ОПРЕДЕЛЕНИЕ СОДЕРЖАНИЯ АЗОТА И СЫРОГО ПРОТЕИНА ПО КЪЕЛЬДАЛЮ (ГОСТ Р 51417-99 (ИСО 5983-97))  

Реактивы: калия сульфат (х.

серная кислота молярной концентрации с(Н2804) = 18 ммоль/дм3, р(Н2804) = 1,84 г/см3; парафиновая смола; сахароза;

стандартные вещества: ацетанилид [точка плавления 114 °С, содержание азота (14) 103,6 г/кг] или триптофан [точка плавления 282 °С, содержание азота (14) 137,2 г/кг]. Перед использованием триптофан высушивают;

раствор натрия гидроксида массовой доли 33%; поглощающие жидкости: серная кислота, стандарт-титр, молярной концентрации с(Н2304) = 0,05 ммоль/дм или с(Н2804) = = 0,125 моль/дм, борная кислота массовой концентрации р(НзВОз) = 40 г/дм3;

растворы для титрования: натрия гидроксид, стандарт-титр, молярной концентрации с(ИаОН) = 0,1 моль/дм или с(ИаОН) = = 0,25 моль/дм ,

смешанный индикатор, интервал перехода при pH 4,4 до 5,8. Растворяют 2 г метилового красного и 1 г метиленового голубого в 1000 см3 95%-ного этанола; лакмусовая бумага;

вещества, предотвращающие выбрасывание жидкости (кусочки пемзы, стеклянные шарики диаметром от 5 до 7 мм или стружка карборунда, промытые кислотой хлористоводородной и дистиллированной водой и прокаленные).

Оборудование: обычная лабораторная аппаратура; установки для сжигания, отгонки и титрования; весы аналитические или лабораторные 2-го класса точности с наибольшим пределом взвешивания 200 г.

Пробы отбирают по ГОСТ 27262—87, а подготавливают по ГОСТ Р 21419-99.

Ход определения.

Колбу устанавливают наклонно под углом 30—40° к вертикали. Во время нагревания колба должна находиться в этом положении (под вытяжным шкафом!). Сначала ее нагревают умеренно, чтобы предотвратить поднятие пены до горла колбы или выбрасывания ее из колбы.

Примечания. 1. Желательно добавить в колбу антипенообразовывающие вещества, например парафиновую смолу. 2. Блок для сжигания является аппаратом, обеспечивающим равномерное нагревание разлагаемой смеси.

Нагревают умеренно, время от времени поворачивая колбу до тех пор, пока не исчезнет пена. Затем нагревание усиливают, пока не установится равномерное кипение. Нагревание считается достаточным, если кипящая серная кислота конденсируется в середине колбы Кьельдаля.

Следует избегать перегрева стенок колбы, находящихся в контакте с жидкостью. Если используют открытое пламя, такой перегрев можно предотвратить путем установления колбы на лист асбеста с отверстием, диаметр которого немного меньше диаметра колбы на уровне жидкости.

После осветления жидкости до светлого зелено-голубого цвета колбу нагревают еще в течение 2 ч. Оставляют остывать. Если ми- нерализат начинает застывать, добавляют немного дистиллированной воды и перемешивают круговыми движениями. Осторожно добавляют в колбу 250—300 см7 дистиллированной воды для полного растворения сульфатов. При необходимости ускоряют растворение путем нагревания колбы в теплой воде. Перемешивают круговыми движениями и оставляют остывать.

В приемную колбу отгонного аппарата приливают 25 см3 серной кислоты, выбирая ее концентрацию в зависимости от ожидаемого содержания азота в навеске. Добавляют от 100 до 150 см дистиллированной воды и несколько капель смешанного индикатора.

При отгонке с борной кислотой в приемную колбу переносят от 100 до 250 см3 борной кислоты и добавляют несколько капель смешанного индикатора. (Рекомендуется непрерывно титровать аммоний во время отгонки, так как это позволяет уточнить конец дистилляции.)

Кончик трубки холодильника погружают на глубину не менее 1 см в жидкость, содержащуюся в приемной колбе. Медленно по стенке в отгонную колбу вводят 100 см раствора натрия гидроксида.

Колбу немедленно присоединяют к отгонному аппарату и нагревают с такой интенсивностью, чтобы за 30 мин собрать около 150 см дистиллята. По истечении этого времени лакмусовой бумагой проверяют pH дистиллята на кончике холодильника. Если реакция щелочная (бумага синеет), отгонку продолжают.

Кончик трубки холодильника сразу после окончания дистилляции вынимают из жидкости, чтобы предотвратить обратное засасывание.

Если в качестве поглощающей жидкости использовалась серная кислота, избыток серной кислоты в приемной колбе титруют раствором натрия гидроксида соответствующей концентрации с(ИаОН) = 0,1 моль/дм3 или с(ИаОН) = 0,25 моль/дм3 до конечной точки, определяемой на рН-метре или по изменению окраски раствора из зеленой в фиолетовую.

Если в качестве поглощающей жидкости использовалась борная кислота, аммоний титруют серной кислотой соответствующей концентрации с(Н28Сgt;4) = 0,05 моль/дм3 или с(Н2804) = 0,125 моль/дм3 до конца титрования, определяемого при помощи рН-метра или по изменению окраски раствора из зеленой в фиолетовую.

Одновременно проводят холостое определение, используя вместо навески около 1 г сахарозы.

Контрольный анализ проводят путем определения содержания азота в ацетанилиде или триптофане, добавляя 1 г сахарозы.

Вычисление массовой доли азота. Отгонка аммиака в серную кислоту. Если для поглощения аммиака при анализе испытуемой пробы и холостом определении взяты одинаковые объемы серной кислоты, массовую долю азота в испытуемой пробе вычисляют по формуле

_ (У*-Уу)Схм ^              т              ’

где — массовая доля азота, г/кг; К0 — объем раствора натрия гидроксида, использованный для титрования при холостом определении, см3; Уу — объем раствора натрия гидроксида, использованный для титрования при анализе пробы, см3; С] — концентрация раствора натрия гидроксида, использованного для титрования, моль/дм3; М— молярная масса азота, г/моль (М= 14 г/моль); т — масса навески, г.

Отгонка аммиака в борную кислоту. Массовую долю азота в испытуемой пробе вычисляют по формуле

т

где \Vfi2 — массовая доля азота, г/кг; К3 — объем серной кислоты, использованный для титрования при анализе пробы, см3; У2 ~ объем серной кислоты, использованный для титрования при холостом определении, см ; С2 — концентрация серной кислоты, использованной для титрования, моль/дм3; М — молярная масса азота, г/моль (М = 14 г/моль); т — масса навески, г.

Вычисление массовой доли сырого протеина. Массовую долю сырого протеина в испытуемой пробе вычисляют по формуле

}У„ = 6,25 • Жм,

где \Уп — массовая доля сырого протеина, г/кг; 6,25 — коэффициент пересчета в сырой протеин; — массовая доля азота в испытуемой пробе (ши ^N2), г/кг-

Результаты вычисляют до третьего знака и округляют до второго.