СПЕЦИФИЧЕСКАЯ ПРОФИЛАКТИКА

В настоящее время для специфической профилактики Б применяют инактивированные и живые вакцины. В медицине используются только инактивированные, слабо аллергенные и безаллергенные вакцины.

алюминия. Антирабические вакцины, полученные из нервной ткани, уступают в отношении чистоты, активности и безопасности препаратам, приготовленным на клеточных культурах.

В странах СНГ для профилактики Б у людей изготавливают культуральную антирабиче- скую вакцину из шт. Внуково-32. Однако до сих пор неясно, в каком отношении находится АГ-структура гликопротеидного и нуклеокапсидного белков указанного вакционного штамма со штаммами ВБ, циркулирующими в СНГ и других регионах мира. Эта задача может быть решена с помощью монАТ к различным эпитопам структурных белков вируса (5).

Для изготовления инактивированных вакцин вирус выращивают в культурах клеток животных разных видов. Использовали первичные культуры клеток, диплоидные клетки человека, постоянные линии клеток ВНК-21 и Vero. Последние дают более высокий выход АГ, чем диплоидные культуры клеток человека и животных. Клетки Vero можно выращивать на микроносителях, получая клеточные популяции высокой плотности. Культивирование этих клеток в ферментерах большой емкости обеспечивает возможность крупномасштабного промышленного производства вакцин, что снижает её стоимость.

Характеристика антирабических вакцин. Со времени изготовления Пастером в 1885 г. первой вакцины против Б историю антирабических вакцин условно можно разделить на 3 периода. Первый - до 1948 г., когда вакцины готовили из мозга взрослых животных (кролики, овцы, козы), инфицированных фиксированным ВБ. Эго вакцины типов Ферми (1908), Семпл (1911), Умедо, Дои (1916), в которых ВБ частично ннактнвирован фенолом, и вакцины типов Хемпт (1925) и Келсер (1925), инактивированные эфиром + фенол и эфиром + хлороформ соответственно; второй период - с 1949 г.

Антирабическая вакцина должна быть безопасна и высокоэффективна для животных, т.е. неэнцефалогенна, содержать минимальное количество балластных белков, индуцировать в короткий срок напряженный и длительный иммунитет при малых дозировках и ограниченном количестве инъекций, обладать защитной способностью при введении животным, уже инфицированным ВБ, быть простой в изготовлении н стабильной при длительном хранении, а также быть пригодной к применению в составе ассоциированных вакцнн. Хотя в настоящее время нет антирабической вакцины с такими качествами, достижения современной техники и вирусологии делают её получение вполне реальным. Требования безвредности и иммунологический эффективности должны соблюдаться при конструировании любой антирабической вакцины.

Для профилактической вакцинации животных мозговые вакцины типа Ферми, Семпла, Хемпта недостаточно эффективны. Поэтому в настоящее время используют живые аттенуированные или инактивированные культуральные антирабические вакцины и реже - вакцины из мозга мышей-сосунов. По данным Fields (76), частично очищенная методом хроматографии и инактивированная вакцина из мозга мышей-сосунов (индекс иммуногенности по методу NIH 3,15) защищала собак от летальной дозы уличного ВБ (шт. NJc-GA) через 37 мес после иммунизации. Средний титр ВНА в крови привитых собак через 1, 11, 24, 36 мес составил соответственно 1:512, 1:146, 1:19, 1:6. Через 30 дн после контрольного заражения уличным вирусом тнтр АТ повышался до 1:217. К моменту заражения уличным вирусом титр ВНА в крови собак был минимальным или не обнаруживался совсем. Однако все собаки выдерживали летальную дозу вирулентного вируса. Определяющим фактором эффективности антирабической вакцины является ее способность стимулировать высокий уровень ВНА в течение начального периода после иммунизации животного.

В опытах успешно применена живая антирабическая вакцина из шт. Внуково-32 (12). Более высокая иммунологическая эффективность отмечается прн введении вакцины животным внутримышечно по сравнению с подкожной инокуляцией. Выраженными иммуноген- ными свойствами обладает живая вакцина из аттенуированного шт. ERA. Она индуцирует образование ВНА в организме собак, кошек, овец, свиней, лошадей, КРС, высокий уровень которых удерживается в течение 2 лет и более.

Сравнительное изучение эффективности вакцины из шт. ERA и Flury HEP показало, что 1-кратная вакцинация КРС вакциной из шт. ERA более эффективна, чем 2-кратное введение вакцины из шт. Flury HEP. Будучи наиболее иммуногенной по сравнению с рядом вакцин, живая вакцина из шт. ERA равна по иммуногенности или уступает инактивированной р- пропиолактоном культуральной вакцине “алурабиффа”, которая приготовлена из фиксированного вируса, выращенного в культуре клеток линии NIL. В опыте на КРС сравнивали иммуногенность мозговой вакцины с ГОА, инактивированной формальдегидом, культуральной живой вакцины из шт. ERA и культуральной вакцины “алурабиффа”, которая защищала 76,9% зараженных животных. Живая вакцина из шт. ERA защищала 71,4%, а мозговая - 50% зараженных животных. Количество погибшего в результате заражения скота соответствовало уровню ВНА в крови животных до заражения. Из 19 гол., имевших титр АТ 1:10 и выше, погибло 3, а из 20 гол. с титром АТ ниже 1:10 - 50%. Однако исследователи считают, что один уровень ВНА не может быть критерием иммунитета против Б у КРС.

В последнее время опубликовано значительное число сообщений о пероральной иммунизации лисиц против Б. Поскольку лисицы - общепризнанный источник распространения Б, идея их иммунизации заманчива. Экспериментальные данные, полученные в опытах по оральной иммунизации лисиц и других животных, подтверждают перспективность этой идеи (34, 52). Однако на пути к осуществлению на практике оральной иммунизации диких плотоядных стоит целый ряд трудностей биологического, технологического и практического характера.

Применение живых вакцин. Живые вакцины готовят из 4-х аттенуированных шт.. CVS, Flury, ERA и HBR, которые размножают в культуре клеток (21, 47). Чаще всего используют культуру клеток ВНК-21, в которой вакцинные вирусы накапливаются в титре 6,5- 7,0 lg ТЦД50/МЛ (20, 30). Два штамма фиксированного ВБ были так же адаптированы к культурам клеток Vero и ВНК-21 (20,29,30).

Испытание живых оральных и энтеральных антирабических вакцин показало высокую эффективность и безопасность ряда аттенуированных штаммов. Даже после 20 интрацереб- ральных пассажей на собаках риверсий вирулентных свойств не отмечено (6). Безвредность шт. в Flury-Нер/ ВНК-21 подтверждена в опытах на 207 диких животных 15 видов, обитающих в Европе. Живая вакцина из шт. SAD/BHK-21 (7,3 ^ТЦД5о/мл) оказалась безвредной при введении собакам, кошкам и лисицам.

Живой вакциной ERA прививали КРС в Южной Америке (6) при парентеральном и оральном применении. Она оказалась незаменимой для иммунизации диких животных (особенно лисиц) в естественных условиях. В 1978 г. в Швейцарии, в 1979 г. в ФРГ, затем еще в 19 странах и различных регионах страны на площади 2277км2 было распределено более 82000 приманок (куриных голов), содержащих живой вакцинный вирус.

Для пероральной иммунизации лисиц использовали рекомбинантный вирус вакцины (WTGgR АВ), несущий в своей оболочке иммуногенный гликопротеин G ВБ. В качестве приманки использовали куриные головы, внутрь которых помещали капсулы, содержащие 8 lg БОЕ рекомбинантного вируса. Иммунизация лисиц таким способом сопровождалась образованием высокого титра ВНА и обеспечивала их устойчивость к контрольному заражению в течение 18 мес (22, 58).

Установлена полная безвредность и эффективность оральной вакцинации лисиц живой вакциной из шт. SAD В-19, адаптированного к культуре клеток ВНК-21 (28). В течение 1986-1987 гг. в 7 областях Австрии проводилась пероральная вакцинация лисиц путем разбрасывания приманок с ВБ. В этих областях Б было ликвидировано, в остальных заболеваемость лисиц значительно снизилась (48).

С помощью монАТ на вакцинный шт. SAD(BepH) ВБ выделен мутант SAG1, в котором серин в позиции 333 заменен аргинином. Мутант оказался авирулентным для взрослых мышей, не вызывал заболевание лисиц, других плотоядных животных и диких грызунов (при введении per os и под слизистую оболочку в дозе 106 БОЕ он не вызывал гибель животных - выжило 100% лисиц). Не обнаружена его реверсия после трех внутримозговых пассажей на новорожденных мышах.

Проводились исследования по влиянию оральной иммунизации против Б на динамику популяции лисиц (ФРГ). В связи с введением оральной иммунизации лисиц во многих регионах Германии значительно уменьшилось распространение Б. На регулирование популяции лисиц влияют не только борьба с Б, но и многие другие факторы, в частности, условия места обитания, кормовые ресурсы, степень воспроизводства, сезоны года, смертность от естественных врагов и болезней, охотничье-промысловое использование и др. При определении плотности популяции обращается внимание на точность применения методов. Рассматриваются преимущества и недостатки методов составления кадастра численности лисиц и анализа статистических данных охотничьего промысла. На основании исследований последних лет со всей настойчивостью делается вывод о необходимости продолжения оральной иммунизации лисиц. Б как зооноз представляет большой риск для здоровья людей и не может быть регулятором популяции лисиц. Предстоит срочное проведение биолого-охото- ведческих исследований и выдвижение новых концепций регулирования численность лисиц (54). В Бельгии в 1994 г. проведены две компании по вакцинации лисиц в ограниченном регионе. Обе они оказались неспособными остановить распространение инфекции из первичных очагов. Полагают, что высокая плотность лисиц приводит к слишком медленному поеданию приманок (88). В Чешской Республике после иммунизации антирабической вакциной Lysvulpen из шт. SAD Bern ВНА появлялись у 90% лисиц и выявлялись в течение года. Через год выжившим лисицам был введен в жевательные мышцы уличный ВБ в виде взвеси тканей слюнной железы естественно инфицированной лисицы. При этом погибла только 1 лисица из 9 зараженных, у которой не было АТ, т.е. защита составляла 89%. Пероральная вакцинация лисиц вакциной фирмы “Bioveta” проводится с 1992 г. В 1989 г. заболела 1501 лисица, в 1994 г. - 221 лисица (87).

Применение инактивированных вакцин. К инактивированным вакцинам интерес ие угас. В РФ разработана инактивированная концентрированная антирабическая вакцина из шт.Щелково-51 (7, 8, 9), репродуцированного культуре клеток ВНК-21, обладающая высокой иммунизирующей активностью. Помимо нее (77) на основе культурального шт.КП-85, фиксированного ВБ, адаптированного к культуре клеток эмбрионов японских перепелов (ЭЯП) с применением отечественных и зарубежных питательных сред, была получена культуральная инактивированная концентрированная вакцина. По данным авторов, шт. КП-85 отличается высокой иммуногенностью, безвредностью, стабильностью репродукции и низкой нейровнрулентностью. При введении собакам в относительно малых концентрациях и объемах (1-2 мл) она сообщает стойкий иммунитет к уличному вирусу (более 300 дн). Для иммунизации животных против Б в России ежегодно применяется более 700 млн. доз культуральных антирабических вакцин из шт. Щелково-51, репродуцированного в роллерном монослое перевиваемых клеток ВНК-21/13 (7). Описан способ получения культуральной антирабической вакцины из шт. Внуково-32 в культуре клеток 3-4-нед сирийских хомячков (10). Разработан способ изготовления инактивированной антирабической вакцины, согласно которому шт. Внуково-32 выращивают в культуре клеток, вирусодержащую жидкость инактивируют последовательно УФ лучами и формалином. Инактивированный вирус концентрируют н очищают с помощью ультрафильтрации через пористые мембраны и гельфильт- рацни на пористых кремнеземах (89). В настоящее время отмечается тенденция отдавать предпочтение инактивированным вакцинам, обладающим большей эффективностью и легкостью применения. Инактивированные вакцины лучше поддаются стандартизации при контроле, минимальная АГ доза соответствует 4,5-1 ME. Если их применяют с адъювантом, они создают иммунитет такой же продолжительности, как и живые вакцины. Получены вакцины с повышенной антигенностью, равной 3-5 ME на дозу (22).

Инактивированную вакцину готовят из фиксированного штамма вируса, выращенного в культуре фибробластов хомячков. Вирус инактивируют p-пропиолактоном и добавляют ГОА и сапонин в качестве адъюванта. Живую вакцину вводят внутримышечно 1-кратно в дозе 2 мл, инактивированную - подкожно 1- и 2-кратно в дозе 2 мл. Предложена вакцина для оральной вакцинации кошек против Б (19). Изучена эффективность культуральной антирабической вакцины на морских свинках в условиях предварительного заражения их фиксированным ВБ (90).

Фирма Мерье (Франция) разработала вакцину из фиксированного вируса, адаптированного вначале к ДКЧ (диплоидные клетки человека), а затем к постоянной линии клеток эмбриона хомячка. Вирус инактивировали Р- пропиолактоном. Испытание вакцины на лабораторных животных, собаках, кошках, КРС, овцах, свиньях и лошадях показало, что у животных всех видов иммунизация сопровождалась прочньм иммунитетом длительностью 1,5-3 г. Ее можно использовать в комбинации с противоящурной вакциной для КРС и свиней, противочумной и лептоспирозной - для собак и вакциной против панлейкопении кошек (56, 57, 78, 79). При 5°С вакцина в течение 3-х лет сохраняла активность. Двукратная прививка ею КРС защищала животных от заражения вирулентным штаммом ВБ. После 1-кратной вакцинации этой вакциной иммунологическая память составляла не менее 16 мес. Устойчивость к заражению сочеталась с высокими титрами ВНА (21). Вакцина из очищенного вируса, размноженного в клетках Vero, после двукратного применения с интервалом 12 мес вызывала напряженый иммунитет продолжительностью до 1,5 лет (60).

В Бразилии готовят инактивированную антирабическую масляно-эмульсионную вакцину из шт. PV, выращенного в монослойной культуре клеток ВНК-21 и инактивированного

БПЛ. Титры АТ сохранялись в течение 2-х лет. Для изготовления инактивированной анти- рабической вакцины выращивают вирус в первичной культуре клеток почки собаки на микроносителе. На одной культуре получают несколько урожаев вируса при замене среды через каждые 4-5 сут. Титр инфекционности такого вируса составлял 6+1 lg ИД50/МЛ. Разработана оптимальная схема учета результатов при применении иммуноферментной тест-системы для определения АГ активности культуральной антирабической вакцины (15).

При крупномасштабном производстве инактивированной вакцины против Б используют постоянную линию клеток Vero, которую размножают на микроносителе в суспензии с использованием возрастающего объема 150-500-1000 мл. При заражении вирусом используют среду без сыворотки. Помимо адъювантов при использовании инактивированных антираби- ческих вакцин применяют иммуномодулятор - у-интерферон (адъювант-модулятор), использование его в короткий промежуток перед введением инактивированного препарата (за 2 ч перед вакцинацией) повышает защитный эффект в 20-77 раз (42). Разработанная и широко применяемая в СНГ вакцина Рабикан из шт. Щелково-51 (7), которая готовится с использованием суспензионной культуры клеток ВНК-21/13 в реакторах типа КМ-2000 (16).

В Тунисе антирабическая вакцина для людей представляет собой 5%-ную взвесь в р-ре сахарозы мозговой ткани зараженных ВБ (шт.УРП) ягнят, инактивированную р- пропиолактоном и лиофилизированную. Антирабическую вакцину для ветеринарной практики готовят аналогичным образом с добавлением в качестве адъюванта ГОА и стабилизатора. Помимо того, получают также вакцину на клетках Vero, зараженных шт. KS2061. Вирус инактивируют p-пропиолактоном затем концентрируют центрифугированием (35000 мин'1) в градиенте плотности сахарозы (86).

Генно-инженерные вакцины. Еще в 1982 г. французские исследователи выделили клон, образующий вирусный белок - поверхностный гликопротеин ВБ. Испытывается вакцина, разработанная Wister Just совместно с Rhone-Merieux. Она содержит рекомбинантный вирус коровьей оспы, несущий ген основного гликопротеина оболочки ВБ. Помимо вышеуказанных вакцин, с 1989 г. в Бельгии успешно применяют рекомбинантную вакцину WTGgRAB (шт. 187XP26D3) для пероральной вакцинации лисиц. Вертолетами разбрасывали приманки, содержащие 108 ТЦД50 рекомбинантного вируса. Показателем поглощения вируссодержащей приманки (биомаркером) являлся тетрациклин (28). Разработана также рекомбинантная антирабическая вакцина с использованием в качестве вектора оспы канареек. Препарат обладал таким же защитным действием, что и рекомбинантная антирабическая вакцина на основе вируса оспы, и применяется в ветеринарной практике (38).

Серологическая оценка поствакцинального иммунитета. Механизм поствакциналь- ного иммунитета окончательно не расшифрован. Имеет значение наличие специфических ВНА в крови и особенно в ликворе. Установлено, что сами клетки головного мозга устойчивы к вирусу. Для выяснения роли поствакцинальных АТ у КРС, привитого живой культуральной и мозговой фенолвакциной, использовали PH на мышах и РДП. Титры АТ после культуральной вакцины варьировали от 1:10 до 1:40, на 60-й день - от 1:20 до 1:30, к 180-му дню - до 149, на 360-й день - 1:59 против 35 ЛД50 вируса. Динамика поствакцинальных АТ в РДП на фенолвакцину показала, что наибольшие титры выявляются в период с 300 по180- й день; на 270 и 360-й дни после вакцинации АТ в РДП уже не обнаруживали. На культуральную вакцину у аналогичной группы КРС АТ в PH были выявлены в период с 10-го по 360-й день, максимальный титр их отмечался с 30-го по 180-й день.

Результаты титрования сывороток в PH показали большую иммуногенность культуральной вакцины. Средний титр ВНА в крови привитых собак через 1, 11, 24, 36 мес составлял 1:512, 1:146, 1:19, 1:6 соответственно.

У ревакцинированных коров ВНА появлялись через 4-8 дн после прививки, у иммунизированных впервые - через 18 дн (титр 1:10-125 и более). У овец, привитых инактивиро ванной культуральной вакциной ВНИТИБП (7), ВНА обнаруживали в PH через 225 дн после первой иммунизации. Активность сывороток, выраженная в международных единицах, варьировала от 0,21 до 2.

Инактивированная вакцина из мозга мышей-сосунов защищала собак от летальной дозы уличного ВБ через 37 мес после иммунизации. При этом средние титры ВНА через 1 и 36 мес составляли 1:512 и 1:16 соответственно, а к моменту заражения титры АТ были минимальными или не обнаруживались совсем. Однако все собаки выдержали летальную дозу вируса. Считают, что определяющим фактором эффективности антирабической вакцины является ее способность стимулировать высокий уровень ВНА в начальный период после иммунизации животного.

Следует учитывать, что для оценки эффективности вакцинации против Б, как правило, используется PH вируса на мышах или в культуре клеток. Процедура эта достаточно трудоемкая и длительная. Предложен ELISA для выявления сывороточных АТ в крови привитых животных. В качестве АГ используют оболочечный IgG ВБ.

Поствакцинальные осложнения. Данный вопрос получил широкое освещение в работах по Б. Значительно большую частоту осложнений при введении вакцины типа Ферми объясняют наличием в препарате не только мозговой ткани, но и незначительного количества живого фиксированного вируса (11). }