляют в темном месте на 14—18 ч. При проведении экспресс-испытания единичных образцов допускается заменять настаивание термостатированием. Для этого плотно закрытые банки или колбы помещают на 2 ч в предварительно нагретый до 35 °С термостат. Затем пробы охлаждают до комнатной температуры. В целях безопасности работы следует следить за строгим соблюдением температуры во время термо- статирования. Перед работой необходимо убедиться в исправности термостата и правильности показаний термометра.

После настаивания или термостатирования, не взмучивая, отбирают шприцем прозрачный отстоявшийся раствор и переносят в кювету фотоэлектроколориметра. Фотометрирование экстрактов каротина проводят относительно петролейного эфира или бензина, используя кювету на 5, 10 или 20 мм.

При оптической плотности раствора более 0,7 в мерную колбу вместимостью 50 см3 вносят 25 см3 анализируемой вытяжки, доводят до метки петролейным эфиром (или бензином) и перемешива- , ют. При этом полученные результаты определения каротина удваивают.

Содержание каротина (х, мг/кг) в корме натуральной влажности вычисляют по формуле

К-0,00416 • 1000

• т

где V — объем основного раствора, найденный по графику, см3; 0,00416 — коэффициент пересчета основного раствора калия бихромата в эквивалентное количество миллиграммов каротина; 1000 — коэффициент пересчета на 1 кг корма; т — масса навески, г.

За окончательный результат испытания принимают среднее арифметическое результатов двух параллельных определений. Результаты вычисляют до первого десятичного знака и округляют до целого числа.

Содержание каротина в сухом веществе (XI, мг/кг) вычисляют по формуле

где х — содержание каротина в 1 кг корма натуральной влажности, мг; [V — влажность корма, %.